Спосіб одержання ліпосомального тербінафіну

Спосіб одержання ліпосомального тербінафіну на основі ліпідів, який відрізняється тим, що суміш тербінафіну і негативно заряджених поляр 3 Технічний ефект способу одержання ліпосомального тербінафіна, отриманого на основі природних ліпідів (суміші негативно заряджених полярних ліпідів) полягає в одержанні 70-95% включення тербінафіну в ліпосоми і зменшенні мінімальної концентрації ліпосомального тербінафіну в 2-4 рази в порівнянні з інтактним тербінафіном, що дозволяє також зменшити токсичність, реакції гіперчутливості на тербінафін у виді зменшення його терапевтичної дози. Спосіб здійснюють наступним чином: Субстанцію тербінафіну гідрохлориду розчиняють в органічних розчинниках. Змішують з ліпідами в співвідношенні 1:10 - 1:20. Отриману суміш випарюють на вакуумному ротаційному випарнику з наступним суспендуванням у забуференому фізіологічному розчині з рН 7,4 для одержання ліпосомальної дисперсії з концентрацією ліпідів 1-2%. Озвучують на диспергаторі або продавлюють на екструдері при охолодженні до 2-4°С до досягнення розміру ліпосом 200нм. Очищення тербінафіну, який був включений у мембрану ліпосом, від того, що не був включений, здійснюють хроматографією на колонці із сефарозою 4В. Вихід ліпосом визначають спектрофотометрично при довжині хвилі 450нм. Відсоток включення тербінафіну в ліпосоми визначають при довжині хвилі 284нм. Відсоток включення тербінафіну в ліпосоми склав 70-95%. Визначення мінімальної концентрації антимікотика здійснюють методом дифузії в агар (варіант циліндрів). Він базується на утворенні зон затримки росту мікроорганізму навколо лунок, у які внесені різні дози антимікотика. Діаметр цих зон у визначених діапазонах концентрацій препарату пропорційний його концентрації. На підставі чого будують калібровану криву залежності діаметра зони затримки росту гриба від концентрації антимікотика. Відповідно до двошарового методу чашки Петрі заливають щільним середовищем Сабуро. Облік результатів проводять після закінчення терміну інкубації за діаметрами зон затримки росту, заміряючи з точністю до 1мм на моноскопі при довжині хвиль 450нм. Мінімальна концентрація ліпосомального тербінафіну в 2-4 рази менше мінімальної концентрації водного розчину тербінафіну. Ефективність способу ілюструють наступні приклади: Приклад 1. 5мг субстанції тербінафіну гідрохлориду розчиняють в 1мл спирту. Змішують з 50мг суміші негативно заряджених полярних ліпідів, в співвідношенні 1:10. Випарюють отриману суміш на вакуумному ротаційному випарнику (Vakuum- Rotation, Німеччина). Суспендують у 5мл забуференого фізіологічного розчину з рН 7,4 для одержання ліпосомальної дисперсії з концентрацією ліпідів 1%. Озвучують на диспергаторі УЗДН-А (Росія) при охолодженні до 2-4°С до досягнення розміру ліпосом 200нм. Очищення тербінафіну, який був включений, від того, що не був включений, здійснюють хроматографією на колонці із сефарозою 4 В. Вихід ліпосом визначають спектрофотометрично при довжині хвилі 450нм. Екстрагують тербінафін із фракцій, що містять ліпосомальний тербінафін сумішшю хлороформспирт (3:2) і визначають % включення тербінафіну 45213 4 в ліпосоми при довжині хвилі 284нм. Відсоток включення тербінафіну в ліпосоми склав 70%. Визначення мінімальної концентрації антимікотика очищених хроматографічних ліпосомальних фракцій здійснюють методом дифузії в агар (варіант циліндрів), контролем є водний розчин тербинафину. Облік результатів проводять після закінчення терміну інкубації за діаметрами зон затримки росту, заміряють з точністю до 1мм на моноскопі при довжині хвилі 450нм. Мінімальна концентрація ліпосомального тербінафіну склала 4мг/мл, в 2 рази менше мінімальної концентрації водного розчину тербінафіну. Приклад 2. 5мг субстанції тербінафіну гідрохлориду розчиняють в 1мл спирту. Змішують з 100мг суміші негативно заряджених полярних ліпідів, в співвідношенні 1:20. Випарюють отриману суміш на вакуумному ротаційному випарнику (Vakuum- Rotation, Німеччина). Суспендують у 10мл забуференого фізіологічного розчину з рН 7,4 для одержання ліпосомальної дисперсії з концентрацією ліпідів 1%. Озвучують на диспергаторі УЗДН-А (Росія) при охолодженні до 2-4°С до досягнення розміру ліпосом 200нм. Очищення тербінафіну, який був включений, від того, що не був включений, здійснюють хроматографією на колонці із сефарозою 4В. Вихід ліпосом визначають спектрофотометрично при довжині хвилі 450нм. Екстрагують тербінафін із фракцій, що містять ліпосомальний тербінафін сумішшю хлороформспирт (3:2) і визначають % включення тербинафину в ліпосоми при довжині хвилі 284нм. Відсоток включення тербінафіну в ліпосоми склав 80%. Визначення мінімальної концентрації антимікотика очищених хроматографічних ліпосомальних фракцій здійснюють методом дифузії в агар (варіант циліндрів), контролем є водний розчин тербинафину. Облік результатів проводять після закінчення терміну інкубації за діаметрами зон затримки росту, заміряють з точністю до 1мм на моноскопі при довжині хвилі 450нм. Мінімальна концентрація ліпосомального тербінафіну склала 2,6мг/мл, в 4 рази менше мінімальної концентрації водного розчину тербінафіну. Приклад 3. 5мг субстанції тербінафіну гідрохлориду розчиняють в 1мл спирту. Змішують з 100мг суміші негативно заряджених полярних ліпідів, в співвідношенні 1:20. Випарюють отриману суміш на вакуумному ротаційному випарнику (Vakuum- Rotation, Німеччина). Суспендують у 5мл забуференого фізіологічного розчину з рН 7,4 для одержання ліпосомальної дисперсії з концентрацією ліпідів 2%. Озвучують на диспергаторі УЗДН-А (Росія) при охолодженні до 2-4°С до досягнення розміру ліпосом 200нм. Очищення тербінафіну, який був включений, від того, що не був включений, здійснюють хроматографією на колонці із сефарозою 4 В. Вихід ліпосом визначають спектрофотометрично при довжині хвилі 450нм. Екстрагують тербінафін із фракцій, що містять ліпосомальний тербінафін сумішшю хлороформспирт (3:2) і визначають % включення тербинафину в ліпосоми при довжині хвилі 284нм. Відсоток включення тербінафіну в ліпосоми склав 95%. Визначення мінімальної концентрації антимікотика 5 45213 очищених хроматографічних ліпосомальних фракцій здійснюють методом дифузії в агар (варіант циліндрів), контролем є водний розчин тербинафину. Облік результатів проводять після закінчення терміну інкубації за діаметрами зон затримки Комп’ютерна верстка Л. Купенко 6 росту, заміряють з точністю до 1мм на моноскопі при довжині хвилі 450нм. Мінімальна концентрація ліпосомального тербінафіну склала 2мг/мл, в 3 рази менше мінімальної концентрації водного розчину тербінафіну. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601