Спосіб моделювання рецидивуючого герпетичного кератиту

Спосіб моделювання рецидивуючого герпетичного кератиту, що полягає в нанесенні на рогівку ока тварини, раніше інфікованої вірусом простого герпесу, поверхневого надрізу, який відрізняється тим, що за допомогою трепана з обмежувачем глибини проводять кільцевий дозований надріз рогівки, в межах надрізу видаляють передній епітелій рогівки і вводять підшкірно стандартну дозу герпетичної вакцини Винахід відноситься до медицини, зокрема до офтальмології і може бути використаний в науковій роботі, що вимагає моделювання вірусних кератитів для експериментального вивчення запального- інфекційного процесу в рогівці Відомий спосіб моделювання кератита, що полягає в тому, що за допомогою ножа Грефе на рогівку ока кролика наносять 2 паралельні поверхневі ЛІНІЙНИХ надріза довжиною по 5мм У кон'юнктивальну порожнину вносять культуру вірусу простого герпеса (Шпак Т Н Експериментальні і КЛІНІЧНІ дослідження по лікуванню герпетичного кератиту фонофорезом штерферона , Дисертація на здобуття вченого ступеню канд мед наук, 1980) Однак при цьому способі не дозують глибину нанесення надрізу, площу ерозирування поверхні рогівки, КІЛЬКІСТЬ вірусної суспензії, що вводиться не дозована, отже неможливо дозувати міру зараження і стандартизувати модель, а в наукових дослідженнях необхідно використати стандартну модель Нами розроблений спосіб моделювання вірусного кератиту, що полягає в нанесенні на рогівку тварини травми і внесення суспензії вірусу, ВІДМІННИЙ тим, що за допомогою трепана з обмежувачем глибини проводять кільцевий дозований надріз рогівки, в межах надрізу видаляють епітелій і наносять на скаріфіковану поверхню рогівки стандартну дозу зависі вірусу (Гайдамака Т Б "Спосіб моделювання вірусного кератиту" Патент України № 25575 А) ється наступний метод, що полягає в тому, що в строму рогівки вводиться культура вірусу простого герпеса, внаслідок чого розвивається стромальний герпетичний кератит (Kaufman HE, Varnell ED, Thompson HW Cidofovir and experimental herpetic stromal disease Arch Ophthalmol 1999 Jul,117(7) 925-8) ВІДОМІ моделі рецидивуючого герпетичного кератиту можна розділити на 3 категорії Перша тварини інфікуються і очікуються спонтанні рецидиви (Kaufman HE, Varnell ED, Centifanto-Fitzgerald YM, De Clercq E, Kisslmg GE Oral antiviral drugs in experimental herpes simplex keratitis Antimicrob Agents Chemother/1983-V24-P 888-891) Однак низька частота і неможливість планувати загострення робить цей тип моделювання незручним для експериментальних досліджень Друга категорія моделей рецидивуючого герпетичного кератиту -використання імуносупресм (введення антиметаболітів, кортикостероїдів, які можуть викликати рецидив кератита у тварин (Laibson PR, Kibnck S Reactivation of herpetic keratitis by epinephrme in rabbit Arch Ophthalmol, 1966, 75, 254-260), однак патогенез цих рецидивів відрізняється від такого у людини Третя категорія включає різні травми, що викликають рецидив кератита хірургічну, опромінення ультрафіолетовими променями, юнофорез, використання високої температури (Varnell ED, Kaufman HE, Hill JM, Thompson HW Cold stressinduced recurrences of herpetic keratitis in the squerrel monkey In vest Ophthalmol Visuel Science 1995 V36N6P 1181-1183) Відомо, ЩО при введенні герпетичної вакцини хворим рецидивуючим герпетичним кератитом Ці способи використовуються для моделювання гострого первинного поверхневого герпетического кератита Для моделювання первинного стромального герпетичного кератиту найчастіше використову 44201 приблизно у 10% випадків відмічають виникнення інфекційно-запальний процес з поразкою строми осередкової алергічної реакції (А А Каспаров рогівки ока, однакової міри тяжкості близький по "Офтальмогерпес" //М Медіцина -1994г) розвитку до натуральної інфекції, що забезпечує розвиток інфекційно-запального процесу у більшоНайбільш близьким є спосіб моделювання ресті тварин, що дозволяє вивчати ефективність кецидивуючого герпетичного кератиту, коли заражератопластики і інших способів лікування цього ним вірусом простого герпесу кроликам виробляли важкого швалідизуючого захворювання очей радіальні насічки рогівки, при цьому рецидив герпетичного кератиту був отриманий у 33% випадків Поставлена задача вирішується тим, що в ( Y Haruta, L Maquire, D Rootman, J Hill "Recurспособі моделювання вірусного кератита, що поrent Herpes Simplex Virus Typel Corneal Epithelial лягає в нанесенні на рогівку ока тварини, раніше lesion After Radial Keratotomy in the Rabbit// Arch інфікованої вірусом Ophthalmol -V I05 -1987 -P 692-694) Недоліком простого герпеса, поверхневого надрізу згідно цього способу є низька частота герпетичного кераз винаходом за допомогою трепана з обмежуватита у експериментальних тварин чем глибини проводять кільцевий дозований надріз рогівки, в межах надрізу видаляють епітелій, і У основу винаходу поставлена задача розробвводять підшкірно стандартну дозу герпетичної ки способу моделювання рецидивуючого герпетивакцини ченого кератиту, який дозволив би моделювати Причинно-слідчі зв язки Нанесення стандартної травми рогівки - кільцевого Завдяки кільцевій дозованій по глибині насічці і видозованого по глибині надрізу з видаленням епіте- даленню епітелію в межах кільцевої зони досягаєтьлію в його межах, - раніше зараженій тварині ся стандартна травма епітелію і строми рогівки Введення герпетичої вакцини Завдяки введенню герпетичної вакцини раніше інфікованій тварині домагаємося розвитку рецидиву герпетичного стромального кератиту близького по патогенезу з природною інфекцією Поєднання стандартної травми і введення герпети- Завдяки поєднанню стандартної травми рогівки у раніше інфікованої тварини і введенню герпетичної чної вакцини вакцини забезпечується виникнення рецидиву патологічного процесу (рецидиву стромального герпетичного кератиту) у 95% експериментальних тварин Нанесення ж просто механічної травми раніше інфікованій тварині забезпечує виникнення рецидиву герпетичного кератиту у 33% тварин Поєднання цих ознак (стандартна травма рогівки, введення герпетичної вкцини підшкірне) забезпечує отримання стандартної моделі рецидивуючого стромального герпетичноЮ кератиту у 95% експериментальних тварин Отримана модель може бути використана в наукових дослідженнях Виключення з технології хоч би однієї з цих ознак не дозволить досягнути поставленої задачі Спосіб здійснюється таким чином Тварині, раніше інфікованій вірусом простого герпесу 1 типу> після епібульбарної анестезії фіксують очне яблуко за сухожилля верхнього прямого м'яза Трепаном певного діаметра з обмежувачем глибини проводять кільцевий дозований надріз в центрі рогівки, в межах надрізу сухим марлевим тампоном видаляють епітелій рогівки Підшкірно вводять герпетичну вакцину Випробування запропонованого способу проведене у відділенні патології і мікрохірургії Інституту очних хвороб і тканинної терапії їм В П Філатова АМН України в процесі виконання докторської дисертації на тему «Удосконалення комплексної системи медикаментозного і хірургічного лікування хворих рецидивуючим герпетичним кератитом на основі вивчення деяких сторін патогенеза захворювання" Конкретний приклад У кролика породи шиншилла, який був інфікований вірусом простого герпеса 1 типу 6 МІСЯЦІВ тому, вагою 2,5кг віком 10 МІСЯЦІВ проводили епібульбарну анестезію шляхом інстиляції 0,25% розчину дікмну 3 рази протягом 5 хвилин Очне яблуко фіксували пінцетом Трепаном ФМ 5 діаметром 4мм проводили насічку в центрі рогівки глибиною 0,1мм Епітелій видалений за допомогою марлевого тампона Підшкірно в області верхнього віка введена герпетична вакцина 0,05мл виробництва Одеського заводу бактерійних препаратів У перші доби після моделювання у кролика з'явився блефароспазм, гіперемія кон* юнктиви Ерозія рогівки, нанесена при моделюванні поменшала до 2мм епітелій рогівки набряклий На другій добі ерозія, нанесена під час моделювання, заепітелізувалась На третій добі відмічався виражений набряк епітелію рогівки, набряк стром рогівки з дифузною інфільтрацією, а також появлялись виразки На п'ятій добі після моделювання у кролика відмічали гіперемію кон'юнктиви, набряк рогівки в центрі, дифузну інфільтрацію, виразки рогівки зберігалися Таким чином, нами була отримана характерна клінічна картина рецидивуючого герпетичного стромального кератиту з виразками Усього в експерименті проведено моделюван 44201 ня на 20 кроликах (20 очах) Для експеримента використали кроликів породи шиншилла вагою 2,5 - 3,0кг, однакового віку (10 МІСЯЦІВ), ЩО знаходилися в однакових умовах розташування У всіх кроликів моделювання було зроблене по запропонованій технології після нанесення кільцевого дозованого надрізу рогівки трепаном ФМ 5 з обмежувачем глибини 0,1мм діаметром 4мм, в межах надрізу сухим марлевим тампоном видаляли епітелій рогівки Підшкірно вводили 0, 05мл герпетичної вакцини Внаслідок моделювання ми отримали однотипну клінічну картину, характерну для рецидивуючого стромального герпетичного кератиту з виразками На першій добі після моделювання у всіх кроликів з'явився блефароспазм, гі} перемія кон'юнктиви, відокремлюване з кон юнктивальної порожнини було відсутнє Ерозія рогівки, нанесена при моде л юванні, частково заепітелізована, епітелій рогівки набряклий На другі доби після моделювання відмічалася повна зпітелізація нанесеної ерозії, виражений набряк епітелію в центрі рогівки На п'ятій добі відмічали дисковидни й набряк в центрі рогівки з інфільтрацією і виразками На 8 - 9 доби запальний процес був виражений максимально Відмічалася типова картина рецидивуючого герпетичного стромального дисковидного кератиту з виразками Після цього запальний процес пішов на спад, почалася епітелізація виразок рогівки, зменшення інтенсивності набряку епітелію і строми рогівки, поступове розсмоктування інфільтратів Епітелізація завершилася на 12 -16 добі, інфільтрати розсмокталися на 1 4 - 2 0 добу після моделювання Ознаки запалення зникли до 20 діб з утворенням нештенсивних стромальных помутнінь рогівки Даний спосіб моделювання, що пропонується дозволив отримати в експерименті рецидивуючий стромальний кератит з виразками у 19 з 20 тварин (95%), що вигідно відрізняє наш спосіб від тих, що використовувалися раніше Таким чином використання цієї моделі показало, що вона дозволяє отримати стандартну картину рецидивуючого стромального дисковидного герпетичного кератиту з покриттям виразками в експерименті і гтатистично достовірно вивчати способи медикаментозного і хірургічного лікування, що пропонуються ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90