Спосіб індукції новоутворень у культурі насіннєзародків моркви in vitro

Спосіб індукції новоутворень у культурі насіннєзародків моркви in vitro, що включає 3 піридоксин хлорид 1 нікотинова кислота 1 сахароза 30000 агар-агар 7000 вода до 1л Спосіб-прототип індукції гіногенезу в культурі in vitro має наступні недоліки: - після культивування бутонів на середовищі з ауксином 2,4-Д насіннезародки розрихлюються і це значно утруднює їх виділення; позитивний відгук одержують при використанні тих донорських насіннєвих рослин, які вирощують у захищеному ґрунті при регульованих температурі та вологості, тоді як для селекціонерів важливо дібрати вихідні рослини із заданими ознаками безпосередньо в польових розсадниках, де їх властивості проявляються в адекватних умовах; - застосування захищеного ґрунту істотно підвищує вартість методу. Метою корисної моделі є підвищення виходу новоутворень (калюсів чи ембріоїдів) з насіннєзародків моркви у культурі in vitro, розширення спектру генотипів моркви, що дають позитивний результат при вирощуванні вихідних рослин у незахищеному ґрунті. Мета досягається наступним способом: 1. Вихідні рослини вирощують у польових умовах і перед цвітінням ізолюють марлевими ізоляторами, щоб зменшити осідання пилу з повітря на суцвіття. 2. Для культури in vitro зрізають суцвіття І-II порядків за 1-2 дні до початку цвітінні. Здійснюють їх поверхневу асептичну обробку. 3. Бутони культивують на живильному середовищі В5 без гормонів протягом 2 тижнів при температурі 25°С у темноті. 4. Виділені з попередньо підготовлених бутонів (п.1-3) насіннєзародки культивують на індуктивному середовищі В5 з додаванням 2,4-Д, кінетину і гібереліну по 0,2мг/л кожного протягом 6 тижнів при освітленості 1клк, світловому періоді 16год. та температурі повітря 25°С. Приклад. Проводили дослідження з індукції гіногенезу у моркви у культурі in vitro протягом трьох років. Використовували 20 генотипів (гібридів, сортів). Вихідні рослини добирали у селекційних польових розсадниках та накривали їх марлевими ізоляторами. Суцвіття моркви другого порядку поверхнево дезінфікували розчинами спирту та гіпохлориду натрію [7]. Введення бутонів у культуру in vitro здійснювали в стерильних умовах у пилезахисному боксі з горизонтальною примусовою вентиляцією КГТГ-1М. Бутони, а потім насїннєзародки з них культивували двома описаними вище способами: 1) - контроль, згідно Тюкав і н та ін. (2000) [4, 5]; 2) - запропонований. Результати досліджень свідчать про те, що при запропонованому способі насіннєзародки у бутонах не розрихлювалися і легко піддавались вичлененню. Новоутворення були одержані з насіннєзародків у 25% генотипів, тоді як за допомогою способу-прототипу - у жодного генотипу (таблиця). 30285 4 Таблиця Частота новоутворень з насіннєзародків моркви у культуріin vitro, % № біотехнологічного каталогу вихідного генотипу 258 259 261 263 264 265 266 268 269 271 272 273 274 275 276 277/1 278/1 278/2 279/1 279/2 середнє НІР0.05 Спосіб гіногенезу Прототи Запропоновани п й 0 0 0 25,0 0 20,0 0 0 0 0 0 0 0 50,0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 41,7 0 0 0 16,7 0 0 0 7,7 4,53 Частота утворення калюсів у генотипів з позитивною реакцією була значною і знаходилась в межах 16,7-50,0%. Середня частота гіногенезу по досліду при запропонованій корисній моделі становила 7,7% і істотно (НІР0.05=4,53) відрізнялась від контрольного способу, де складала 0%. Таким чином, запропонований спосіб підвищує ефективність гіногенезу моркви у культурі in vitro, робить більш зручним виділення насіннєзародків з бутонів і дозволяє отримувати позитивний результат у 25% генотипів, вирощених у незахищеному ґрунті та високу частоту новоутворень у чутливих генотипів. Список посилань: 1. Andersen S.B., Cristiansen I., Farestveit B. Carrot (Daucus carota L.): In vitro production of haploids and fild trials// Biotechnology in Agriculture and For estry: Spinger - Verlag, Berlin Heidelberg, 1990. - Vol. 12. - P.393-402. 2. Keller W.A., Armstrong K.C. High frequency production of microspore-derived plants from Brassica napus anter cultures// Z. Pflanzenziicht, 1978. - Vol. 80. - P.100-108. 3. Gamborg O.L., Miller R.A., Ojima K. Nutrients requirements of suspension culture of soybean root cells// Experimental Cell Researches. - 1968. Vol.50.-P.151-158. 4. Тюкавин Г.Б., Шмыкова Н.А. Культура неопыленных семяпочек моркови // Междунар. науч.-практич. конференция «Селекция и 5 семеноводство овощных культур в XXI веке». -М.: 2000. -С.275-277. 5. Тюкавин Г.Б., Домблидес А.С., Шмыкова Н.А. Гиногенез моркови in vitro II Междунар. науч.практич. конференция «Селекция и семеноводство овощных культур в XXI веке». -М.: 2000. -С.277-279. 6. Masuda K., Kikuta Y., Okazava Y.A. A revision of the medium for somatic embriogenesis in carrot suspension culture// Journal of Faculty Agriculture of Hokkaido University (Japan). - 1981. - Vol. 60, Pt. 3. P.183-193. 7. Сергієнко О.Ф., Баштан В.Б., Горова Т.К. Методика мікроклонування селекційних зразків моркви. - Мерефа: ІОБ УААН, 2004. -12с. 30285 6