Спосіб визначення стану функціональної недостатності альвеолярних макрофагів у хворих на хронічні неспецифічні захворювання легень

Спосіб визначення стану функціональної недостатності альвеолярних макрофагів у хворих на хронічні неспецифічні захворювання легень шляхом дослідження клітин харкотиння, який відрізняється тим, що визначають збудник Pneumocystis сагіпм у харкотинні хворого та при його наявності визначають стан функціональної недостатності альвеолярних макрофагів Винахід відноситься до галузі медицини, а саме пульмонології, терапії і може бути використаний для визначення стану функціональної недостатності альвеолярних макрофагів у хворих на хронічні неспецифічні захворювання легень, що дозволяє призначити при лікуванні цієї категорії хворих адекватної імуномодулюючої терапії Відомий спосіб визначення стану функціональної недостатності альвеолярних макрофагів (AM) у хворих на хронічні неспецифічні захворювання легень (ХНЗЛ) шляхом дослідження їх КІЛЬКОСТІ та функціональної активності у бронхоальвеолярному змиві (БАЗ), якій одержують під час бронхоскопічного дослідження [див Унифицированные иммунологические методы обследования больных на стационарном и амбулаторном этапах лечения Метод, рекомендации / КНИИФП, Киев, 1988 - 18 с ] , та у випадку, якщо показники КІЛЬКОСТІ І функціонального стану AM (поглинальна та перетравлююча здатність, кисневозалежний метаболізм за НСТ-тестом) нижче, ніж у контрольній групі, визначають наявність стану функціональної недостатності альвеолярних макрофагів обсягу бронхоальвеолярного змиву необхідне введення у бронхолегеневу систему хворого 50 70мл рідини, що також є небайдужими для хворого й ІНОДІ може викликати пневмонії, - із бронхоальвеолярного змиву не завжди вдається одержати достатню КІЛЬКІСТЬ AM для імунологічного дослідження і можуть бути потрібні додаткові бронхоскопічні дослідження, - для проведення імунологічних досліджень AM необхідно мати імунологічну лабораторію, яка стільки у великих науково-дослідних центрах, - проведення бронхоскопічного та імунологічного досліджень потребують значних коштів В основу винаходу поставлена, задача удосконалити спосіб визначення стану функціональної недостатності альвеолярних макрофагів у хворих на хронічні неспецифічні захворювання легень, в якому шляхом дослідження у харкотинні хворого непрямого показника - наявності збудника Pneumocystis сагіпм - досягається скорочення терміну дослідження, спрощення та здешевлення способу, що дозволяє призначити ВІДПОВІДНІ терапевтичні заходи Поставлена задача вирішується тим, що у способі визначення стану функціональної недостатності альвеолярних макрофагів у хворих на хронічні неспецифічні захворювання легень шляхом дослідження клітин харкотиння, згідно з винаходом, визначають збудник Pneumocystis сагіпм у харкотинні хворого, та при його наявності визначають стан функціональної недостатності альвеолярних макрофагів Відомо, ЩО Pneumocystis саппм (пневмоцисти Карний) є умовно-патогеними пневмотропними Основними недоліками цього способу - прототипу є те, що - для його здійснення потрібен тривалий час, що означає можливість одержання результату досліджень лікарем-лаборантом через 2 доби, - бронхоскопічне дослідження є достатньо важким для хворого дослідженням, так як пов'язане з введенням пристрою (бронхоскопу) в бронхіальну систему, що ІНОДІ може погіршити стан хворого, особливо при наявності бронхоспазму, - для одержання необхідного для дослідження ю ю 55202 мікроорганізмами, які відносяться до класу грибів і є позаклітинними паразитами зі строгим тропізмом до легеневої тканини [див ВИЧ-инфекция и СПИД-ассоциируемые заболевания / А Я Лысенко, М X Турьянов, М В Лавдовская, В М Подольский - М 1996 - 624 с ] Весь життєвий цикл пневмоцист проходить в дихальних шляхах, і при розмноженні вони уражують епітелій легень Встановлено, що найважливішою ЛІНІЄЮ захисту проти пневмоцист є альвеолярні макрофаги, які здійснюють знищення мікробу [див Walzer P О Immunological Features of Pneumocystis саппм Infection in Humans // Clm Diagn Lab Immunol 1999 - №6 - P 149-155] В імунокомпетентних осіб при наявності специфічних антитіл, які фіксують комплемент на поверхні мікроба, пневмоцисти фагоцитуються і руйнуються саме альвеолярними макрофагами Повноцінне знищення пневмоцист можливо лише при достатньому рівні активності фагоцитів [див Martin II W J , Pasula R Role of Alveolar Macrophages in Host Defense against Pneumocystis canmi // Am J Respir Cell Мої Biol 2000 - Vol 23 - P 434 - 435] Таким чином, наявність пневмоцист у харкотинні хворого свідчить про недостатність імунної системи хворого, зокрема, про стан функціональної недостатності AM та їх неспроможність знищати пневмоцисти Спосіб здійснюють наступним чином Хворому на ХНЗЛ призводять паразитолопчне дослідження з мікроскопічним аналізом харкотиння на наявність пневмоцист Для його здійснення свіже харкотиння розміщують в консервуючому середовищі [див А с 1601546 СССР G01N1/28 Способ определения возбудителей гельминтозов и протозоозов / Падченко И В, Локтева И М , Таран В В (СССР) - № 4402936/30-14, Заявлено 12 01 88, Опубл 23 10 90, Бюл №39 - с 52], після чого роблять мазки, які фарбують 1% розчином толуїдинового синього з наступною їх мікроскопією й підрахуванням пневмоцист в 0,1 мл харкотиння [див Пневмоцистоз и его профилактика Временные метод Рекомендации / ЕП Ковалева, В А Рябцева, И П Иваненко и др - М 1986 - 16 с] При наявності пневмоцист у препараті харкотиння визначають стан функціональної недостатності альвеолярних макрофагів Здійснення способу забирає 2 години часу Наводимо конкретні приклади здійснення способу Приклад 1 (за способом-прототипом) Хворий А П , 44 років (історія хвороби №13), знаходився на стаціонарному лікуванні в пульмонолопчному відділенні клінічної лікарні нафтопереробної промисловості із діагнозом хронічний необструктивний бронхіт, фаза загострення, дихальна недостатність (ДН) 1 ступеню, пневмоцистоз, ерозивний гастрит У препараті з харкотиння хворого було визначено 40 пневмоцист З метою імунологічного обстеження хворому було проведено бронхоскопічне дослідження під місцевою анестезією фіброскопом "Ohmpus" із проведенням бронхоальвеолярного лаважу з 70мл стерильного фізіологічного розчину для одержання Юмл бронхоальвеолярного змиву, в якому про водилось дослідження клітин місцевого (легеневого) імунітету шляхом під рахування відсотку альвеолярних макрофагів (AM) серед клітин БАЗ [див Унифицированные иммунологические методы обследования больных на стационарном и амбулаторном этапах лечения Метод, рекомендации / Киевский НИИ фтизиатрии и пульмонологии - Киев, 1988 - 1 8 с , Хаитов РА , Пинегин Б В Экологическая иммунология - М ВНИРО, 1995 168 с ] з визначенням їх життєздатності, адгезивноі (Goldberg A F , Barka T Acid phosphatase activity in human blood cells // Nature -1962 -V 195 -P 297) і поглинальної та перетравлюючої здатності AM (див Ивчик Т В К оценке диагностического и прогностического значения функциональной активности альвеолярных макрофагов у больных хроническим бронхитом // Клиника и лечение хронического бронхита - Ленинград, 1981 - с 40], рівня кис незалежно го метаболізму [див Земсков А М Некоторые подходы к оценке вторичных иммунодефицитов // Иммунодефицита и аллергия Тез докл -М Медицина, 1986 -с 32] В результаті імунологічних досліджень було встановлено, що AM виділені у достатній КІЛЬКОСТІ й придатні для досліджень (встановлений задовільний рівень їх життєспроможності - 62,0% та адгезивності - 70,0%) КІЛЬКІСТЬ AM була у хворого значно меншою, ніж у нормі, і серед клітин БАЗ складала 49,0% [у здорових - (87,5 ± 10,0)%], поглинальна активність AM коливалась у межах норми показник фагоцитозу (Пф) AM складав 59,0% [у здорових - (59,2 ± 2,5)%], перетравлююча здатність була також суттєво нижчою фагоцитарне число (ФЧ) AM складало 5,7ум од [у здорових (8,1 ± 0,3) ум од ], а НСТ-тест, який характеризує активність AM, не тільки не був підвищеним, що природно для запального процесу, але був нижче за норми і складав 38,0% [в групі здорових - (50,6 ±1,8)%] Таким чином, у хворого визначався стан функціональної недостатності AM, що дозволило призначити йому ВІДПОВІДНІ ліки з імуномодулюючою дією Проте на здійснення цього способу лікарлаборант витратив тривалий час (2 робочих дні), що було можливо лише при наявності наборів коштовних реактивів Приклад 2 (за способом, що заявляється) Хворий Б Ш , 40 років (історія хвороби №1764), знаходився на стаціонарному лікуванні в пульмонолопчному відділенні клінічної лікарні нафтопереробної промисловості із діагнозом хронічний обструктивний бронхіт, фаза загострення, емфізема, пневмосклероз, ДН 2 ступеню, пневмоцистоз, хронічний холецистопанкреатит При мікроскопічному аналізі харкотиння хворого зміст пневмоцист складав ЗО пневмоцист в препараті, що за методом, що пропонується, дозволило припустити у хворого наявність функціональної недостатності AM і призначити йому відповідну імуномодулюючу терапію Імунологічні дослідження з клітинами БАЗ, одержаними у хворого під час бронхоскопічного дослідження із проведенням бронхоальвеолярного лаважу, підтвердили це припущення, оскільки , у хворого був виявлений стан функціональної недостатності AM КІЛЬКІСТЬ AM складала серед клі 55202 тин БАЗ 12,0% [в групі здорових - (87,5 ± 10,0)%], поглиналына аісгивність AM була у межах норми Пф AM складав 66,0% [у здорових - (59,2 ± 2,5)%], перетравлююча здатність була нижчою ФЧ AM дорівнювало 6,5ум од [у здорових - (8,1 ± 0,3)ум од ], а НСТ-тест був також низьким і складав 34,0% [у здорових - (50,6 ±1,8)%] Таким чином, спосіб, що пропонується, дозволив визначити стан функціональної недостатності AM без проведення тривалих, методично складних і коштовних імунологічних досліджень Приклад 3 (за способом, що заявляється) Хвора О А , 28 років (історія хвороби №1381), знаходилась на стаціонарному лікуванні в пульмонолопчному відділенні клінічної лікарні нафтопереробної промисловості із діагнозом бронхіальна астма, персистуючий перебіг, змішаного генезу, середньої важкості, фаза загострення, ДН 1 - 2 ступеню, мюкардюдистрофія, хронічний гастрит При мікроскопічному аналізі харкотиння хворої пневмоцисти не були виявлені, що дозволило встановити у хворої відсутність функціональної недостатності AM і не призначати їй, не дивлячись на персистуючий перебіг захворювання, імуномодулюючу терапію Імунологічні дослідження з клітинами БАЗ, одержаними у хворої під час бронхоскопічного дослідження із проведенням бронхоальвеолярного лаважу, підтвердили це припущення, оскільки, у даному випадку не було виявлено стану функціональної недостатності AM КІЛЬКІСТЬ AM була декілька зниженою і складала серед клітин БАЗ 64,0% [в групі здорових - (87,5 ± 10,0)%], але поглинальна активність AM була навіть підвищеною Пф AM складав 89,0% [у здорових - (59,2 ± 2,5)%], перетравлююча здатність також була задовільною ФЧ AM дорівнювало 8,7 ум од [у здорових - (8,1 ± 0,3) ум о д ] , НСТ-тест був активованим і складав 77,0% [у здорових - (50,6 ± 1,8)%] Тобто, знижена КІЛЬКІСТЬ AM була компенсована підвищенням їх функціональної активності Таким чином, спосіб, що пропонується, дозволив визначити відсутність стану функціональної недостатності AM без проведення тривалих, методично складних і коштовних імунологічних досліджень Спосіб, що пропонується, був застосований у 24 хворих на хронічні неспецифічні захворювання легень (17 хворих на хронічний обструктивний бронхіт, 3 хворих на хронічний необструктивний бронхіт, і 4 хворих на бронхіальну астму) Хворі з пневмоцистами в харкотинні були об'єднані в 1 групу (14 хворих), хворі з відсутністю в харкотинні пневмоцист - у 2 групу (10 хворих) Групи були порівнянні за віком і статтю середній вік обстежених складав у 1 і 2 групах ВІДПОВІДНО (39,4 + 3,6) років і (38,3 + 4,1) років, ЧОЛОВІКІВ було ВІДПОВІДНО 36 % (5) і 30% (3) Отримані показники порівнювалися з аналогічними показниками 20 практично здорових осіб Був обстежений стан місцевого (легеневого) імунітету по клітинах БАЗ з обчислюванням КІЛЬКОСТІ AM, ПФ AM, ФЧ AM і НСТ-тесту AM (див Таблицю) Поглинальна активність AM хворих 1 групи, на відміну від такої у хворих 2 групи, практично не зростала ПФ AM складав у 1 групі - (65,2 ± 3,6)% (р < 0,05 відносно 2 групи), у 2 групі - (76,7 ± 3,3)% (р < 0,05 відносно групи здорових) [у здорових (59,2 ± 2,5)%], а перетравлююча здатність AM - ФЧ - у хворих 1 групи була нижчою, ніж у здорових, і дорівнювала в середньому (6,5 ± 0,5)ум од (р < 0,05 щодо групи здорових) і (7,8 ± 0,9) ум од у хворих 2 групи [у здорових - (8,1 ± 0,3)ум од ] Таблиця Показники місцевого імунітету у хворих на ХНЗЛ в залежності від наявності Pneumocystis саппм в харкотинні (М ± т ) Показники ЗМІСТ Групи обстежених Хворі на ХНЗЛ Здорові 3 наявнісБез PC (п = 20) тю PC (n (п=10) =14) альвео 87,5 ± лярних мак50,6 ± 5 , 8 ° 47,3 ± 9 , 7 ° 10,0 рофагів (AM) (%) Показник фагоцитозу (ПФ) 59,2 ± 2 , 5 65,2 ± 3,6* 76,7 ± 3 , 3 ° AM (%) Фагоцитарне число (ФЧ) AM 8,1 ± 0 , 3 6,5 ± 0 , 5 ° 7,8 ± 0 , 9 (ум о д ) НСТ AM (%) 50,6 ± 1 , 8 51,4 ± 6 , 2 49,6 ± 8 , 6 Примітки 1 * - різниця показника у порівнянні з показником 2 групи вірогідна (р < 0,05) 2 ° - різниця показника у порівнянні з показником групи здорових вірогідна (р < 0,05) При цьому в хворих обох груп спостерігалися ознаки вторинної імунологічної недостатності, які характерні для більшості хворих на ХНЗЛ [див Варианты нарушений иммунного статуса у больных хроническим бронхитом / Е Ф Чернушенко, Ю И Фещенко, И Ф Круглова и др // Укр пульмонолопчний журнал - 2000 - №1 - С 12 - 15] і виявлялися в зниженні КІЛЬКОСТІ AM і відсутності підвищення активності AM у НСТ-тесту Отже, зміни фагоцитарної активності AM у хворих на ХНЗЛ із пневмоцистозом були більш вираженими Поглинальна активность (ПФ) AM у них була вірогідно меншою, ніж у хворих без пневмоцист, що на тлі пригнічення у цих хворих перетравлюючої активності (ФЧ) AM, а також - зниження змісту AM і відсутності збільшення НСТ-тесту AM, - свідчить про глибокі зміни у функціональному стані альвфолярних макрофагів Тобто, наявність Р саппм у харкотинні хворих на ХНЗЛ у великій мірі пов'язана із недостатньою функціональною активністю AM 3 цього випливає, що наявність Р саппм у харкотинні хворих на ХНЗЛ можливо розглядати як покажчик недостатньої функціональної активності AM Таким чином, спосіб, що пропонується, дозволяє визначати стан функціональної недостатності AM без проведення тривалих, методично складних і коштовних імунологічних досліджень Застосування способу дозволяє скоротити час визначення 7 55202 стану функціональної недостатності альвеолярних макрофапв з 2 діб до 2 годин Спосіб є простим, доступним і може знайти широке застосування в пульмонолопчних та тера 8 певтичних відділеннях і амбулаторіях при призначенні імуномодулюючої терапії хворим на хронічні неспецифічні захворювання легень Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24