Спосіб визначення чутливості бактерій та грибів до антибіотиків при культивуванні їх в клітинах людини

Спосіб визначення чутливості бактерій і грибів до антибіотиків при культивуванні їх в клітинах людини, що включає вирощування бактерій і грибів, виділених від хворого, в поживних середовищах з використанням дисків з антибіотиками, який відрізняється тим, що включає попереднє культивування виділених від хворого бактерій або грибів в перещеплюваній культурі клітин людини протягом 24 годин при 37 °С з подальшим виявленням тих антибіотиків, які не призводять до зміни чутливості мікроорганізмів в умовах, наближених до організму. (19) (21) u200611225 (22) 24.10.2006 (24) 10.10.2007 (72) РИБАЛКО СВІТЛАН А ЛЕОНТІЇВН А, U A, ПОКАС ОЛЕНА ВІКТОРІВНА, UA, ДЄЄВ ВАЛЕРІЙ АРКАДІЙОВИЧ, UA, ШАПІРО АН АТОЛІЙ ВЄНІАМІНОВИЧ, UA, ЛЯСКОВСЬКИЙ ТАРАС МИ ХАЙЛОВИЧ, UA, САЄНКО ВАЛЕРІЙ ФЕОДОСІЙОВИЧ, U A (73) РИБАЛКО СВІТЛАН А ЛЕОНТІЇВН А, U A, ПОКАС ОЛЕНА ВІКТОРІВНА, UA, ДЄЄВ ВАЛЕРІЙ АРКАДІЙОВИЧ, UA, ШАПІРО АН АТОЛІЙ ВЄНІАМІНОВИЧ, UA, ЛЯСКОВСЬКИЙ ТАРАС МИ ХАЙЛОВИЧ, UA, САЄНКО ВАЛЕРІЙ ФЕОДОСІЙОВИЧ, U A 3 26679 постановці тесту визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків, а також з кожною новою серією середовищ або дисків. Критеріями придатності останніх для досліджень були діаметри зон затримки росту навколо дисків з антибіотиками, які утворювалися при посіві еталонних штамів Escherichia соlі АТСС 25922, Staphylococcus aureus ATCC25923 і Pseudomonas aeruginosa АТСС27853, що отримані з музею живих культур мікроорганізмів Інституту епідеміологіі та інфекційних хвороб їм. Л.В. Громашевського. 4 бактерій змінилася на помірну стійкість до цих антибіотиків. До штаму №598 відмічена зміна чутливості в резистентність до амікацину, цефотаксиму, цефтріаксону, цефтазидиму, тому вони не рекомендуютьтся для лікування. В даному випадку слід призначати тільки один антибіотик - іміпенем, до якого чутливий цей штам. З наведених даних видно, що запропонований спосіб визначення зміни чутливості до антибіотиків допомагає призначати дійсно чутливий ефективний антибіотик. Приклад 2. Вивчення зміни чутливості грибів роду Таблиця 1 Candida. Чутливість ентеробактерій до антибіотиків при культивуванні їхвивчення зміни на Для в культурі L41 чутливості до антибіотиків протязі 24 годин грибів роду Candida суспензію в концентрації 108клітин/мл вносили в культуру клітин L41 та інкубували Штами ентеробактерій, мм 24год при 37°С. Визначали чутливість грибів до антибіотиків методом диск-дифузії до Назва 724 705 598 культивування та після культивування. Одержані антибіотиків Вихід Після Після Після Вихідна Вихідна результати представлені в табл.2. - на пасивування пасивування пасивування Ампіцилін 06 06 06 16 06 06 Тетрациклін 06 06 06 20 06 06 Тобраміцин 06 06 06 15 06 06 Амікацин 06 06 06 22 21 06 Визначення антибіотикочутливості грибів роду Candida кул Хлорамфенікол 25 06 06 06культурі клітин L41 06 06 Ципрофлоксацин 26 06 26 17 06 06 Цефотаксим 24 06 25 22 ЗО 06 Штами грибів роду Candida, mm Цефазолін 24 06 06 24 12 06 1717 Назва 1771 Цефтріаксон 25 06 26 19 антибіотика Вихідна 26 06 Після Вихідна Після Вихідна Цефтазидім 26 06 26 30 25 06 пасивування пасивування Амоксіцилін/клав23 06 15 06 06 06 20 06 20 15 Флуконазол 12 ланова кислота Клотримазол 23 06 06 06 06 Іміпенем 25 26 25 30 Ністатин24 23 зо 19 22 17 25 Амфотеріцин 15 10 18 06 17 Результати дослідження виявили, що культивування ентеробактерій (Е.соlі №724, Е.соlі Згідно одержаних даних зміна чутливості на №705, Е.соlі №598) в культурах клітин L41 резистентність встановлена у штамів №1759, 1771 призводить до зміни чутливості до антибіотиків в до амфотеріцину, а у №1717 до клотримазолу та резистентність і навпаки. Це означає, що флуконазолу. Таким чином, лікування цими чутливість до таких антибіотиків, як антибіотиками хворих, від яких ізольовані ці штами хлорамфенікол, ципрофлоксацин, цефотаксім, буде неефективним. цефазолін, цефтріаксон, цефтазидим, Використана література амоксіцилін/клавуланова кислота штаму №724 1. Серия технических докладов ВОЗ, №673. змінюється і в організмі людини при взаємодії з Женева - 1984 - с.147-169 (Критерии для клітинами органів може переходити в интерпрретации результатов испытаний, резистентність. Тому для штаму №724 основанные на методе Бауер-Кирби). ізольованого від хворого ефективним є тільки один 2. Жалко-Титаренко В.П., Бондаренко Б.Н., антибіотик - іміпенем. Григорьев А.Н. Динамика взаимодействия шигелл Для штаму №705 ми відзначаємо зворотну с эпителием в процессе заражения. ЖМЭИ, 1986, закономірність, коли резистентні штами №4. перетворюються в чутливі до таких антибіотиків, 3. Anvar Y., van Biesen M., Dasgupta К. et al. як ампіцилін, тетрациклін, тобраміцин, амікацин, Ineraction of biofilm bacteria with antibiotics in a novel цефазолін. Але цей факт не має відношення до in vitro chemostat system. Antimicrob.Agents практичного використання антибіотиків, так як Chemother. 1989, 33:, 1824-1826/ вони були первинно резистентні і не пропонуються 4. An var H., Costerton J.W. Effective use of до використання. За даними антибіотикограми antibiotics in the treatment of biofilm-associated штаму №705 для лікування слід рекомендувати infections. ASM News, 1992, 58: 665-668. цефотаксим, цефтазидим, іміпенем. 5. Gilbert P., Collier J. Brown M.R. Influence of Такі антибіотики, як ципрофлоксацин, growth rate on susceptibility to antimicrobial agents: цефтріаксон, амоксіцилін/клавуланова кислота не biofllms, cell cycle, dormancy, and stringent слід рекомендувати тому, що при культивуванні в response. Antimicrob. Agents Chemother. 1990, 34: перещеплювальній культурі клітин L41 чутливість 1865-1868. 5 26679 6. Costerton J., Cheng K.-J. Geesey G.G. An var H. Bacterial biofllms in nature and disease. Ann.Rev. Microbiol. 1987, 41: 435-464. 7. Gilbert P. Attachment and biofilm formation: the critical event in microbial pathogenesis. J.Pharm.Pharmacol. 1997, 49 (suppl.4): 8: 6