Спосіб виділення зооспорангіїв збудника раку картоплі synchytrium endobioticum (schilb) perc. з ґрунту

Спосіб виділення зооспорангіїв збудника раку картоплі Synchytrium endobioticum (Schilb) Реrс. з ґрунту, що включає просушування ґрунту, розтирання гумовим пестиком, просіювання крізь сита, 3 17049 Поставлене завдання досягається тим, що у запропонованому способі шляхом здійснення ряду прийомів у певній послідовності досягається результат, а саме: вдається виділяти зооспорангії збудника раку картоплі з грунту шляхом розтирання грунту, його просіювання крізь сита з порами 1,0мм, 0,5мм, 0,25мм, 0,03мм, промивання ефіром над останнім ситом (0,03мм) для розчинення органічних сполук з грунту і центрифугування в 48,5%ному розчині розчину нагрію йодистого з питомою вагою 1,4; одночасного визначення життєздатності патогена, оскільки розчин натрію йодистого фарбує життєздатні зооспорангії збудника раку картоплі в жовтий колір. Результат, що досягається внаслідок цього, перевищує результат, що досягається при здійсненні інших способів та способупрототипу. 1. Спосіб реалізується при використанні дешевого препарату. 2. Запропонований спосіб займає набагато менше часу. 3. Застосовуються сполуки, які не шкідливі для здоров'я людини. Отже, спосіб, що заявляється, відповідає критерію винаходу "новизна" та "суттєві відміни". Приклади здійснення способів Приклад 1 (прототип) Ґрунтовий зразок (10г) просушують, розтирають гумовим пестиком, просіюють крізь сита з порами 1,0мм та 0,2мм, центрифугують на протязі 2 хвилин при 800об./хв. у чотири-хлористому вуглеці (питома вага - 1,54). При цьому зооспорангІЇ збудника раку спливають на поверхню (в центрифугат), а грунтові суміші випадають в осад. Зооспорангії збирають на годинникове скельце. Виявлення життєздатних зооспорангіїв проводять за допомогою 6-молярного розчину хлористого натрію, при 4 якому відбувається плазмоліз-деплазмоліз спор (цитоплазма відстає від мембрани зооспорангіїв). Їх підраховують під мікроскопом (таблиця). Приклад 2 Ґрунтовий зразок (1г) просушують, розтирають гумовим пестиком, просіюють крізь сита з порами 1,0мм, 0,5мм, 0,25мм та 0,03мм. Над останнім ситом (0,03мм) зразок промивають ефіром для розчинення органічних речовин грунту і центрифугують на протязі 1 хвилини при 3000об./хв. у 48,5% розчині натрію йодистого (нетоксичною речовиною, на відміну від попереднього прикладу, де використовується канцерогенна речовина чотирихлористий вуглець). При цьому зооспорангії збудника раку спливають на поверхню (в центрифугат), а грунтові суміші випадають в осад. Зооспорангії збирають на годинникове скельце. Виявлення життєздатних зооспорангіїв проводять за допомогою їх фарбування за допомогою того ж розчину натрію йодистого. При цьому живі спорангії жовті, зернисті, а нежиттєздатні - порожні, деформовані не фарбуються в жовтий колір. Їх підраховують під мікроскопом. Ідентифікують зооспорангії збудника раку картоплі Synchytrium endobioticum (Schilb) Perc. від інших видів (таблиця 1). Таким чином, одночасно визначається кількість зооспорангіїв патогена, а також їх життєздатність в грунтових зразках. Отримані результати здійснення запропонованого способу виділення зооспорангіїв збудника раку картоплі з грунту не поступається прототипу. Спосіб, що заявляється, має переваги перед прототипом, оскільки його ефективність вища. Позитивний ефект запропонованого способу виділення патогену підтверджує експериментальна перевірка, яка здійснювалась при виявленні зооспорангіїв хвороби з різних регіонів України. Таблиця Кількість виділених зооспорангіїв збудника раку картоплі з ґрунтових зразків, що відібрані в різних регіонах України (по відношенню до способу-прототипу). Патотипи, ізоляти 11 - Міжгірський агресивний (с.Майдан, Міжгірського району, Закарпатської обл.) 13 - Рахівський агресивний (м.Рахів, Закарпатської обл.) 18 - Ясинський агресивний (с.Ясиня, Рахівського району, Закарпатської обл.) 22 - Бистрецький агресивний (с.Бистрець, Верховинського району, Івано-Франківської обл.) Д1 - звичайний (с.Буківка, Герцаївського району, Чернівецької обл.) Д1 - звичайний (с.Красноільськ, Сторожинецького району, Чернівецької обл.) Літературні джерела: 1. Владимирская Н.Н. Пленочный метод определения зараженности супесчаных почв возбудителем рака картофеля Synchytrium endobiodcum Виявлено зооспорангіїв Nal 48,5% (спосіб, що заявляССІ4 (прототип) ється) Кількість Кількість % 42,6±1,1 46,6±1,9 9,3 58,6±2,6 66,3±2,8 13.1 66,6±1,6 73,6±2,9 11,9 46,6±1,9 53,0±2,6 13,8 84,3±1,8 93,6±2,9 11,0 28,3±1,6 32,3±1,9 14,1 (Schilb) Perc. Методические указания. - Л., 1952. 23с. 2. Голик И.В. Состав для выделения зоосппорангиев Synchytrium endobiodcum (Schilb) Perc из 5 17049 раковых наростов картофеля. Авторское свидетельство СССР. №254944, 1970, МПК А01п Кл. 45л, 7/04,09,03, 1970г. 3. Pratt M. The longevity of resting sporangia of Synchytrium endobiodcum (Schilb) Perc. In Soil. GPPO Bull. 1976, 6, 2: p.107-108. 4. Marcus О. Untersuchungen zur Auszahlung von Daursporangien des Kartoffel krebserregers Synchytrium endobiodcum (Schilb) Perc in Bodenproben. Deutsch. Pflanzentzd, 1969, 21,10. Комп’ютерна верстка А. Рябко 6 5. Сурнакова Н.Е. Способ определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля. Авторское свидетельство СССР. №1014880. 03.01.1983г. 6. Яковлева В.А., Карнаухов В.Н. Способ определения жизнеспособности зооспорангиев возбудителя рака картофеля. Заявка №3900318/31-13/6061. 28.05.1986г. 7. Шариков К.Е. Выявление картофельного рака микроанализом. Методические рекомендации. Минск, 1954. - 24с. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601