Спосіб оцінки ступеня дисбіозу (дисбактеріозу) органів і тканин

Спосіб оцінки ступеня дисбіозу (дисбактеріозу) органів і тканин, що включає визначення активності ферментів уреази і лізоциму, знаходження співвідношення відносних активностей уреази і лізоциму, який відрізняється тим, що здійснюють забір біологічного матеріалу (біоптату) і, якщо співвідношення відносних уреази і лізоциму перевищує одиницю, то це свідчить про наявність дисбактеріозу, ступінь якого корелює з величиною співвідношення уреаза/лізоцим. Корисна модель відноситься до медицини, конкретно до визначення ступеню дисбіозу (дисбактеріозу) окремих тканин і органів. Відомо, що дисбіоз є патологічний синдром, суть якого полягає в порушенні якісного і кількісного складу мікрофлори, яка існує в шлунковокишковому тракті, ротовій порожнині, шкірі, дихальних шляхах, урогенітальній сфері, тощо [Циммерман Я.С. // Клин, медицина. - 2005. - №4. - С 14-22; Герасимова Е.В. и др. // Вестник РАМН. 2006. - №1. - С. 15-18; Бережний В.В. і Андрікевич I.I. // Одеський мед. журн. - 2008. - №4. - С. 18-21]. На тлі дисбіозу дуже легко розвиваються різноманітні захворювання, тому визначення ступеню дисбіозу в конкретних біотопах має велике значення для оцінки фізіологічного стану того чи іншого органу і визначення ефективності лікування. Стан дисбіозу, як правило, визначають для порожнин шлунково-кишкового тракту, урогенітальної сфери, ротової порожнини, використовуючи, головним чином, мікробіологічні або імунологічні методи дослідження [Методические рекомендации МЗУ «Микробиологическая диагностика дисбактериозов». - К., 1986]. Відомі також способи визначення мікрофлори за допомогою флуоресцентних методів, за вмістом мікробних нуклеїнових кислот (метод ПЛР), за концентрацією специфічних для тих чи інших мікробів органічних сполук, вміст яких визначають за допомогою хроматографічних методів [Александров И.Т. и др. // Вестник РАМН. - 2003. - №9. - С. 39-44; Николаева Е.Н. и др. // Стоматолог. - 2005. №4. - С. 16-20]. Недоліком вищеназваних способів є наступне: 1. Тривалість проведення мікробіологічного дослідження, його недостатня ефективність, оскільки засівні методи визначають лише 1-2 % фактично наявних мікробів. 2. Складність обладнання і надто дорогі реактиви для метолів ПЛР і хроматографічних. 3. Неможливість кількісного визначення ступеню дисбіозу. Тому кращим способом визначення наявності умовно-патогенних і патогенних мікробів є визначення специфічних для бактерій ферментів, зокрема уреази [Гаврикова Л.М. и Сегень И.Т. // Стоматология. - 1996. -Спец. выпуск. - С. 49-50]. В якості прототипу ми вибрали спосіб оцінки дисбактеріозу порожнини рота за визначенням активності уреази та лізоциму [Левицький А.П. та ін. Деклараційний патент на корисну модель України №16048 від 17.07.2006]. У відповідності до (19) UA (11) 43140 (13) U (21) u200815092 (22) 26.12.2008 (24) 10.08.2009 (46) 10.08.2009, Бюл.№ 15, 2009 р. (72) ЛЕВИЦЬКИЙ АНАТОЛІЙ ПАВЛОВИЧ, ДЄНЬГА ОКСАНА ВАСИЛІВНА, СЕЛІВАНСЬКА ІРИНА ОЛЕКСАНДРІВНА, МАКАРЕНКО ОЛЬГА АНАТОЛІЇВНА, ДЕМ'ЯНЕНКО СВІТЛАНА ОЛЕКСАНДРІВНА, ЦІСЕЛЬСЬКИЙ ЮРІЙ ВІКТОРОВИЧ (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ СТОМАТОЛОГІЇ АМН УКРАЇНИ" 3 43140 цього патенту збирають слину і в ній визначають активність уреази і лізоциму. Після цього розраховують відносну активність цих ферментів і за їх співвідношенням розраховують ступінь дисбіозу за формулою: СД = У відн. Лвідн. . Недоліком прототипу є те, що він дає оцінку стану мікробіоценозу лише для слини, що практично не може свідчити про стан мікробіоценозу в слизовій оболонці рота. З метою усунення цього недоліку запропоновано робити біопсію слизової оболонки і в ній визначати активність уреази і лізоциму. Для порівняння аналогічні аналізи роблять і для 4 контрольного біоптату. Розраховують відносні активності уреази і лізоциму за формулами: У відн = Л досл. У досл. . , Лвідн. = Лконтр. У контр. За співвідношенням відносних активностей уреази і лізоциму визначають ступінь дисбіозу даної тканини: СД = У відн. Лвідн. . Для перевірки заявляємого способу було відтворено у щурів дисбактеріоз за допомогою антибіотика лінкоміцину у відповідності до патенту на корисну модель №31012 від 2008 р. Таблиця 1 Активність лізоциму та уреази в травній системі щурів за умови експериментального дисбіозу Тканини і ферменти 1.1 Лізоцим, ед/г 1.2 Уреаза, нкат/г І група - інтактні (n=10) 1. Слизова оболонка тонкої кишки II група - дисбіоз (n=10) 0,48±0,08 10,8±1,7 0,31±0,05 р>0,05 26,7±3,0 р0,3 2,36±0,78 p>0,3 5 43140 6 Таблиця 2 Рівень маркерів запалення в травній системі щурів за умови експериментального дисбіозу Тканини і маркери запалення 1.1 МДА, мкмоль/кг 1.2 ЗПА мк-кат/кг 1.3 КФ, мк-кат/кг І група - інтактні (n=10) 1. Слизова оболонка тонкої кишки II група - дисбіоз (n=10) 9,23±0,58 р>0,3 4,96±0,52 р>0,05 117,4±14,7 р0,05 40,9±4,6 р0,05 36,7±5,4 р>0,05 15,7±1,8 40,7±4,6 3.3 КФ, мк-кат/кг 24,6±2,2 4 Слизова оболонка ясен 4.1 МДА, мкмоль/кг 4.2 ЗПА нкат/кг 18,5±2,0 р>0,05 37,8±7,6 р>0,1 29,8±5,0 р>0,1 15,4±1,8 27,9±7,3 4.3 КФ, мк-кат/кг 26,0±5,1 Примітка, р - покажчик достовірності відмін в порівнянні з інтактною групою. З цією метою було використано 20 щурів лінії Вістар (4 місяці, самці), яких було поділено на 2 групи: контрольну (інтактні тварини) і дослідну, у щурів якої відтворювали дисбіоз. На 10-й день після моделювання дисбіозу щурів піддавали евтаназії і забирали слизову оболонку тонкої кишки, щоки, язика і ясен. В гомогенатах слизової оболонки визначали активність уреази за методом [Гаврикова и Сегень, 1996], лізоциму за методом [Левицький А.П. Лізоцим вместо антибиотиков. - 2005]. Результати визначення біохімічних показників наведено в таблиці 1. На підставі цих даних були розраховані відносні активності уреази і лізоциму (Увідн. Лвідн.) і за їх співвідношенням роз Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко рахована ступінь дисбіозу (СД) за формулою: СД = У відн. Лвідн. В контролі СД для усіх досліджуваних тканин дорівнював 1,0±0,1. Відповідні результати наведено в таблиці 2, з якої видно, що найбільша ступінь дисбіозу відмічається в слизовій оболонці тонкої кишки, а найменша - в слизовій оболонці щоки і ясен. Таким чином, запропонований метод дозволяє легко визначати ступінь дисбіозу в тканинах і органах людини і тварин, що надзвичайно важливо для пошуку про- і пре біотичних препаратів. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601