Засіб суслова-підгаєвської для лікування злоякісних пухлин

Засіб для лікування злоякісних пухлин, що містить комплексну сполуку металу, який відрізняється тим, що вміщує суміш кальцію глюконату і трилону Б Винахід відноситься до медицини, а саме, до експериментальної онкологи, і може бути застосований у КЛІНІЧНІЙ практиці для лікування неякісних пухлин ВІДОМІ протипухлинні засоби з алкіліруючою дією, зокрема, циклофосфан, який вводять щоденно по 100-150 мг/м2 курсами через кожні 3-5 тижнів (лив Н И Переводчикова Противоопухолевая терапия - М Медицина, 1986 - 204 с ) Дія циклофосфану спрямована на пригнічення проліферації клітин злоякісної пухлини шляхом блокування функціональної активності ХІМІЧНИХ груп у ДНК клітин пухлини, при цьому, атомарні водородні «мостики» у ДНК замінюються на алкільну групу Засоби вказаної групи відносяться до класу цитостатиків Однак, цьому засобу притаманні наступні недоліки - мала вибірковість відносно клітин пухлини (при його застосуванні ушкоджуються та гинуть здорові клітини у різних органах), - високу ступінь токсичності, - не «переводить» клітинний цикл у напрямку апоптозу - у програму природної смерті клітини Найбільш близьким по суті до засобу, є синтетичний препарат цисплатин, який застосовують внутрішньовенне в дозі 60-120 мг/м2 кожні 3-5 тижнів (див Д А Харкевец Фармакология Противоопухолевые средства - М Геотар Медицина, 1999 - С 580-596) Даний препарат є комплексною сполукою платини Вважають, що цисплатин створює сшивки молекул ДНК Однак, цей препарат має наступні недоліки - малу вибірковість відносно клітин пухлини (при його застосуванні пошкоджуються здорові клітини, так як до структури ДНК вноситься чужорідний ХІМІЧНИЙ елемент - платина), - відсутність репаративних процесів у неопластичних клітинах, та неспроможність переключення їх клітинного циклу на апоптоз, - антиметастатична дія при застосуванні засобу не виражена, - не відновлюється нормальна МІЦНІСТЬ МІЖ нуклеосомних зв'язків у макромолекулах ДНК В основу винаходу поставлено завдання створення такого протипухлинного засобу для лікування злоякісних пухлин, який дозволяв би підвищити антиметастатичний ефект, репаративні процеси у ядерному хроматині, або «переключення» неопластичної трансформації на апоптоз, нормалізувати міжнуклеосомальні та міжмолекулярні зв'язки у макромолекулах ДНК Поставлене завдання вирішується тим, що відомий засіб для лікування злоякісних пухлин, який містить комплексну сполуку металу, згідно винахо-ду вміщує суміш кальцію глюконату і трілону Б Передумовою для створення засобу стала раніш запропонована концепція, згідно якій у процесах ініціації злоякісного росту важливу роль відіграють порушення міжнуклеосомальних та міжмолекулярних зв'язків у ДНК, стабільність яких контролюється пстоновими і непстоновими ядерними білками, що пов'язані із кальцієм, дефіцит котрого з'являється у ядрах клітин пухлин (див Е И Суслов и соавт Роль ДНК-протеин-Са2 комплексов в канцерогенезе - Журн АМН Украины - 1997 - Т 3 - № 2 - С 282-291) Крім того, одною з передумов створення засобу стало припущення про те, що «МІЦНІСТЬ» міжмолекулярних зв'язків у макромолекулах ДНК залежить від включення її основ у комплексні сполуки із іонами металів Кальцій глюконат являє собою сіль глюконовоі кислоти В медицині він застосовується внутрішньовенно у вигляді 10 % розчину у ампулах по 42244 10 мл Цеп засіб використовують у заміщувальній терапії при дефіциті кальцію в організмі (див И С Чекман и др Справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии - 1986 - С 460) Трилон Б являє собою дінатрієву сіль етилендіамінтерауксусної кислоти Застосовується внутрішньовенне по 2-4 г в 500 мл 5 % розчину глюкози при ектопічній аритмії, патологічних закостеніннях скелету, склеродерми, відкладанні солей каль-цію у м'язах, нирках, суглобах (БМЭ Комплексо-ны - М Москва И-во Сов Энциклопедия, 1979 -С 278) Засіб Суслова-Підгаєвської отримують наступним чином 10 мл 1 0 % розчину кальція глюканату імітують із 10 мл 10 % розчину трилону Б Для лікування злоякісних пухлин використовують 0,2 мл цієї суміші на 1 кг ваги тварини Дослідним ШЛЯХОМ встановлено, що при зниженні дози засобу менш ніж 0,2 мл зникає протипухлинна дія, спостерігається прогресуючий ріст злоякісної пухлини При збільшенні дози засобу понад 0,2 мл проявляється токсична дія, що супроводжується дистрофічними змінами у внутрішніх органах Засіб застосовують наступним чином Мишам-самкам лінії C57BL/6 з перевитою карциномою Льюіс (3LL) масою 180-200 г, віком 2,5 МІСЯЦІ щоденно, починаючи із 7-і доби після перевиття клітин пухлини аж до 31-і доби, вводять у ретробульбарне венозне сплетіння засіб СусловаПідгаєвсь-кої по 0,2 мл на 1 кг ваги тварини Забиття тварин проводили шляхом цервікальної дислокації під ефірним наркозом В легенях підраховували КІЛЬКІСТЬ метастазів і вагу легені з метастазами Дані дослідження проводили як на тваринах, що лікували, так і на тваринах не лікованих (група контролю) Тканини легень вивчали ГІСТОЛОГІЧНО і ГІСТОХІМІЧНО При цьому, визначали інтенсивність проліферації і наявність ознак апоптозу у клітинах органу "МІЦНІСТЬ" міжмолекулярник зв'язків у хроматині оцінювали по розробленій раніш методиці ГІСТОХІМІЧНОЇ реакції на виявлення кальційпротешових сполук (КПС) на гістологічному препараті (див Patent number 5,795,786 US Int C l 6 G01 N33/574 U S СІ 436/64, Method for the diagnosis of human malignant tumors / Suslov E I /UA, № 454,208, Mar 12,1993 Aug 18, 1998 Dec 10,1992 (RU) -№93030251 Винахід проілюстрований наступними прикладами дослідження тканин легень у зв'язку з переважним метастазуванням пухлини саме у легені Приклад 1 Випробування засобу проводилося за вищеописаною методикою Термін спостереження - 7 діб (протокол № 10), без лікування При макроскопічному дослідженні встановлено, що патологічних змін в легенях не виявлено При мікроскопи тканин с легенях визначаються окремі екстравазити клітин пухлини, у ядрах котрих можна виявити продукти ГІСТОХІМІЧНОЇ реакції на КПС, які інтенсивно забарвлені у чорно-коричньовий колір Приклад 2 Випробування засобу проводилося за вищеописаною методикою Термін спостереження - 7 діб (протокол № 11), лікування даним засобом При макроско пічному дослідженні тканин легень метастазів не виявлено Мікроскопія екстравазати клітин карциноми Льюіс в легенях заблоковані Відсутні умови для метастазування Приклад 3 Випробування засобу проводилося за вищеописаною методикою Термін спостереження - 11 діб (протокол № 19), без лікування При макроскопічному обстеженні в тканинах легень виявлено 20 метастазів (пухлинних вузлів) Вага легень разом із метастазами - 480 г Мікроскопічно всі пухлинні клітини інтенсивно маркіровані на КПС Така ж маркіровка спостерігається у епітелії бронхів і у клітинах альвеолярного епітелію, що може розглядатися як ознака починаючої непластичної трансформації, тобто визначається виражене прогресування росту злоякісної пухлини з інтенсивною проліферацією и клітин Апоптоз у них відсутній Чітка маркіровка ядер пухлинних клітин продуктами ГІСТОХІМІЧНОЇ реакції па КПС свідчить про послаблення міжмолекулярних зв'язків у макромолекулах ДНК Приклад 4 Випробування засобу проводилося за вищеописаною методикою Термін спостереження - 11 діб (протокол № 20), лікування даним засобом При макроскопічному обстеженні тканин легень патологічних змін не виявлено Вага легень - 420 г Відмічається чітко виражена вибіркова дія протипухлинного засобу СусловаПідгаєвської проліферація пухлинних клітин різко обмежена Виявляються поодинокі екстравазати пухлинних клітин, в ядрах яких дуже слабка маркировка на КПС, що свідчить про репаративні процеси відновлення "МІЦНОСТІ" міжмолекулярних зв'язків у ДНК Визначається чітка фрагментація ядер Це вказує на посилення апоптозу в пухлинних клітинах У поруч розташованих нормальних клітинних елементах аерогематичного бар'єру проліферація та апоптоз не посилюються Приклад 5 Випробування засобу проводилося за вищеописаною методикою Термін спостереження - 31 доба (протокол № 25), без лікування При макроскопічному дослідженні тканини легень виявлено 61 метастаз Вага легень разом із останніми 525,0 г Мікроскопічна діагностика показала, що у тканинах легень має місце термінальна стадія раку - інтенсивна проліферація злоякіснопухлинних клітин (багато МІТОЗІВ, поліплоїдія, атипія), некроз та розпад легеневої тканини Апоптоз відсутній Усі ядра пухлинних клітин інтенсивно маркіровані продуктами ГІСТОХІМІЧНОЇ реакції на КПС, що свідчить про крайню ступінь послаблення міжмолекулярних зв'язків у макромолекулах ДНК Така ж маркіровка спостерігається як у епітелії бронхів, так і у клітинах альвеолярного епітелію Приклад 6 Випробування засобу проводилося за вищеописаною методикою Термін спостереження 31 доба (протокол № 29), лікування даним засобом При макроскопічному дослідженні легень патологічних змін не виявлено Вага легень 500,0 г Відмічається чітко виражена вибіркова дія протипухлинного засобу Суслова-Підгаєвської ділянки метастазування чітко відгалужені молодою сполучною тканиною У ядрах клітин виражені апоптичні зміни карюпікнози, конденсація та фрагментація хроматина та цитоплазми 42244 Ядра клітин пухлини слабко маркіровані продуктами ГІСТОХІМІЧНОЇ реакції на КПС, що свідчить про "зміцнення" міжмолекулярних зв'язків у ДНК КЛІТИН паренхіми легень і про блокування їх проліферації з одночасним переходом у апоптоз недиференціиованих ракових клітин У поруч розташованих нормальних клітинних елементах паренхіми ознак проліферації та апоптозу не спостерігається У всіх інших паренхіматозних органах спостерігалися однотипні зміни, що були подібні змінам у тканинах легень Засіб, був застосований на ЗО мишах-самкам лінії C57BL/6 із перевитою карциномою Льюіс (3LL) Контроль - 10 тварин, що не приймали лікування Термін спостереження - 31 доба В результаті проведених досліджень встановлено, що у порівнянні із прототипом засіб, який пропонується, завдяки його специфічній фармакокінетиці (доставка суміші кальцію глюконату з трилоном Б у ядерний хриматин клітин, де спостерігаються порушення міжмолекулярних зв'язків у макромолекулах ДНК) має більш виражену хіміотерапевтичну ефективність високу вибірковість відносно пухлинних клітин, виражений антиметастичний ефект, що перевищує цей показник у прототипа у середньому в 15 разів (табл), стимулює репаративні процеси у ДНК клітин паренхіми легень шляхом зміцнення у них міжмолекулярних зв'язків, а також сприяє апоптозу проліферуючих недиференціиованих ракових клітин Таблиця Порівняльна характеристика КІЛЬКОСТІ метастазів і ваги легень з метастазами у тварин с карциномою Льюіс 3LL, що приймали і не приймали протипухлинну терапію засобом, що пропонується Тварини, що приймали лікування Групи тварин (доби) КІЛЬКІСТЬ метаста зів у легенях Вага легень із метастазами (г) 1-ягр(7) 2-я гр(11) 3-я гр(31) 1,0+0,7 15,0+0,4 427,0+8,0 486,0+8,0 Контроль (тварини, що не приймали лікування) КІЛЬКІСТЬ метастаВага легень із зів у легенях метастазами (г) Окремі екстравазати КЛІТИН 18,0+8,3* 473,0+6,0** 58,0+8,3* 520,0+6,0** Примітки * - Рі