Метод визначення адекватності компенсації вуглеводного обміну у хворих на цукровий діабет

Метод визначення адекватності компенсації вуглеводного обміну у хворих на цукровий діабет шляхом вимірювання глікованих протеїнів біологічної системи, який відрізняється тим, що у обстежуваного визначають якісний та кількісний вміст глікованих білків з різними періодами життя та напіврозпаду, та по якісному і кількісному вмісту протеїнів з підвищеним глікуванням судять про адекватність компенсації вуглеводного обміну у хворого на цукровий діабет. (19) (21) u200610046 (22) 20.09.2006 (24) 10.07.2007 (46) 10.07.2007, Бюл. № 10, 2007 р. (72) Каліман Віктор Павлович, Каліман Павло Авксентійович, Жуков Віктор Іванович, Кліменко Микола Олексійович, М'ясоедов Валерій Васильович, Кладченко Тамара Вячеславовна, Чех Лілія Олександрівна (73) Каліман Віктор Павлович 3 24502 ливо після зміни режиму терапії. Крім того, на показники глікованого гемоглобіну впливають багато чинників, такі як гемоліз, стан уремії, куріння, вагітність і т.д. Даний метод визначення компенсації вуглеводного обміну є найбільш близьким до того, що заявляється, по технічній сутності та результату, що може бути досягнутий, тому він обраний як прототип. Враховуючи, що реакція неферментативного глікування білків неспецифічна, і при стані гіперглікемії, яка спостерігається при цукровому діабеті, глюкоза крові взаємодіє не тільки з гемоглобіном, а й з іншими білками організму людини і тварини, в основу корисної моделі покладено завдання - розробити новий інформативний і доступний метод визначення компенсації вуглеводного обміну, який може слугувати показником адекватності метаболізму глюкози і ретроспективно відображати структурно-метаболічні порушення гомеостазу глюкози у біологічної системи за різні проміжки часу та дозволяє визначити час початку, періоди та динаміку становлення захворювання на цукровий діабет, діагностувати приховані та преморбідні форми цукрового діабету, прогнозувати клінічний розвиток цукрового діабету, а також розширити арсенал клініко-діагностичних методів. Завдання, покладене в основу корисної моделі, вирішується тим, що високоспецифічними білками до ациклічної форми глюкози є альбумін, фібриноген, кератин та гемоглобін, які мають гарну спорідненість до неферментативного глікування, різні періоди життя та напіврозпаду (від трьохчотирьох діб до декількох років) і доступні клініколабораторні методики визначення. Крім того, корисна модель може використовуватися для діагностики прихованих та преморбідних форм цукрового діабету, а також слугувати для скринінгу хворих на цукровий діабет та становити собою інформативний ретроспективний інтегральний показник адекватності компенсації вуглеводного обміну. Позитивний ефект корисної моделі обумовлений тим, що якісно і кількісно визначаються гліковані білки біологічної системи, за різні проміжки часу, з різними періодами життя та напіврозпаду. Спосіб виконується наступним чином. По перше. У пацієнта беруть цілісну кров і розділяють її для незалежних досліджень на фібріноген, альбумін та гемоглобін. Потім: - Якісно і кількісно визначають глікований фібріноген, що дозволяє провести глікемічний контроль за попередні 72-96 годин та визначити ступінь компенсації вуглеводного обміну хворого на цукровий діабет за попередні 3-4 доби. Одиниці вимірювання: мікромоль глікованого фібриногену (фр уктозаміну) на 10 міліграмів фібриногену/фібрину (мкмоль ФА/10 міліграмів); - Якісно і кількісно визначають глікований альбумін, що дозволяє провести глікемічний контроль за попередні 19-20 діб та визначити ступінь компенсації вуглеводного обміну хворих на цукровий діабет за попередні три тижні. Одиниці вимірювання: мікромоль фруктозаміну (ФА) на 10 міліграмів альбуміну (мкмоль ФА/10 міліграмів); 4 - Якісно і кількісно визначають глікований гемоглобін, що дозволяє ретроспективно діагностувати наявність некомпенсованої глікемії у обстеженого за останні 90-120 діб та визначити ступінь компенсації вугле водного обміну у хворого на цукровий діабет за попередні 3-4 місяці. По друге. У обстеженого біля кореня зрізають або висмикують волосину разом з волосяним фолікулом. Переводять кератин волосся в розчин за допомогою суміші відновника та детергенту, або будь-яким іншим відомим і доступним способом, що дозволяє зруйнувати суль фідні зв'язки полімеру. Потім якісно і кількісно визначають глікований кератин волосся. Враховуючи, що швидкість росту волосся чітко обмежена 0,37 мм на добу, можна заздалегідь вибрати строго певний часовий інтервал, за який необхідно ретроспективно провести глікемічний контроль та визначити часові періоди і ступінь структурно-метаболічних порушень гомеостазу глюкози хворого на цукровий діабет. Одиниці вимірювання: мікромоль глікованого кератину (фр уктозаміну) (ФА) на 10 міліграмів кератину (мкмоль ФА/10 міліграмів). Метод, що заявляється, ілюструє наступний приклад. Приклад № 1. У хворого на цукровий діабет беруть з вени цілісну кров і розділяють її для незалежних досліджень на фібриноген, альбумін та гемоглобін. Для кількісного визначення глікованого фібриноген) 3 мл крові, змішують з 0,3 мл 3,7 % цитрату натрію. З плазми виділяють фібриноген. Потім виділені 10 міліграм фібриногену інкубують на протязі трьох з половиною годин при t° 100°С з 2мл насиченої щавлевої кислоти. Після охолоджування 1мл 20% трихлороцтової кислоти додають в пробірку і центрифугують протягом 15 хвилин при 3000 об/хв. 2 проби супернатанта (по 1мл кожна) відбирають і відставляють. Одну інкубують з 0,25мл насиченого розчину тіобарбітурової кислоти (дослідна проба), іншу - з 0,25мл дистильованої води (контрольна проба). Обидві пробірки інкубують протягом 50 хвилин при t° 40°С. Вимірювання проводять на спектрофотометрі в кюветах з довжиною оптичного шляху 1см, проти контролю, на хвилі 443нм. Для калібрування використовують серію розчинів по 1 ммоль/л фруктози. Для кількісного визначення глікованого альбумін) 3мл крові, змішують з 0,3мл 3,7% цитрату натрію. З плазми виділяють альбумін шляхом висолювання глобулінів сульфатом або сульфітом натрію, або будь-яким іншим шляхом. Потім 10 міліграмів виділеного альбуміну інкубують протягом трьох годин при t° 100С° з 2,0мл насиченою щавлевої кислоти. Після охолоджування додають в пробірку 1мл 20% трихлороцтової кислоти та центрифугують протягом 10 хвилин при 3000об/хв. Потім 2 проби супернатанту (по 1мл кожна) відбирають і відставляють. Одн у інкубують з 0,25мл насиченого розчину тіобарбітурової кислоти (дослідна проба), іншу - з 0,25 мл дистильованої води (контрольна проба). Обидві пробірки інкубують протягом 50 хвилин при t° 40С°. Вимірювання проводять на спектрофотометрі в кюветах з довжиною оптичного шляху 1см проти конт 5 24502 ролю по хвилі 443нм. Для калібрування використовують серію розчинів по 1ммоль/л фр уктози. Для кількісного визначення глікованого гемоглобіну з 3,0мл цілісної крові готують гемолізат. Потім, для встановлення вмісту глікованого гемоглобіну, до гемолізату додають фосфорну кислоту і вносять отриману композицію в пробірки, що щільно закриваються гумовими пробками із заздалегідь уколеною в них ін'єкційною голкою. Проби нагрівають протягом 30 хвилин на гліцериновій лазні при t° 100°С. Через 10 хвилин нагрівання з пробок виймають ін'єкційні голки. Після закінчення дегідратації пробірки охолоджують в проточній воді або на крижаній лазні протягом 10 хвилин, потім додають розчин трихлороцтової кислоти. Після перемішування пробу інкубують на водяній лазні протягом 40 хвилин при t° 37°C. Потім вимірюють оптичну щільність розчину. Для калібрування використовують серію розчинів по 1 ммоль/л фруктози. Для кількісного визначення глікованного кератину у хворого на цукровий діабет біля кореня зрізають або висмикують волосину разом з волосяним фолікулом. Переводять кератин волосся в розчин за допомогою суміші відновника та детергенту. Потім 10 міліграмів отриманого розчину кератину інкубують протягом трьох годин при t° 100С° з 2,0мл насиченої щавлевої кислоти. Після охолоджування додають в пробірку 1мл 20% трихлороцтової кислоти та центрифугують протягом 10 хвилин при 3000об/хв. Потім 2 проби супернатанту (по 1мл кожна) відбирають і відставляють. Одну інкубують з 0,25мл насиченого розчину тіобарбіту Комп’ютерна в ерстка Д. Шев ерун 6 рової кислоти (дослідна проба), іншу - з 0,25мл дистильованої води (контрольна проба). Обидві пробірки інкубують протягом 50 хвилин при t° 40С°. Вимірювання проводять на спектрофотометрі в кюветах з довжиною оптичного шляху 1см проти контролю за хвилею 443нм. Для калібрування використовують серію розчинів по 1 ммоль/л фр уктози. Враховуючи, що швидкість росту волосся чітко обмежена 0,37мм на добу, лікар заздалегідь вибирає строго певний часовий інтервал, за який ретроспективно бажає провести контроль адекватності гіпоглікемичної терапії у хворого на цукровий діабет. Для зручності можна скласти таблицю де вказують отримані показники кількісного вмісту глікованого альбуміну, фібриногену, гемоглобіну та кератину. Ураховуючи що глікований фібриноген ретроспективно отображає глікемичний стан за попередні 72-96 години, глікований альбумін отображає глікемичний стан за попередні 19-20 доби, глікований гемоглобін отображає глікемичний стан за попередні 90-120 доби, а глікований кератин волосся отображає глікемичний стан за той час за який досліджуваний фрагмент волосся виріс - лікар діагностує часові періоди компенсованого чи некомпенсованого глікемичного стану, визначає компенсованість гіпоглікемичної терапії та призначає, контролює і коректує гіпоглікемічну терапію у хворого на цукровий діабет. Допускаються незначні відхилення від вказаного способу та заявлених параметрів, що не впливають на кінцевий результат. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601