Спосіб оцінки ефективності лікування артеріальної гіпертензії

Спосіб оцінки ефективності лікування артеріальної гіпертензії, що передбачає визначення активності матриксних металопротеїназ, який відрізняється тим, що в сечі пацієнтів реєструють рівні вмісту активної судиноспецифічної форми матриксних металопротеїназ (ММП-9) за допомогою методу зимографії, встановлюють желатинолітичну активність ММП до та після лікування та оцінюють ефективність лікування артеріальної гіпертензії. (19) (21) u200807625 (22) 04.06.2008 (24) 10.11.2008 (46) 10.11.2008, Бюл.№ 21, 2008 р. (72) МАЙДАННИК ВІТАЛІЙ ГРИГОРОВИЧ, UA, ГАНУСЕВИЧ ІРИНА ІВАНІВН А, U A, СИДОРИК ЄВГЕН ПЕТРОВИЧ, UA, БУРЛАКА АН АТОЛІЙ ПАВЛОВИЧ, UA, ХАЙТОВИЧ МИКОЛА ВАЛЕНТИНОВИЧ, UA, БУРЛАКА ЄВГЕНІЯ АНАТОЛІЇВН А, UA (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМ. О.О. БОГОМОЛЬЦЯ, U A 3 36938 артеріального тиску. Оскільки добове моніторування вимагає носити монітор протягом доби, - це створює фізичний та психічний дискомфорт у пацієнтів. Найближчим аналогом способу, що заявляється, міг би бути спосіб оцінки ефективності терапії артеріальної гіпертензії за допомогою сцинтиграфічного методу ідентифікації активних форм ММП з використанням радіоактивного інгібітора ММП [123I]I-HO-CGS 27023A. Однак, даний метод визначення активності ММП є інвазивним, оскільки потребує введення в організм пацієнта специфічного радіофармпрепарата, що обмежує його повторне використання. Крім того, [123 I]I-HO-CGS 27023A є інгібітором ММП з широким спектром впливу, що унеможливлює виявлення активації окремих форм про-ММП, тобто їх диференційне визначення [8]. Імуногістохімічний метод визначення активних форм ММП в стінці судин з використанням поліклональних антитіл потребує виділення для діагностики сегментів судини, що є обмежувальною характеристикою для використання в клініці [9]. Задача, яка вирішує спосіб, що заявляється, полягає у визначенні рівнів вмісту активної судинно специфічної форми ММП-9 в сечі хворих з АГ методом зимографії, що забезпечує швидке, неінвазивне, високоінформативне дослідження і може використовува тись з раннього віку. Технічний результат дозволяє отримати високочутливу та специфічну діагностику ефективності терапії артеріальної гіпертензії. Поставлена задача вирішується завдяки тому, що у даному способі оцінки ефективності лікування артеріальної гіпертензії, що передбачає визначення активності матриксних металопротеїназ, згідно корисної моделі в сечі пацієнтів реєструють рівні вмісту активної судиноспецифічної форми ММП (ММП-9) за допомогою методу зимографії, встановлюють желатинолітичну активність ММП-9 до та після лікування та оцінюють ефективність лікування артеріальної гіпертензії. Основною відмінністю способу, що заявляється, є оцінка ефективності терапії артеріальної гіпертензії за допомогою визначення в сечі пацієнтів до та після лікування, лікування вмісту активної судиноспецифічної форми ММП (ММП-9) методом зимографії. Перевагами даного методу оцінки ефективності терапії артеріальної гіпертензії є його висока чутливість, швидкість, неінвазивність. Спосіб здійснюється наступним чином. Активність ММП досліджується методом зимографії в 12% поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію і 0,1% желатину в якості субстрату. Електрофорез проводиться при t=+4°C, в напрузі електричного поля 150V, протягом 4 годин. Після розділення досліджуваних білків проби, гель відмивається в 2,5% розчині тритону Х-100, потім інкубується в буфері з додаванням СаСІ2 (рH=7,5) протягом 18 годин при температурі 37°С, фіксується і забарвлюється 0,25% Кумассі бриліантовим синім. Після відмивання гелю у розчині оцтової кислоти з метанолом, протеолітична активність ММП візуалізується у вигляді знебарвлених смужок на синьому тлі, а їхня локалізація відповідає 4 молекулярній масі кожного із ферментів, які визначаються за стандартами молекулярної маси [10]. Оцінка протеолітичної активності проводиться шляхом виміру площі зони лізису. За інтенсивністю оптичної щільності смужок, визначається концентрація ММП, використовуючи для порівняння стандартний набір ММП-9. Спосіб не потребує значних зусиль з боку медичного персоналу. Під спостереженням знаходилось 120 дітей та підлітків у віці 11-18 років. За даними проведеного добового моніторингу артеріального тиску у 74 хворих виявлено порушення добового профілю артеріального тиску у вигляді стабільної артеріальної гіпертензії (САГ), у 46 - лабільної артеріальної гіпертензії (ЛАГ). Рівні активності ММП-9 складали в середньому (X±SD) у хворих з САГ 1,27±0,2мкг/г креатиніну, у пацієнтів з ЛАГ 2,0±0,18мкг/г креатиніну. Контрольна оцінка вищенаведених показників проводилась через 1 місяць після курсу терапії, який включав у пацієнтів з ЛАГ комплексний антиоксидантний мітохондріальнотропний препарат "Кудесан", у дітей із САГ на фоні симпатикотонії вихідного вегетативного тонусу - додатково небілет в дозі 5мг/добу, а у дітей із САГ на фоні ваготонії - еналаприл у дозі 10мг/добу. Після курсу лікування у всіх дітей відмічалось покращення клінічного стану та нормалізація добового профілю артеріального тиску. У дітей як з САГ, так і з ЛАГ виявлено статистичне достовірне зниження рівнів ММП-9 до 0,4±0,33мкг/г креатиніну та 1,25±0,75мкг/г креатиніну (Р