Спосіб підвищення активності мітозу у амаранта

Спосіб підвищення активності імітозу у амарантаг який включає пророщування насіння, відбір корінців для досліджень, відрізняється тим, що дослідження проводять при температурі 30 - 35°С на протязі 2-3 діб до досягення корінцями довжини 1,0-1,5 см, а матеріал для досліджень відбирають в денний час. (19) (21) 99063026 (22) 02.06.1999 (24) 15.02.2001 (33) UA (46) 15.02.2001, Бюл. № 1, 2001 р. (72) Гопцій Тетяна Іванівна, Криворученко Ніна Іванівна, Криворученко Ольга Миколаївна (73) Харківський державний аграрний університет 34097 вують мацерацію тканин в 45% розчині соляної кислоти. Досліди проводять за допомогою світлових мікроскопів "Біолам" або "Біолам-1". Для цього проводять підрахунок загальної кількості клітин та клітин в стані мітотичної активності в 10 полях зору. По кожному варіанту досліду готують щонайменше 10 тимчасових давлених препаратів. За вказаною вище формулою розраховують мітотичний індекс (МІ), який характеризує активність процесів проліферації в меристематичних тканинах корінців. Як видно з даних табл.. 1, пророщування насіння при температурі 35°С найбільше сприяє активізації протікання мітозу, на що вказує найбільша кількість клітин в зоні ділення - 410 та найвищий мітотичний індекс - 41%. Також досить висока мітотична активність у варіанті з температурою пророщуіання 30°С: 350 мітотичних клітин та МІ 35%. Значно менша кількість клітин в стані ділення (140) та мітотичний індекс (14%) спостеріг іється при температурі пророщування 25°С. Температура пророщування 20°С дає найменшу кількість клітин, що діляться, - 20, а мітотичний індекс в цьому варіанті становить лише 2%. З іншого боку, підвищення температури до 40°С також знижує активність мітозу - 100 мітотичних клітин та Ml - 10%. Така залежність у варіантах з -температурою пророщування нижче або вище 30 - 35°С свідчить про уповільнення процесів поділу клітин та зниження мітотичної активності. Крім того, нами було встановлено, що характеру протікання мітозу у амаранта притаманна відповідна періодичність. На наведеному графіку (фіг. 1) чітко простежується залежність активності мітозу від часу доби, яка описується кривою з однією вершиною. На відрізку часу, представленому на графіку, в.д 16 години другої доби пророщування до 12 години третьої доби відбувається рівно мірний підйом клітинного поділу. Це свідчить, що в денні години третьої доби пророщування спостерігається найбільше, мітотична активність. З 12 до 16 години третьої доби пророщування спостерігається рівномірний спад проліферативної активності клітин. На фіг. 2 відображено співвідношення фаз мітозу на протязі третьої доби пророщування при температурі 35°С. Так, починаючи з 9 години максимальна кількість мітотичних клітин знаходиться в профазі, в той час як телофазні клітини повністю відсутні, що свідчить про початок процесів мітотичного поділу. Близько 16 години спостерігається відсутність профазних клігин, тоді як кількість телофаз максимальна. Все це підтверджує притаманність амаранту добової періодичності мітозу. Розподіл метафаз та анафаз на даному відрізку часу досить рівномірний, причому їх максимум спостерігається о 16 годині. Міто тично активні клітини рівномірно розподіляються по всіх фазах мітотичного циклу близько 12 години. Вивчення впливу довжини корінця на активність протікання мітозу у амаранта показало, що оптимальна довжина становить 1,0-1,5 см. Корінці більшої 1,5 см або меншої 11,0 см довжини відрізняються недостатньою кількістю клітин зони активного ділення і непридатні для проведення досліджень (табл. 2). Мітотичний Індекс у Amaranth us hybildus в залежності від довжини корінця, температура пророщування 35°С. Таким чином, при проведенні цитологічних досліджень меристематичних клітин корінців амаранта оптимальними умовами є: пророщування насіння при температурі 30 - 35°С на протязі 2-3-х діб, добір корніців для досліджень в 12 годин дня, довжина корінців 1,0-1,5 см. Таблиця 1 Мітотичній індекс у Amaraathus hybrsdus в залежності від температури пророщування (3-тя доба) Температура Проглянуто порощування 20 0С 25 0С 30 0С 35 0С 40 0С клітин 10000 10000 10000 10000 10000 Число клітин в зоні ділення всього 20 140 350 410 100 профаза 10 40 90 70 30 метафаза 10 60 120 160 30 анафаза 0 30 100 110 35 МІ телофаза 0 10 20 70 5 %0 2 14 35 41 10 Таблиця 2 Мітотичній індекс у Amaraathus hybrsdus в залежності від довжини корінця, температура пророщування 350С Довжина корінця, см 0,5 1 - 1,5 2,0 - 2,5 Проглянуто кліток 1000 1000 1000 всього 15 410 150 Число клітин в зоні ділення профаза метафаза анафаза 3 10 2 70 160 110 30 40 20 2 телофаза 0 70 60 МІ % 1,5 41 35 34097 Фіг. 1 Фіг. 2 ________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3