Спосіб виявлення поліедрів вірусу ядерного поліедрозу непарного шовкопряда

Спосіб виявлення поліедрів вірусу ядерного поліедрозу непарного шовкопряда, що включає 3 35990 4 Москва). У лізіруючим розчині вірусні поліедри тифікують поліедри вірусу ядерного поліедрозу рекомендується витримувати протягом 30 хвилин непарного шовкопряда. при температурі 71°С, перемішуючи кожні п'ять Приклад. Для ідентифікації поліедрів вірусу хвилин. Після виділення ДНК проводять ампліфіядерного поліедрозу непарного шовкопряда викокацію ДНК із використанням двох специфічних ристали китайський вірусний препарат. праймеров. Послідовності двох специфічних ДНК із вірусних поліедрів виділяли за стандарпраймерів наступні: тною методикою [Sambrook J., Fritisch E.F., Maniа) 5’- GCC GGC GGA ACT GGC CCA -3' atis T. Molecular Cloning: Laboratory Manual. - New (134843-134860); York, Cold Spring Harbour Univ. Press, 1989. б) 5’- CGA CGT GGT GGC ACG GCC -3’ 1626p.] з використанням комплекту "Днк-сорб-А" (135159-135142). (Амплисенс, Москва). Після виділення ДНК провеПраймери були підібрані й сконструйовані на ли ампліфікацію ДНК із використанням двох спеоснові наявної в GenBank геномної послідовності цифічних праймерів. Послідовності двох специфівірусу ядерного поліедрозу непарного шовкопряда чних праймерів були наступні: (AF081810). Дані два специфічних праймери в ході а) 5’- GCC GGC GGA ACT GGC CCA -3’ реакції ампліфікації при наявності вірусної ДНК (134843-134860); дають один Днк - фрагмент довжиною 317 п.н. б) 5'- CGA CGT GGT GGC ACG GCC -3' Даний Днк - фрагмент є ділянкою гена (Genei: (135159-135142). 1488470) вірусу ядерного поліеєдрозу непарного Дані два специфічних праймери в ході реакції шовкопряда [http://www.ncbi.nlm.nih.gov]. ампліфікації при наявності вірусної ДНК дають Ампліфікацію ДНК проводять у реакційній суодин ДНК - фрагмент довжиною 317п.н. У резульміші обсягом 30мкл на термоциклері "Терцик" таті експерименту була отримана електрофорег(Днк-технологія, Росія) з використанням реактивів рама продуктів ампліфікації ДНК (Фіг.1): М - мардля полімеразної ланцюгової реакції "Амплисенскер молекулярних ваг ДНК довжиною від 200 до 200-1" (Амплисенс, Москва). Реакційна суміш об1000п.н. (знизу нагору), О - опит, Б - досвід сягом 30мкл містила: 5-х PCR-буфер - 5мкл; У результаті ампліфікації ДНК, виділеної з віMgSO4 , 50Mm -1.5мкл; Н2О Міllі - 3мкл; dNTP-mix русних поліедрів китайського препарату, був утво2.5мкл, 2 Mm; Taq-полімераза, 5од/мкл - 0.5мкл; рений ДНК - фрагмент довжиною 317п.н. Це свідмінеральне масло -10.5мкл; праймери, А 260 чить про приналежності поліедрів вірусу ядерного 10ОЕ/мол - по 1мкл; Т-буфер з дослідженої ДНК поліедрозу непарного шовкопряда. 5мкл. RAPD-PCR проводили в режимі: денатурація Заявлений спосіб дозволяє: виділяти поліедри 94°С - 1хв, отжиг 61°С - 1хв, синтез 72°С - 1хв - 5 вірусу ядерного поліедрозу непарного шовкопряциклів; денатурація 94°С - 0.75хв, віджиг 61°С да; діагностувати поліедри вірусу ядерного полі0.75хв, синтез 72°С - 0.75хв - 30 циклів. Термінаедрозу непарного шовкопряда; специфічні прайльну стадію синтезу проводили при 72°С - 5хв. мери можна використати для виявлення Продукти ампліфікації розділяли методом електлатентного вірусу й фенотипу, що брунькується, рофорезу в 1,8% агарозному гелі [Sаmbгоок L, вірусу ядерного поліедрозу непарного шовкопряда Fritisch E.F,, Maniatis T. Molecular Cloning: Laboraв тканинах комахи методом полімеразної ланцюtory Manual. - New York, Cold Spring Harbour Univ. гової реакції, що забезпечує підвищення точності Press, 1989. - 1626p.]. По наявності фрагмента виявлення поліедрів вірусу непарного шовкопрядовжиною 317п.н. у продуктах ампліфікації іденда. 5 Комп’ютерна в ерстка В. Мацело 35990 6 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601