Спосіб діагностики ішемічно-реперфузійних пошкоджень міокарда та відкривання мітохондріальної пори

1. Спосіб діагностики ішемічно-реперфузійних пошкоджень міокарда та відкривання мітохондріальної пори, що включає визначення маркера міокардіального пошкодження в крові, який відрізняється тим, що як маркер міокардіального пошкодження визначають мітохондріальний фактор (МФ), величину якого визначають в сироватці 3 26385 4 обмежити їх використання. А тривалість підвидослідження проводять на спектрофотометрі СФщення цих маркерів пошкодження в крові до 7-8 46. діб і довше не дають змоги діагностувати розвиток Корисна модель пояснюється з використанням повторного ішемічного пошкодження міокарда у наступних фігур. пацієнта. Фіг.1. Величина МФ у періферійній крові, взяОстаннім часом багато уваги приділяється дотої у донорів з ліктьової вени. Позначення: D - опслідженню ролі мітохондрій та утворенню і відтична густина; 1- всі донори (n=20); 2 - донори 35криттю мітохондріальних пор в розвитку серцевих 60 років (n=9); донори 28-30 років (n=11). пошкоджень. Сучасні наукові данні та результати Фіг.2. Величина мітохондріального фактору, наших власних досліджень свідчать про те, що що визначається в крові з правого передсердя у мітохондрії є універсальним субклітинним модулялюдини при операціях зі штучним кровообігом. тором, який визначає первісний рівень сигнально Позначення: D- оптична густина; 1 - контроль; 2регуляторних контурів організму. Пригнічення мі10хв.кардіоплегії; 3-90хв. кардіоплегії; 4 - репертохондріального дихання, оксидативний стрес, фузія 2хв.; 5 - реперфузія 5хв. підвищення внутрішньоклітинної концентрації Фіг.3. Кореляція між максимальним значенням кальцію призводять до відкриття мітохондріальної мітохондріального фактору та біохімічними показпори (МП), що в залежності від тривалості її відниками пошкодження тканини. Позначення: r - інкриття призводить до розвитку ауто- і паракринних декс кореляції; 1 - креатинфосфокіназа; 2 - мввпливів, локальних апаптотичних процесів, або ж креатинфосфокіназа; 3 - лактатдегідрогеназа; 4 до серйозних некротичних пошкоджень. аспартатамінотрансфераза. В попередніх дослідженнях, проведених як на Далі приводиться описання здіснення корисної ізольованих препаратах так і на цілому організмі моделі. тварин, корисна модельниками було виявлено У пацієнта набирають кров з ліктьової вени вивільнення мітохондріального фактору (МФ) з (при кардіо-хірургічних операціях для кращого момітохондрій при утворенні/відкритті мітохондріальніторингу доцільно брати кров з правого передсених пор внаслідок ішемії/реперфузії в певному рдя через вставлений в яремну вену катетер) в діапазоні довжини хвиль. об'ємі 7-10мл. Проби крові центрифугують при Тому задачею корисної моделі було покра3000об/хв протягом 15 хвилин. Сироватку відбищення діагностики ішемічно-реперфузійних порають піпеткою і додають трихлорооцтову кислоту шкоджень міокарду та відкривання мітохондріаль(ТХО). Для забезпечення повного осадження білків ної пори, а саме ранньої, за допомогою змішують 1мл сироватки з 0,1мл 50% ТХО. Розчин визначення в крові мітохондріального фактору ретельно перемішують скляною паличкою. Потім (МФ). центрифугують при 3000об/хв. протягом 15 хвиТехнічний результат, що буде отриманий в релин. Після цього обережно видаляють надосадкозультаті поставленої задачі, полягає у своєчаснову рідину і фільтрують її через фільтрувальний му призначенні адекватної терапії. папір. Дають відстоятись 10хв. і проводять спектПоставлена задача вирішується завдяки тому, рофотометричні вимірювання розчину. що способі, який включає визначення маркера Величину оптичної густини поглинання розчиміокардіального пошкодження в крові, згідно коринів вимірюють за допомогою спектрофотометра. В сної моделі, в якості маркера визначають мітохонданому способі використовується спектрофотодріальний фактор (МФ), величину якого визначаметр СФ-46. Для вимірювання використовують ють в сироватці на спектрофотометрі в кварцові 10-ти міліметрові кювети. Вимірювання ультрафіолетовому спектрі, в діапазоні довжин проводять в ультрафіолетовій ділянці спектру при хвиль 230-260нм, за різницею між максимальним довжинах хвиль від 230нм до 260нм. Причому для значенням екстинції величини мітохондріального кожної довжини хвилі реєструють спочатку знафактора (МФ), що знаходиться праворуч в діапачення екстинції контрольної проби, а потім - дослізоні 230-260нм та мінімальним значенням, розтаджуваної. В якості контролю використовується шованим ліворуч у цьому діапазоні довжини хвилі. дистильована вода. При математичному підрахунСироватку венозної крові одержують повним ку визначається різниця між максимальним знаосадженням білків центрифугуванням венозної ченням екстинції величини МФ, що знаходиться крові при 3000об/хв протягом 15 хвилин та повтоправоруч в діапазоні 230-260нм та мінімальним рного центрифугування з додаванням 50% трихзначенням, розташованим ліворуч у цьому діапалороцтової кислоти (ТХО), з розрахунку на 1мл зоні довжини хвилі. сироватки - 0,1мл 50% ТХО. Спектрофотометричні Приклад 230нм 2,95 235нм 2,97 240нм 3,01 Максимальне значення екстинції при цьому є 3,15, а мінімальне - 2,95. Різниця складає 0,3. Отже величина МФ становить 0,3. Так, в клінічних дослідженнях, проведених із застосуванням оптичної густини поглинання в ультрафіолетовому спектрі при довжині хвиль 230260нм. Дослідження було проведено у 20 донорів, які 245нм 3,07 250нм 3,15 255нм 3,08 260нм 3,04 на момент дослідження не висували скарг на стан здоров'я, а данні медичного обстеження не виявили гострих або загострення хронічних захворювань. Підвищення оптичної густини в сироватці крові, взятої з ліктьової вени було у межах 0,010,15 (Фіг.1). В дослідженнях, проведених у 11 пацієнтів під час кардіохірургічних операцій зі штучним крово 5 26385 6 обігом та кров'яною кардіоплегією, на етапі кардіопартатамінотрансферазою (Фіг.3). плегії величина МФ в сироватці крові, взятої з праОсновною перевагою даного способу перед вого передсердя зростала майже в тричі, а у перііншими є те, що завдяки дуже ранньому і швидкоод реперфузії вже у перші хвилини була вищою за му реагуванню мітохондрій на ішемію тканини та вихідний показник більш, ніж у три рази. У першу збільшенню величини МФ можливо використовудобу в післяопераційному періоді значення МФ в вати запропонований спосіб як ранній маркер відпериферійній крові знижувалось, проте було викриття мПТП in vivo та як маркер ішемічних пощим за фоновий рівень у двічі (Фіг.2). шкоджень серця, а також як один із можливих Результати, що були отримані із застосуванконтрольних тестів при розробці нових методів ням цього способу виявили високу кореляцію з профілактики та корекції ішемічно - реперфузійних іншими неспецифічними маркерами пошкодження порушень роботи серця, який не потребує великих серця: креатинфосфокіназою, мвгрошових вкладень. креатинфосфокіназою, лактатдегідрогеназою, ас Комп’ютерна верстка М. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601