Спосіб визначення функціональної неповноцінності імуноглобулінів класів м, g, a у хворих з алопецією

Спосіб визначення функціональної неповноцінності імуноглобулінів класів М, G, А у 3 27652 спостереження за перебігом хвороби і клінічною ефективністю лікування. Аналіз заявленого технічного рішення дозволив виявити наступні відмінності: - сполучення трьох досліджуваних зразків сироватки крові хворих на алопецію з відповідними моноспецифічними сироватками проти імуноглобулінів G, М, А у співвідношенні 10:1; - у о триманих трьох біологічних суміша х визначають вміст небілкових SH-груп, порушення змін у всіх або навіть в одній із них вказує на порушення функціонального стану імуноглобулінів. Заявлена сукупність ознак дозволяє судити про якісну діагностику неповноцінності імуноглобулінів при їх нормальній кількості в крові. Визначення вільних небілкових SH-груп відоме в еритроцитах, лейкоцитах, сироватці крові для діагностики захворювань крові, інфарктів внутрішніх органів та інш. Але визначення вільних небілкових SH-груп у трьох зразках біологічної суміші сироватки крові, змішаної з відповідними моноспецифічними сироватками (МСС) проти igG, IgM і Ig A для діагностики функціональних порушень імуноглобулінів при алопетіії невідоме. Спосіб виконується наступним чином. Здійснюють з’єднання трьох досліджуваних зразків сироватки крові досліджуваного відповідно з МСС проти імуноглобулінів G, М, А у співвідношенні 10:1. Три зразка сироватки крові взяти для уточнення реакції поміж імуноглобулінами G, М, А, що знаходяться у сироватці крові з відповідними МСС проти цих імуноглобулінів. Причому, для створення оптимального стеохімічного співвідношення між реагуючими центрами імуноглобулінів G, М, А з відповідними сироватками проти імуноглобулінів G, М, А досліджуваним шляхом було обрано вказане співвідношення досліджуваної сироватки і імуноспецифічної сироватки, котре склало 10:1. У обстежуваного натще виконують забір венозної крові у суху стерильну пробірку, з якої отримують сироватку крові традиційним методом. У цій сироватці спочатку визначають спонтанний вміст вільних небілкових SH-груп шляхом амперметричного титрування [2]. Потім у три нових зразка цієї ж сироватки крові хворих на алопецію додають відповідно моноспецифічні сироватки і виконують термостатування сумішей при температурі 37°С на протязі 10хв. У кожній досліджуваній біологічній суміші визначають вміст SH-груп. Відхилення цього показника від нормальних на величину М±s свідчить про наявність функціональної неповноцінності імуноглобулінів. Приклад 1. У хворого P., 37 років, з легкою формою гніздової алопеції виконали взяття венозної крові в суху стерильну пробірку. Сироватку крові отримували і традиційним способом. В ній визначали вміст імуноглобулінів: IgG - 11,04мг/мл (норма - 11,55±0,58), IgM - 2,82мг/мл (2,84±0,14), IgA - 2,08мг/мл (1,99±0,09), котрий не відрізнявся від норми. 4 Потім відбирали три нових зразка тієї ж СК по 900мкл і до кожної з них додавали по 100мкл МСС відповідно проти імуноглобулінів G, М, А. Суміші розміщували у термостат на 60хв при температурі 37°С. Після цього у кожній біологічній суміші визначали вміст вільних небілкових SH-груп. Так, кількість SH-груп у суміші СК+МСС anti- IgG дорівнює 30,00мкмоль/л (норма 23,11±1,75); вміст SH-груп у суміші СК+МСС anti- IgM. Склав 15,00мкмоль/л (норма 16,48±1,74), а у суміші СК+MCC anti- IgA - 26,25мкмоль/л (16,29±1,91). Суттєве підвищення цих показників у сумішах СК+MCC anti- IgG і СК+MCC anti- IgA, а саме на величину М± s свідчить про конформаційні зміни білкової молекули відповідних імуноглобулінів і про наявність порушень гуморальної ланки у хворих за гіперергічним типом. Це підтверджується тим, що після лікування хворого поліферментним препаратом вобензим вміст SHгруп прийшов до нормального значення: відповідно 24,45мкмоль/л; 15,51мкмоль/л та 17,12мкмоль/л. Приклад 2. У хворого З., 19 років, з субтотальною формою гніздовою алопеції забрали венозну кров у суху стерильну пробірку. Сироватку крові одержували звичайним шляхом. В ній визначили вміст імуноглобулінів: IgG - 11,28мг/мл (норма 11,55±0,58), IgM - 2,82мг/мл (2,84±0,14), IgA 1,86мг/мл (1,99±0,09), котрий не відрізнявся від норми. Потім відбирали три нових зразка тієї ж сироватки крові по 900мкл і до кожної із них додавали по 100мкл моно специфічної сироватки (МСС) - відповідно проти імуноглобулінів G, М, А. Суміші помішували у термостат на 60 хвилин при температурі 37°С. Після цього у кожній біологічній суміші визначали вміст вільних небілкових SHгpyп. Так, кількість SH-груп у суміші СК+MCC antiIg дорівнює 11,25мкмоль/л (норма 23,11±1,75); вміст SH-груп суміші СК+MCC anti- Ig M склав 15,00 (норма 16,48±1,74), а у суміші СК+MCC anti- IgA 8,2мкмоль/л (16,23±19,1). Суттєве зниження цих показників, особливо у суміші СК+MCC anti- IgG, свідчить про конфірмаційні зміни білкової молекули відповідних імуноглобулінів і підтверджує порушення гуморальної ланки імунітету у хворого за гіпоергічним типом. В порівнянні з прототипом, запропонований спосіб є більш інформативним, чутливим, має більш високу діагностичну цінність, аніж просто кількісне визначення імуноглобулінів G, М, А. Крім того, він дозволяє уперше виявити гіпер- або гіпоергічні порушення гуморальної ланки імунної системи у хворих алопецією за феноменом підвищення або зниження вільних небілкових SHгpyп при взаємодії їх сироватки крові з МСС проти імуноглобулінів G, М, А, що дасть можливість коригувати методи лікування алопеції. Література: 1. Гаджигороева А.Г., Пухальский А.Л., Суворова К.Н. Активность раз личных субпопуляций Т-клеток-хелперов в зависимости от клинической формы гнездной алопеции// Вестн. дерматол, и венерол., 1999, №4. - С.69-71. 5 27652 2. Справочник/ Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. Под ред. В.В. Меньшикова. -М.: Медицина, 1987. - С.284-292, 397с. 3. Литинская Т.А. Иммунные нарушения у больных круговидным облысением, принципы их коррекции// Лабораторная диагностика. - 1998. №3. - С.30-32. 4. UA, Деклар. патент №24862 А, МПК G01N33/68 G01N27/26 Спосіб діагностики СНІДу / Костюшов В.В., Костюшова Н.В., Тимчишин О.Л., Морозкін В.В. - №97063274; Заявл. 27.06.97; Опубл 06.10.98. 5. UA, Деклар. патент №20935 А, МПК А61В10/00, G01N27/26 Спосіб визначення інфаркту та пристрій для його здійснення/ В.В. Костюшов. - №96124935; Заявл. 27.12.96; Опубл. 27.02.98. 6