Спосіб пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень

1 Спосіб пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень in vivo, що включає одноразове введення протягом 6 діб тваринам з експериментальною метастазуючою пухлиною карциномою Льюіс - антиметастазуючого агента, який відрізняється тим, що як антиметастазуючий агент використовують сироватку крові тварин, яким введений іприт, що отримана за період з 20 до 26 години після введення іприту 2 Спосіб пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень за п 1, який відрізняється тим, що сироватку крові вводять по 0,1 мл на 10 г маси тварини з експериментальною метастазуючою пухлиною 3 Спосіб пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень за п 1, який відрізняється тим, що іприт вводять тваринам, зокрема крисам у дозі 7-15мг/кг маси тіла 4 Спосіб пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень за п 1, який відрізняється тим, що іприт вводять тваринам, зокрема кролям у дозі 180-220 мг/кг маси тіла Запропонований винахід відноситься до галузі медицини, зокрема, до онкофармаколопі, а саме, до способів пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень, та може бути використаний у медичній лабораторній практиці для створення раціональних моделей та схем фармакокорекцм метастазуючих злоякісних новоутворень Відомий спосіб фармакокорекци злоякісних пухлин фармакологічним препаратом ембіхін (див кн М Д Машковский Лекарственные средства - М Медицина, 1988 - т 2, С 426) По відомому способу препарат ембіхін вводять внутрішньовенне у загальній дозі 80 ЮОмг на 1кг маси тіла тварини протягом ЗО діб, тричі на тиждень При використанні цього способу спостерігається зменшення розміру злоякісних пухлин, але метастатичного ефекту не виявлено, зокрема, зменшення об'єму метастазів та їх КІЛЬ ходу, є спосіб пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень (див кн Воронцова А Л Роль интерферона в противоопухолевой резистентности Экспериментальная онкология - 1989 т 11, № 6, С 49 54), який не здійснює імуносупресивної дії на організм та не викликає порушень генома Суть відомого способу полягає в тому, що в організм тварини, зокрема мишам, з експериментальною метастазуючою пухлиною - карциномою Льюіс [яку модулюють відомим способом у медичній практиці (див кн Петик А В , Яковская О Н , Винницкий В Б Роль пристеночного тромбообразования в кровеносных сосудах легких при метастазировании карцином Льюиса у мышей линии с 57BL - 6 Экспериментальная онкология - 1999, т 21, № 3 4, С 239 - 242)] вводять втурішньочеревинно рекомбінатний сі2-інтерферон (реаферон) у дозі 5000ЕД на 20г маси щодобово на протязі 6 діб Проте, вище вказаний спосіб недостатньо ефективно пригнічує ріст метастазуючої тканини, зокрема КІЛЬКІСТНИЙ і об'ємний показники Перед авторами постала задача розробити спосіб пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень, який би здійсню КОСТІ Крім того, при фармакокорекцм злоякісних пухлин препаратом ембіхін спостерігаються такі побічні ефекти, як пригнічення імунної системи, хромосомні аберракцм Найбільш близьким по технічній суті та досягнутому ефекту, до запропонованого вина ю 44599 вав більш ефективне гальмування процесів метастазування злоякісних новоутворень, тобто зменшував би КІЛЬКІСТЬ та об'єм метастазів Ця задача вирішується тим, що у відомому способі пригнічення метастазуючої активності злоякісних новоутворень in vivo, що включає одноразове введення тваринам, зокрема мишам, з експериментальною метастазуючою пухлиною - карциномою Льюіс антиметастатичного агента протягом 6 діб, згідно винаходу, як антиметастазуючий агент використовують сироватку крові тварин, наприклад, крис, яким введений іприт у дозі 7 - 15мг/кг, і що отримана за період з 20 до 26 години після його введення, яку уводять по 0,1 мл на 10г маси крис або, наприклад, кролів, яким вводили іприт у дозі 180 - 220мг/кг маси, отриману за аналогічний період часу, при цьому сироватку вводили мишам по 0,1мл на 10г маси Як показали практичні дослідження, сироватка крові, що отримана від тварин, "отруєних" іпритом, менш, ніж за 20 годин неефективна, а отримання сироватки крові, коли мине більше 26 годин після введення іприту, неможливе внаслідок загибелі отруєних тварин Введення тваринам іприту у дозі 7 15мг/кг маси тіла криси або 180 - 220мг/кг маси тіла кроля відповідає потребам збереження життєздатності тварин у певний проміжок часу - до 26 годин при дії смертельних отруйних доз іприту (Дисс канд биол наук - Киев, КНИИФТ, 1988 -127 с инв №0187) Доза введення сироватки крові мишам 0,1 мл на 10г маси-обрана у ВІДПОВІДНОСТІ Зрезультатами, отриманими у вище наведеній дисертаційній роботі Завдяки тому, що у запропонованому способі, згідно винаходу, як антиметастазуючий агент використовують сироватку крові тварин, наприклад, крис або, наприклад, кролів, "отруєних" іпритом, спостерігається зменшення КІЛЬКОСТІ метастазів та їх об'єм Спосіб здійснюють таким чином - введення тваринам іприту проводять підшкірним способом у діапазоні доз 7 15мг/кг маси тіла криси або у діапазоні доз 180 - 220мг/кг маси тіла кроля у масляному розчині, потім з 20 до 26 години тварин декапітують та загальновідомим способом у медичній практиці отримують сироватку крові, - для створення моделі експериментальної метастазуючої пухлини -карциноми Льюіс штам пухлини перещеплюють мишам лінії С57В1/6 з масою тіла 18 - 20г Матеріал для перещеплення пухлини готують таким чином Мишей забивають методом шийної деблокацм Шкіру у зоні пухлини обробляють 70%-ним розчином етилового спирту, потім шкіру розтинають Пухлину асептичне вилущують та поміщають у розчин Хенкса 3 пухлини витягують ділянки тканини, позбавлені видимих ознак некрозу, промивають та готують звись Пухлинні клітини вводять мишам у подушечку задньої лапи, яку разом з пухлиною ампутують через 18 діб після перещеплення пухлини КІЛЬКІСТЬ та об'єм метастазів у легенях визначають візуально через 10 діб після видалення пухлини Об'єм метастазів обчислюють за формулою V = 0,5d 3 , де d - діаметр метастазу, V - об'єм метастазу (мм 3 ), - антиметастазуючу дію сироватки крові, що застосовується у запропонованому способі, перевіряли за схемою, відомою для прототипу, через 24 години після хірургічного видалення пухлини мишам внутрішньочеревинно вводили отриману сироватку крові у вигляді розчину м люфілізату у дистильованій воді по 0,1мл на 10г маси тварини одноразово на добу протягом 6 діб Метастази реєструють з моменту загибелі першої тварини Позитивні результати запропонованого винаходу підтверджуються даними, наведеними у табл 1 і табл 2 Таблиця 1 Вплив сироватки "отруєних" іпритом крис на КІЛЬКІСТЬ та об'єм метастазів у легенях мишей з експериментальною карциономою Льюіс (М ± m*, n = 7) Відомий спосіб Показники, Контроль** Пропонований спосіб (протитип), 5000МЕ що досліджуються (група 1) (група 3) (група 2) КІЛЬКІСТЬ метастазів 9,30±0,47 5,10±0,46 3,85±0,26 Об'єм метастазів, мм'5 31,80±1,06 10,46±1,53 5,52±0,68 Таблиця 2 Вплив сироватки "отруєних" іпритом кролів на КІЛЬКІСТЬ та об'єм метастазів у легенях мишей з експериментальною карциономою Льюіс (М±т*, п= 7) Показники, що Контроль** Пропонований досліджуються (група 1) спосіб (група 2) КІЛЬКІСТЬ мета стазів Об'єм метастазів, мм3 9,30±0,47 3,98±0,21 31,80±1,06 5,30±0,27 де М - середня арифметична величина всіх показників, отриманих у кожній групі тварин, m - стандартна помилка результату, встановленого для кожної групи тварин, ** - група тварин, яким вводили ВІДПОВІДНІ об'єми фізіологічного розчину (група 1), п - КІЛЬКІСТЬ тварин у групі Отже, пропонований спосіб перевищує відомий за своєю ефективністю КІЛЬКІСТЬ метастазів у легенях у 1,25 рази менше після застосування сироватки крові тварин, отриману з 20 до 26 години після введення їм іприту, ніж після застосування способу за прототипом Об'єм метастазів у легенях після застосування сироватки зменшується 5 44599 6 у 2 рази у рівнянні з аналогічним показницеси метастазування, може значно підвиком за відомим способом (прототипом) щити виживання ссавців при онкозахворюТаким чином, пропонований винахід, за ваннях на ПІЗНІХ стадіях розвитку метастадопомогою якого суттєво гальмуються прозів ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90