Спосіб кількісного визначення кодеїну фосфату

Спосіб кількісного визначення кодеїну фосфату, що включає приготування проби і вимірювання інтенсивності люмінесценції розчину, який відрізняється тим, що пробу піддають взаємодії із стандартним розчином хлориду тербію і (4-трифторметилфеніл)-аміду 1-етил-4-гідрокси2-оксо-1,2-дигідрохінолін-3-карбонової кислоти при рН=7,0-7,5, реакційну суміш опромінюють УФпромінням при λзбудж=320 нм, а вимірювання інтенсивності люмінесценції здійснюють при λзбудж=545 нм. (19) (21) u200707432 (22) 02.07.2007 (24) 10.01.2008 (72) АЛЕКСАНДРОВА ДАР'Я ІГОРІВНА, UA, СКРИПИНЕЦЬ ЮЛІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, UA, ВІТЮКОВА КАТЕРИНА ОЛЕГІВНА, UA, ЄГОРОВА АЛЛА ВОЛОДИМИРІВНА, UA, УКРАЇНЕЦЬ ІГОР ВАСИЛЬОВИЧ, UA (73) ФІЗИКО-ХІМІЧНИЙ ІНСТИТУТ ІМ. О.В. БОГАТСЬКОГО НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ, UA (56) 3 29155 4 приготування проби і вимірювання інтенсивності визначаємих концентрацій кодеїну фосфату в 5 люмінесценції розчину, тим що пробу піддають разів на відміну від прототипу. взаємодії із стандартними розчинами хлориду Максимальне гасіння сигналу спостерігається тербію і (4-трифторметил-феніл)-аміду 1-етил-4при співвідношенні Tb:R=1:1,оптимальні гідрокси-2-оксо-1,2-дигідро-хінолін-3-карбонової концентрації іонів Тb3+ та реагенту - 1´10-6моль/л. кислоти при рН=7,0-7,5, реакційну суміш І люм тербію в комплексі Tb-R максимальна при опромінюють УФ-світлом при l збудж=320нм, а опромінюванні утвореного комплексу УФ-світлом с вимірювання інтенсивності люмінесценції l збудж=320нм. здійснюють при l еміс=545нм. Встановлено, що додавання до розчину люмінесцентного зонду Tb-R кодеїну фосфату Новим в заявленій корисній моделі є наявність призводить до гасіння спектрів люмінесценції таких ознак: взаємодія проби із сумішшю, що (Фіг.2, а) та збудження (Фіг.2, б) даного комплексу. містить органічний ліганд - (4-трифторметилДане явище використано для люмінесцентного феніл)-амід 1-етил-4-гідрокси-2-оксо-1.2-дигідровизначення кодеїну фосфату. хінолін-3-карбонової кислоти і стандартний розчин Залежність інтенсивності люмінесценції хлориду тербію; комплексу від концентрації кодеїну фосфату умови взаємодії - рН=7,0-7,5; представлена на Фіг.3, а. опромінювання УФ-світлом при l збудж=320нм; Приклад вимірювання інтенсивності люмінесценції при Визначення кодеїну фосфату проводили в l еміс=545нм. умовах тесту «Розчинення» для таблеток В заявленому способі використаний ефект «Кодтерпін» виробництва ВАТ «ІнтерХім» (кодеїну гасіння фосфат-іонами сенсибілізованої фосфату 0,0109г; акватерпіну 0,2500г;. натрію флуоресценції іону тербію у комплексі, який гідрокарбонату 0,2500г; допоміжні речовини характеризується високим квантовим виходом крохмаль картопляний, полівінілпіролідон, (Q=0,38) та великим часом життя збудженого аеросил, натрію кроскармелоза, целюлоза стану іонів тербію (t=1070мкс) (Фіг.1). мікрокристалічна, натрію стеарат). Зниження межі виявлення кодеїну фосфату Градуювальний графік будують на розчині стало можливим завдяки використанню нового плацебо (розчин допоміжних речовин, які люмінесцентного зонду - комплексу тербію з новим містяться в одній таблетці) наступним чином: у лігандом. Це можна пояснити наступним. мірні колби вносять по 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 1,0; 2,0; Органічний ліганд - (4-трифторметил-феніл)-амід 3,0мл стандартного розчину кодеїну фосфату 1-етил-4-гідрокси-2-оксо-1.2-дигідро-хінолін-3(10мкг/мл) (3 паралельних виміри), в кожну колбу карбонової кислоти - відноситься до похідних 2додають по 0,35мл розчину плацебо, 1,0мл 1×10оксо-4-гідрокси-хінолінкарбонової кислоти і має 5 моль/л розчину хлориду тербію, 1,0мл 1×10таку структурну формулу: 5 моль/л розчину R, 0,5мл 40%-ного розчину CF3 OH O уротропіну. Доводять водою до 10мл та перемішують. Паралельно готують розчин холостої проби, який містить усі компоненти, крім N кодеїну фосфату. Вимірюють інтенсивність люмінесценції за l еміс=545нм (lзбудж=320нм) у N O кожній точці, віднімають І люм холостої проби. За C2 H5 допомогою одержаних результатів будують градуювальний графік залежності інтенсивності Цей реагент має в ультрафіолетовій області люмінесценції від концентрації кодеїну фосфату спектру смугу поглинання при l=304нм (e=35600л -1 -1 (мкг/мл) в координатах Штерна-Фольмера (Фіг.3, моль ×см ), що обумовлює ефективне поглинання б), в якому спостерігається лінійність в інтервалі енергії збудження. Ця енергія передається з концентрацій кодеїну фосфату 0,1-3,0мкг/мл. триплетного рівня ліганду (Е=21050см-1) на 3+ -1 Розчинення [див. Державна Фармакопея енергетичний рівень Тb (Е=20500см ), що України / Державне підприємство "Науковопризводить до значного зростання І люм тербію. експертний фармакопейний центр". - 1-е вид. Взаємодія люмінесцентного зонду - комплексу TbХарків: РІРЕГ, 2001. - 556 с]. Для виконання тесту R - з кодеїном фосфатом відбувається при рН 4,5використовують прилад з лопаттю-мішалкою. 10,5, максимум люмінесценції спостерігається при Середовище розчинення - дистильована вода, рН 7,0-7,5. У запропонованому способі для температура середовища - (37.0±0.5)°С, об'єм утворення оптимального рН розчину 500мл, швидкість обертання лопаті - 100об/хв, час використовується 0,5мл 40%-ного розчину розчинення - 45хв. уротропіну. Підвищення чутливості стало Випробовуваний розчин. У циліндричну можливим завдяки використанню ефекту гасіння посудину поміщають одну таблетку «Кодтерпіну». фосфат-іонами, які є аніонною часткою молекули Після проведення розчинення відбирають 50мл кодеїну фосфату, сенсибілізованої люмінесценції розчину, фільтрують крізь паперовий фільтр "Синя іонів тербію у комплексі з R, завдяки витисканню стрічка". Відкидають перші порції фільтрату. Далі фосфат-іонами зв'язаного ліганду з його 0,35мл фільтрату вносять у мірну колбу об'ємом комплексу з іонами тербію (конкуруюче 10мл, додають 1,0мл 1×10-5моль/л розчину комплексоутворення в основному стані). Це надає хлориду тербію, 1,0мл 1×10-5моль/л розчину R, можливість досягнути зниження нижньої межі 0,5мл 40%-ного розчину уротропіну. Доводять водою до 10мл та перемішують. 5 29155 Вимірюють інтенсивність люмінесценції за l еміс=545нм (l збудж=320нм). Паралельно вимірюють інтенсивність люмінесценції розчину робочого стандартного зразка (РСЗ) кодеїну фосфату. Розчин РСЗ кодеїну фосфату. 0,010г кодеїну фосфату розчиняють у 100,0мл дистильованої води. 1,0мл одержаного розчину доводять дистильованою водою до 10,0мл. 0,7мл одержаного розчину вносять у мірну колбу об'ємом 10мл, а далі додають 0,35мл розчину плацебо та всі реактиви як зазначено в приготуванні випробовуваного розчину. Розчин використовують свіжоприготованим. Паралельно готують розчин холостої проби, який містить усі компоненти, крім кодеїну фосфату. Вимірюють інтенсивність люмінесценції холостої проби за зазначених вище умов. Від інтенсивності люмінесценції випробовуваного розчину та розчину РСЗ віднімають І люм холостої проби. Вміст кодеїну фосфату (X), який перейшов у розчин з таблеток, у відсотках, обчислюють за формулою: I × m × 500 × 10 × 1× 0. 7 × 100 I1 × m0 × 100 = X= 1 0 I0 × a × 0,35 × 100 × 10 × 10 I0 × a де: I1 інтенсивність люмінесценції випробовуваного розчину; І 0 - інтенсивність люмінесценції розчину РСЗ кодеїну фосфату; m0 - наважка РСЗ кодеїну фосфату, у грамах; а - вміст кодеїну фосфату в одній таблетці, у грамах. Точність і достовірність визначення кодеїну фосфату у розчинах перевірені методом "введенознайдено". При n=5; Р=0,95 відносне стандартне відхилення (s r) складає 0,020-0,026. Таким чином, спосіб дозволяє знизити нижню межу визначаємих концентрацій кодеїну фосфату в 5 разів у порівнянні з найближчим аналогом. 6 Таблиця Результати визначення вмісту кодеїну фосфату (X), який перейшов у розчин з таблеток «Кодтерпін», виготовлених ВАТ "ІнтерХім" (n=6; Р=0.95) Серія 1 2 X, % 100,98 96,32 97,31 101,02 99,64 100,67 96,21 100,39 100,57 97,21 94,32 99,99 Хср±DХ Sr, % 99,32±2,13 2,04 98,11±2,74 2,64