Спосіб одержання антимікробного засобу

1. Спосіб одержання антимікробного засобу шляхом екстракції цибулин однієї із рослин роду Allium і виділення цільового продукту, який відрізняється тим, що як екстрагент використовують рослинну олію, а екстракцію провадять у НВЧ-полі. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що використовують цибулини цибулі ріпчатої (Allium сера). 3. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, 36910 стійник з усіма витяжками і дають осісти протягом 48 годин. За необхідності додають 90° спирт і перемішують витяжку протягом 1 години у особливому змішувачі. Алілсат фільтр ують і розливають у тару. Препарат представляє собою зеленуватожовту рідину із запахом часнику. Антимікробні властивості препарату, отриманого за даним способом, не вказано. Проте для даного способу також характерна велика тривалість і трудомісткість процесу. Відомий спосіб одержання екстракту лікарської рослини із рослини роду Allium, а особливо часнику і цибулі за заявкою РСТ 94/07513 МКИ 5 А61 К 35/78, 41/00, реферат якого опубліковано у бюлетені: Изобретения стран мира. - № 8-14-95. С. 84. Із реферату витікає, що екстракцію проводять полярним розчинником, в якості якого використовують воду із додаванням нижчих спиртів. Екстракції передують підготовчі операції, в ході яких рослинний матеріал піддають короткочасній мікрохвильовій обробці тривалістю не більше 10 с при енергії випромінення не більше 500 Вт, а потім глибокому заморожуванню. Застосування цих операцій повинно сприяти прискоренню процесу, а також, як вказано у рефераті, повинно сприяти видаленню пахучи х компонентів. Відомостей про антимікробну активність одержаних засобів не наведено. Проте отриманий екстракт на основі нижчих спиртів не має широкого терапевтичного застосування. Найбільш близьким аналогом-прототипом є спосіб одержання антимікробного засобу за патентом України № 1300, МКИ 6 А61 К 35/78, формула винаходу якого опублікована у національному патентному бюлетені: Промислова власність. - № 1. 1994 (а. с. СССР № 1573575, МКИ 5, А61 К 35/78, заявлено 11.08.88). Згідно з винаходом, антимікробний засіб отримують шляхом екстракції цибулин однієї з рослин із роду Allium екстрагентом і виділення цільового продукту. Використовують цибулини ріпчастої цибулі (Allium сера), очищують від сухих покривних лусок, подрібнюють, витримують на повітрі 15-45 хвилин перед екстракцією, екстрагують пентаном, упарюють, очищують перерозчиненням залишку у суміші гексан-диетиловий ефір, осад видаляють, а цільовий продукт випарюють при 40°С. Видалення осаду проводять шляхом центрифугування при 1,5 тис об/хв, надосадову рідину упарюють при зниженому тиску у роторному випарювачі. Цільовий продукт перерозчинюють у 4,25 мл 96° етилового спирту, отримуючи препарат "Цибулин" у концентрації 2 мг/мл. Антимікробна активність засобу, отриманого за даним способом, наприклад, по відношенню до Staphilococcus aureus шт. 209, дещо нижча за активність препарату "Олеандоміцин": 23,3 та 22,9 відповідно, але вища, ніж засобу "Алілчеп": 23,3 та 19,3 відповідно (концентрація препарату - мкг/мл, що спричиняє бактерицидну дію). Головними недоліками прототипу є велика тривалість процесу і висока собівартість продукту, що обумовлена використанням різних розчинників та апаратів при виробництві. Крім того, використання у якості розчинника 96° етилового спирту надає препарату подразнюючої дії при його використанні, що обумовлює звуження сфери його терапевтичного використання. В основу винаходу поставлено задачу вдосконалення способу одержання антимікробного засобу шляхом використання нових засобів, прийомів та режимів проведення екстракції, що дозволяє скоротити тривалість процесу, знизити собівартість продукту, розширити сферу його терапевтичного застосування, а також забезпечує його антимікробну активність, що не поступається аналогам і прототипу. Поставлена задача вирішується тим, що у способі одержання антимікробного засобу шляхом екстракції цибулин однієї з рослин роду Allium екстрагентом і виділення цільового продукту, в якості екстрагента використовують рослинну олію, а екстракцію здійснюють в НВЧ-полі. При використанні цибулин цибулі ріпчатої (Allium сера) для одержання антимікробного засобу, що стосується грамнегативних мікроорганізмів, екстракцію здійснюють енергією НВЧ-поля частотою 2450 МГц, потужністю 900 Вт протягом 3 хв., а для одержання антимікробного засобу, що стосується як грампозитивних, так і грам-негативних мікроорганізмів, екстракцію здійснюють енергією НВЧ-поля частотою 2450 МГц, потужністю 725 Вт протягом 1 хв. При використанні цибулин часнику (Allium sativus) для одержання антимікробного засобу, що стосується грам-негативних мікроорганізмів, екстракцію здійснюють енергією НВЧ-поля частотою 2450 МГц, потужністю 725 Вт протягом 1 хв., а для одержання антимікробного засобу, що стосується як грам-позитивних, так і грам-негативних мікроорганізмів, екстракцію здійснюють енергією НВЧ-поля частотою 2450 МГц, потужністю 900 Вт протягом 3 хв. При цьому використовують цілі або подрібнені цибулини рослин. Сукупність істотних ознак винаходу дозволяє значно скоротити тривалість процесу завдяки швидкому нагріванню сировини в стані природної вологості та, одночасно, конденсації біологічно активних речовин в холодному екстрагенті - рослинній олії, яка практично не поглинає електромагнітні хвилі НВЧ-опромінення. Спосіб здійснюється таким чином. Цибулини ріпчастої цибулі або зубці часнику обчищають від сухи х покривних лусок. Цілі або подрібнені цибулини змішують з рослинною олією. Вибір виду олії та співвідношення мас сировина:екстрагент не пов'язаний принципово з процесом екстракції мікрохвильовою енергією і визначається, в основному, вимогами щодо цільового продукту. Може бути використана соняшникова олія, соєва олія, кукурудзяна олія чи інші, а також їх суміші. Змішування відбувається відразу після очистки сировини без витримування його на повітрі. Суміш сировини з олією після перемішування в радіопрозорій тарі улаштовують в камеру НВЧ-установки, яка має частоту 2450 МГц. Діють на суміш енергією НВЧполя потужністю 725 Вт і 900 Вт протягом 1 і 3 хв. відповідно. Після припинення екстракції із суміші виділяють цільовий продукт одним із відомих способів, наприклад, віджиманням суміші. Одержана речовина має специфічний запах, характерний для рослин. Винахід проілюстровано рядом прикладів. Приклад 1. Для одержання антимікробного засобу 50 г цибулин ріпчастої цибулі обчищають від сухи х покривних частин, подрібнюють і відразу 2 36910 змішують з 50 г соняшникової рафінованої олії "Олейна" ТУ-У-18.503-98. Суміш в скляній посудині улаштовують в камеру НВЧ-установки з частотою 2450 МГц і енергією НВЧ-поля потужністю 900 Вт. Екстрагують протягом 3 хв. Проекстраговану суміш віджимають і одержують готовий продукт. Приклад 2. На відміну від приклада 1, суміш піддають дії НВЧ-поля потужністю 725 Вт протягом 1 хв. Приклад 3. Одержують антимікробний засіб з часнику. 50 г зубців часнику звільняють від сухих покривних лусочок, подрібнюють і змішують з 50 г соняшникової рафінованої олії "Олейна". Суміш в скляній тарі встановлюють у камеру НВЧ-установки з частотою 2450 МГц і піддають дії енергії потужністю 900 Вт протягом 3 хв. Готовий продукт одержують після віджимання суміші, що була отримана в результаті екстракції. Приклад 4. На відміну від приклада, 3 суміш піддають дії НВЧ-поля потужністю 725 Вт протягом 1 хв. Приклади 5 і 6. На відміну від прикладів 1 і 2 використовують цілі цибулини цибулі ріпчастої. Приклади 7 і 8. На відміну від прикладів 3 і 4 використовують цілі зубці цибулин часнику. Одержані за прикладами 1-8 речовини були перевірені на антимікробну активність, яку визначали дифузійним методом (дисків та лунок). В якості тест-культур мікроорганізмів використовували: Escherichia coli (штам 846) - грам-негативна, Pseudomonas aeruginosa (штам 62) - грам-негативна, Staphylococcus aureus (штам 209) - грампозитивна, одержані із ГІСК ім. Тарасевича, м. Москва. При визначенні бактеріальної чутли вості використовували диски фільтрувального паперу діаметром 15 мм, напитані досліджуваними речовинами. Крім того, використовували метод лунок - в агаризованому середовищі вирізали стерильним циліндром лунки, потім середовище густо засівали тест-мікроорганізмом (концентрація культури 109 КОЕ/мл) і після посіву лунки заповнювали досліджуваними речовинами. Інкубацію проводили в термостаті при 37°С протягом 24 годин. Після інкубації вимірювали діаметр зони просвітлення (пригнічення росту тест-культури в області дифузії препарату), що відображає бактерицидну активність препарату проти тест-мікроорганізму. Результати дослідження антибіотичної активності засобів, одержаних запропонованим способом, методом дифузії в агар з використанням дисків наведені в таблиці. Таблиця № при- Чутливість мікробіологічної культури (діклада аметр зони затримки росту), мм реалізаP, acruginosa S, aurcus Е coli (846) цій (62) (209) способу 1 18 18 0 2 17 17 17 3 18 18 18 4 18 22 0 5 19 18 0 6 18 18 18 7 19 19 19 8 19 23 0 Як випливає із результатів дослідження, найбільшу бактерицидну активність проявили засоби, одержані в прикладах 2, 3, 6 і 7, які впливали на всі використані культури грам-негативних і грампозитивних мікроорганізмів. Засоби одержані в прикладах 1, 4, 5 і 8 подавляли активно ріст грамнегативних мікроорганізмів. Порівняння бактерицидної активності засобів, одержаних даним способом, з бактерицидною активністю антибіотиків, яка наведена в книзі: Борисов А.Б., Козьмин-Соколов Б.Н., Фрейдин И.С. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. - М.: Медицина, 1993. - С. 84, таблица 8.3 "Оценка результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методами дисков и серийных разведении", показує, що препарати не поступаються таким антибіотикам, як олеандоміцин, бензилпеніцилін, ампіцилін, карбоніцилін, метицилін, оксацилін, стрептоміцин, гентаміцин, рифампіцин та іншим. Отже, бактерицидна активність засобів, одержаних даним способом, знаходиться на рівні препарату "Цибулин", одержаного за прототипом. Однак час одержання препарату значно менший, ніж потрібний для виробництва препарату "Цибулин", а також менша потреба матеріалів та обладнання значно знижують собівартість виготовлення препарату. При цьому використання за даним способом екстрагента рослинної олії дозволяє забезпечити більш м'яку дію препаратів на уражені органи і тканини, ніж при використанні препарату на основі 96° етилового спирту. В зв'язку з цим, отримані за пропонованим способом препарати можна використовувати для прямої обробки слизових оболонок, при запаленнях і пораненнях шкіри, тощо. ________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3