Штам бактерії bifidobacterium adolescentis 23 для виготовлення пробіотичного препарату

Штам bifidobacterium adolescentis 23 для виготовлення пробіотичного препарату, який застосовується при лікуванні гнійних ран і дисбіотичних кишкових порушень у котів, що депонований у музеї мікроорганізмів лабораторії кафедри хірургії і хвороб дрібних тварин Луганського національного аграрного університету за № 23. (19) (21) u200708584 (22) 26.07.2007 (24) 26.11.2007 (72) РУДЕНКО ПАВЛО АНАТОЛІЙОВИЧ, UA, СТЕГНІЙ БОРИС ТИМОФІЙОВИЧ, UA, ГУЖВИНСЬКА СВІТЛАНА ОЛЕКСАНДРІВНА, UA, РУДЕНКО АНДРІЙ АНАТОЛІЙОВИЧ, UA, САДОВА СВІТЛАНА СЕРГІЇВНА, UA (73) ЛУГАНСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ АГРАРНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA 3 антагоністичні властивості у відношенні патогенних і умовно патогенних бактерій збудників хірургічної ранової інфекції і різноманітних дисбіотичних кишкових зрушень у котів. Об'єкт даного дослідження - Bifidobacterium adolescentis 23, був ізольований із фекалій від здорової кішки віком 8 місяців при вивченні нормальної кишкової аутофлори у вказаного вище виду тварин. Штам мікроорганізму Bifidobacterium adolescentis 23 виділяли висівом серійних розведень фекалій здорової кішки (10-2-10-7 у фосфатному буфері, рН7,2). Ці розведення висівали на середовища MRS і культивували при температурі 37-38°С 24-48 годин. Штам, який є об'єктом даного дослідження, ізолювали із розведення фекалій 10-5. Колонії для подальшої ідентифікації відбирали випадково, морфотинкторіальні, культуральні і біохімічні властивості вивчали на ізолятах. Позначення штаму Bifidobacterium adolescentis 23. Видова назва мікроорганізму - Bifidobacterium adolescentis 23. Сімейство - Actinomycetaceae, рід Bifidobacterium, вид - adolescentis. Морфо-тинкторіальні властивості: у препаратах-мазках з двохдобових культур, пофарбованих за Грамом біфідобактерії мають вигляд грампозитивних поліморфних паличок булавовидної форми, розміром 0,5-1,5´1,5-8,0мкм, які утворюють завилисті ланцюжки різної довжини, або масові скопичення у вигляді китайських ієрогліфів. Іноді фарбуються нерівномірно. Bifidobacterium adolescentis 23 це аспорогенний, нерухомий мікроорганізм. Культуральні властивості: штам Bifidobacterium adolescentis 23 є облігатним анаеробним мікроорганізмом. На живильному середовищі Блаурока штам має ріст по всій пробірці, крім зони аеробіозу, іноді утворює колонії у вигляді «комет». На твердих живильних середовищах (MRS-4, агар з гідролізованим молоком) - ростуть у вигляді непрозорих, випуклих, непігментних колоній з цільними краями, діаметром 3-5мм. Знежирене молоко штам мікроорганізму Bifidobacterium adolescentis 23 згортує через 24-30 годин з утворенням характерного суцільного згустку без пухирців газу. Хемоорганотрофи, потребують складні живильні середовища. Біохімічні властивості: штам мікроорганізму Bifidobacterium adolescentis 23 розкладає з утворенням кислоти без газу глюкозу, лактозу, арабінозу, фруктозу, галактозу, інулін, сорбіт, ксилолу, рибозу, саліцин. Варіабельне ферментує маніт та крахмал. Згортує знежирене молоко через 24-48 годин, утворює кислоту за 16 годин - 100°, за 20 годин - 160°, за 24 години з кислотністю 200° за Тернером. Біологічні властивості: штам мікроорганізму Bifidobacterium adolescentis 23 не є патогенним для тварин, у тому числі для білих мишей, морських свинок та котів у дозі 1млрд. мікробних клітин при внутрішньочеревному введенні. 28154 4 Антагоністичні властивості: штам бактерії Bifidobacterium adolescentis 23 має виражену антагоністичну активність у відношенні до патогенних і умовно патогенних мікроорганізмів (Е. coli; P. vulgaris; P. mirabilis; S. pyogenes; S. aureus K. pneumonia, C. freundi, Candida albicans), які найчастіше ізолюються з гнійних ран у котів. Адгезивні властивості: штам бактерії Bifidobacterium adolescentis 23 має високі адгезивні індекси у відношенні до еритроцитів теляти, кози, вівці, кота та кролика. Чутливість до антибіотиків: при діскдифузійному тесті штам мікроорганізму Bifidobacterium adolescentis 23 був стійким до пеніциліну, ампіциліну, оксациліну, стрептоміцину, неоміцину, гентаміцину, лінкоміцину, левоміцетину, тетрацикліну, цефазоліну. Це дозволяє використовувати штам бактерії Bifidobacterium adolescentis 23 при лікуванні гнійних ран у котів разом із антибіотиками. Антигенні властивості: штаму бактерії Bifidobacterium adolescentis 23 не вивчались. Стабільність основних властивостей штаму: штам бактерії Bifidobacterium adolescentis 23 зберігає свої властивості в знежиреному молоці в умовах рефрижератору при +4-6°С протягом 6 місяців. Стабільність генетичних властивостей: у дослідного штама не спостерігається дисоціація протягом 6 місяців при періодичних пересівах у знежирене молоко. Штам вільний від іншої бактерійної мікрофлори та грибів. Середовища для культивування штаму: для вивчення і перевірки культуральних властивостей використовують живильні середовища MRS-2, MRS-4, агар з гідролізованим молоком. Поточна підтримка бактерій проводиться вирощуванням на знежиреному молоці, рН7,0 у пробірках при 3738°С на протязі 24-48 годин. Основні умови зберігання: культури бактерій вирощують у знежиреному молоці і зберігають в холодильнику при температурі +4-6°С, або при кімнатній температурі. Пересів для збереження життєдіяльності і біохімічних властивостей проводять на знежирене молоко через 30-35 діб. Приклад 1 Визначення біохімічної активності штаму бактерії Bifidobacterium adolescentis 23. З добових культур бактерій Bifidobacterium adolescentis 23, що вирощені на живильному середовищі, робили висіви в пробірки із знежиреним молоком (доза висіву - 0,2см3 на 5см3 молока). Засіяні біфідобактерії повинні згорнути знежирене молоко за 24-48 годин з утворенням характерного суцільного згустку без пухирців газу. Біфідобактерії, які не відповідали вимогам, бракували. Приклад 2 Визначення нешкідливості штаму бактерії Bifidobacterium adolescentis 23. Для перевірки на нешкідливість білим мишам, морським свинкам, котам, у кількості по 3 тварини штам мікроорганізму Bifidobacterium adolescentis 23 вводили у дозі 1млрд. мікробних клітин 5 внутрішньочеревинно. Спостереження за тваринами проводили протягом трьох діб. Тварини залишились живими. При загибелі тварин дослід повторюють на подвійній кількості макроорганізмів. У повторному досліді тварини повинні залишитись живими. При загибелі хоч однієї тварини, штам біфідобактерії бракують. Штам бактерії Bifidobacterium adolescentis 23 може бути використаний в якості пробіотичного препарату при лікуванні гнійних ран і дисбіотичних кишкових порушень у котів. 28154 6