Спосіб визначення показань до гормонотерапії раку молочної залози

Спосіб визначення показань до гормонотерапії раку молочної залози, що включає дослідження Винахід відноситься до медицини, а саме до онкологи, і може бути використаний для визначення показань до гормонотерапії в комплексному лікуванні раку молочної залози (РМЗ) Рак молочної залози - це перша за частотою локалізація раку в жінок В Україні в 90-х роках захворюваність складає 56 випадків на 100000 населення [1] і тенденція до зростання продовжується Більш НІЖ СТОЛІТНІЙ ДОСВІД вивчення різних ас пектів раку молочної залози і різних методів його лікування вказують на те, що естрогени є ведучими факторами в канцерогенезі пухлин молочних залоз в експерименті і КЛІНІЦІ Процес канцерогенезу включає три основних етапи ініціації, промоцм і прогресії Відомо, ЩО, ЯКЩО ініціація нормальної клітини молочної залози відбулася, то естрогени забезпечують реплікацію ушкодженої клітини Таким чином, естрогени є основним біологічним субстратом розвитку раку молочної залози Гормонотерапія раку молочної залози займає визначне місце в комплексному лікуванні даної патології Починаючи з 1996 року [2] вона зазнала значних змін якщо на перших етапах це було хірургічне видалення яєчників, то в наступні роки розроблялися методи консервативного впливу на органи, що беруть участь у синтезі естрогенів [3] В даний час гормональні препарати застосовуються на різних етапах комбінованого і комплексного методів лікування операбельних форм раку молочної залози, а також у випадках генералізації пухлини і виявлення в ній рецепторів естрогену та прогестерону, який відрізняється тим, що післяопераційні експлантати з пухлини культивують у дифузійних камерах протягом 5 діб, поділяють на контрольний та досліджувані зразки, в останні додають етинілестрадюл та медроксипрогестерон в розрахунку 0,00002 мг та 0,2 мг, ВІДПОВІДНО, на 2 мл культурального середовища, відтворюють тримірний ріст пухлинних клітин, порівнюють результати і при стимуляції чи пригніченні росту клітин у досліджуваному матеріалі судять про показання до гормонотерапії пухлинного процесу Значний прогрес у лікуванні раку молочної залози внесли дослідження з виявлення і КІЛЬКІСНОГО визначення в пухлинних клітинах рецепторів до естрогенів і прогестерону [4] У 1962 р вперше вдалося припустити існування рецепторів естрогенів у пухлинах, а пізніше використовувати визначення рівня цих рецепторів для прогнозування гормоночутливості Виявлення рецепторів стероїдних гормонів (естрогенів, прогестерона) на оболонці клітин рака молочної залози відкрило великі перспективи Відомо, ЩО пухлини з позитивними гормональними рецепторами чутливі до гормонотерапії в 50-65% випадків У той же час, якщо пухлина містила один тип рецептора, чутливість пухлини значно знижувалася Приблизно 20% пухлин резистентні до лікування Поряд з цим у 15% випадків, при відсутності гормональних рецепторів в пухлині спостерігається ефективність гормонотерапії В даний час є загальноприйняте положення, що, якщо більш 10% пухлинних клітин містять рецептори до естрогену чи прогестерону, то пухлину варто вважати гормоночутливою [3] Відомий спосіб визначення показань до гормонотерапії раку молочної залози, розроблений Санкт-Петербурзькою школою мамолопв [5] шляхом виділення патогенетичних груп хворих, які ґрунтувалися на ВІЦІ хворих, менструальному статусі, спадковості та ш Цей напрямок був відображений в методичних рекомендаціях патогенетичного лікування РМЗ [6] і є аналогом визначення показань до гормонотерапії раку молочної залози ю (О 44645 За прототип нами вибраний спосіб визначення 5% вмісту СОг Через 5 діб фільтри дифузійної показань до гормонотерапії РМЗ шляхом визнакамери фіксують спирт-фармолом, забарвлюють чення рецепторів естрогену та прогестерону в пугематоксилином за Карачі, просвітлюють в ксилолі хлині [3, 4] та заключають в канадський бальзам [8] За допомогою дифузійних камер відтворюють тривимірний До недоліків прототипу слід віднести те, що ріст пухлинних клітин у короткострокових культувизначення рецепторів гормонів в пухлині РМЗ не рах Через три доби культивування на поверхні повністю співпадає з ефективним лікуванням гормілшорних фільтрів формуються багатошарові монами [2, 3] Це обумовлено тим, що первинна колонієподібні структури, орієнтовані по спіралі пухлина складається з біологічно різних популяцій навколо центра (сфероїди) Виділяють контрольну клітин, які можуть мати різний вміст рецепторів і культуру та досліджувані, в які добавляють окремо ВІДПОВІДНО мати різну чутливість до гормонотерапії етинілестрадюл (синтетичний естроген) з розраху[7] Суттєвим є те, що у 28% хворих у пременопаузі нку 0,001 мг/кг - в пропорційному перерахунку на і 17% хворих у постменопаузі рецептори до естро2мл культурального середовища з експлантатом генів і прогестерону відсутні [3], що потребує інших тобто 0,00002мг та медроксипрогестерон (синтеПІДХОДІВ до призначення гормонотерапії Наявність тичний прогестин) Останній додають в дозі рецепторів до гормонів не завжди визначає сту10мг/кг, тобто 0,2мг на 2мл культурального серепінь чутливості пухлини до гормональних препарадовища Дози були перераховані в пропорціях з тів Задачею заявленого винаходу є підвищення КЛІНІЧНОГО використання в ОНКОЛОГІЧНІЙ практиці [9] точності визначення показань до гормонотерапії Окремо вирощують контрольну групу клітин для раку молочної залози порівняння дії гормонів, куди не добавляють горТехнічний результат, який отримують в ремональних препаратів Для диференційного визультаті вирішення задачі, полягає у правильному значення особливостей росту експлантатів пухлин, виборі тактики гормонотерапії, що сприяє покраізольованих пухлинних клітин та їх взаємодії з гощанню результатів лікування хворих на рак молормонами використовували 9-бальну систему морчної залози подовженню тривалості життя хворих фологічної оцінки [8], яка давала можливість детата підвищенню безрецидивної виживаності Залельно охарактеризувати ріст пухлинних клітин в жно від того чи буде стимуляція росту клітин пухдифузійних камерах і представити дані в графічлини, пригнічення його чи деструкція клітин індивіному режимі 1 Ріст відсутній 2 Невиразний ріст, дуально будуть призначені рекомендації до міграція пухлинних клітин 3 Створення моношагормонотерапії Спосіб дозволяє визначити хвору початкові етапи 4 Поява моношару низької рих, у яких не буде ефекту від гормонального лікугустини (опосередкований ріст) 5 Створення мовання і навпаки визначити хворих з тим чи іншим ношару середньої густини 6 Початкові етапи ступенем чутливості до гормонів Такий ПІДХІД ДОсфероїд утворення конгломерати клітин 7 СфеЗВОЛИТЬ утриматися від неправильного призначенроїд оутворення (1-2 сфероїди в полі зору) 8 ня гормонотерапії, в тих випадках, де ефекту не Сфероідоутворення (3-5 сфероїдів у полі зору) 9 буде і навпаки, можливе прогресування захворюІнтенсивне сфероідоутворення (10-12 сфероїдів у вання при призначенні стандартних схем гормонополі зору) терапії Поставлену задачу досягають тим, що у відомому способі, який включає дослідження пухлини і виявлення в ній рецепторів естрогену та прогестерону, ВІДПОВІДНО до винаходу, післяопераційні експлантати з пухлини культивують у дифузійних камерах протягом 5 діб, поділяють на контрольний та досліджувані зразки, в останні додають еттнілестрадюл та медроксшрогестерон в розрахунку 0,00002мг та 0,2мг, ВІДПОВІДНО, на 2мл культурального середовища, відтворюють тримірний ріст пухлинних клітин, порівнюють результати і при стимуляції чи пригніченні росту клітин у досліджуваному матеріалі судять про показання до гормонотерапії Спосіб виконують таким чином Під час операції у хворих на рак молочної залози (після секторальної резекції залози з пухлиною) беруть операційний матеріал кусочок пухлини, розміром 2 х 2мм і поміщують його в культуральне середовище RPMI-1640 Матеріал транспортують до лабораторії протягом 1-3 годин, хоч можливе перебування кусочка пухлини в середовищі і холодильній камері до 1 доби Операційний матеріал подрібнюють до шматочків 1мм , їх розміщують на фільтри дифузійної камери, і поміщають в 24 лубочні планшети з культуральним середовищем RPMI-1640 з добавленням глютаміну та 20% ембріональної телячої сироватки терміном на 5 діб при +37°С і Паралельно із другої частини пухлини після виконання основного об'єму операції вивчають гістологічну будову пухлин та вміст в них рецепторів гормонів за допомогою імунопстохімічних методик [10], для співставлення результатів з отриманими результатами в експерименті in vitro Приклади конкретних виконань Хвора Грищенко В М , 48 років, № а\к-1573-01, №іхв-1360 7 02 2001 р оперована з приводу раку лівої молочної залози 1 стадії, Ті No Mo, 2 клінічна група Виконана секторальна резекція молочної залози з експрес патопстолопчним дослідженням пухлини Після ТОГО, ЯК отримали гістологічне підтвердження діагнозу - хворій продовжена операція (через ЗО хвилин), обсяг якої розширений до мастектомм за Пейті Одночасно в стерильних умовах взяли кусочок пухлини розміром 2 х 2мм і помістили його в культуральнесередовище RPMI-1640 Матеріал транспортували до лабораторії, де проводили дослідження росту експлантатів пухлини в культуральному середовищі з додаванням туди стероїдних гормонів (етинілестрадюл та медроксипрогестерон) У пухлині імуноПСТОХІМІЧНО виявили рецептори до естрогенуER++, та nporecrepoHy-PR+++ Реакція експлантатів пухлини була наступною контроль - 1 бал росту, в середовищі з етунілестрадюлом - т е ж 1 бал, та з медроксипрогестероном 2 бали Як видно з 44645 1995 рр //національний канцер реєстр України експерименту - ріст пухлини стимулює прогестеК 1996 - 1 0 3 с рон, тоді як дія естрогену не відрізняється від кон2 Beatson G Т On the treatment of inoperable тролю cases of carcinoma of the mamm Suggestions for a Хвора Малиновська В В № а\к 4160/00, 49 роnew method of treatment with illustrative cases ків, №1 хв 2782 12 03 2001 р оперована з при/TLancet 2 104,162,-1986 воду раку правої молочної залози 1 стадія T1NOMO2 клінічної групи Виконано мастектомією 3 Me Guire et al Evaluation of estrogen receptor за Пейті В пухлині імунопстохімічно не виявили assays in human breast cancer tissue Cancer Res , рецептори до естрогену-ER-, та прогестерону-PR1977, 37, 637-639) Реакція експлантатів пухлини була наступною 4 Jensen E V , DeSombre E R , Jungblut PN контроль - 1 бал росту, в середовищі з етинілестEstrogen receptors in hormone responsive tissues радюлом та з медроксипрогестероном - теж 1 and tumors Endogenous Factors Influencing Hostбал Як видно з експерименту при відсутності горTumor Balance Chicago, University of Chicago мональних рецепторів на поверхні клітин пухлини Press, 1967, p 5 РМЗ не буде реакції на дію стероїдних гормонів 5 Семиглазов В Ф , Винин А Г , МоисеенПроведено дослідження у ЗО пацієнток віком ко В М Минимальный рак молочной железы 28-72 років, при поширеності процесу T1-2.NOСанкт-Петербург "Гиппократ", 1992 - 2 4 0 с 1,МО Передопераційне опромінення та хіміотера6 Тарутшов В І , Досенко І В , Шпильова С І пія не проводились для того, щоб не пригнітити Принципи формування індивідуальних планів етаріст клітин пухлини в культуральному середовищі пного лікування хворих на рак молочної залози з урахуванням основних патогенетичних форм заРезультати Склад рецепторів у клітинах пуххворювання - Київ,1999 - 24 с лин РМЗ відповідав літературним даним 80% пухлин містили горманальні рецептори але КІЛЬКІСТЬ І 7 Tubiana M The scientific basses of cancer склад їх були різними Відмічено, що при відсутноmanagement at the interface between fundamental сті гормональних рецепторів на клітинах пухлини, research and clinical practice J Cancer Res Clm ВІДПОВІДНО був відсутній будь-який ефект на дію Oncol , 1991,117, 275 гормонів У 20% експантатів пухлин, що теж відпо8 Якимович Л В , Бережная Л М , Семеновавідає літературним даним, відмічено відсутність Кобхарь Р А , Коноваленко В Ф , Толстопятое Б А ефекту від дії гормонів при наявності гормональИспользование метода Диффузионных камер для них рецепторів у клітинах пухлини Серед решти выявления больных со злокачественными образопухлин з позитивними гормональними рецептораваниями, подлежащих иммунотерапии рекомбими у 10% експлантатів пухлини реакція пригніченнаннтным интерлейкином-2 //Информационное ня росту клітин пухлини порівняно з контролем під письмо - К и е в - 1 9 8 8 - Ю с дією мікрофоліну та прогестерону, це може бути 9 Компендиум 1999/2000 - лекарственные показанням до застосування їх в терапії даної хвопрепараты /Под ред В Н Коваленко, рої У 20% відмічена стимуляція росту клітин під А П Викторова - К Морион, 1999 - 1 2 0 0 с дією провери і в 30% експлантатів пухлин відміче10 Ермилова В Д , Литвинова Л В , Бассана стимуляція росту клітин під дією мікрофоліну і л ы к А С , Кузьмина З В Сравнительное имуногиспровери тохимическое и биохимическое изучение рецепторов эстрогенов в раке молочных желез// Архив Література патологии - 1989-Т 5, Вып 2 - С 60-63 1 Федоренко З П , Бондар С В , Войкшнарас Є Б , ЗЛОЯКІСНІ новоутворення в Україні в 1993 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90