Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб експрес-діагностики сказу шляхом послідовного одержання флуоресціюючих кеньюгатів, який відрізняється тим, що останні отримують з антирабічного імуноглобуліну із плазми крові донорів, імунізованих інактивованою концентрованою культуральною антирабічною вакциною, з'єднують з люмінуючим барвником, наносять на досліджуваний матеріал і за наявності специфічної люмінесценції виявляють антиген вірусу сказу.

Текст

Спосіб експрес-діагностики сказу шляхом послідовного одержання флуоресціюючих кеньюгатів, який відрізняється тим, що останні отримують з антирабічного імуноглобуліну із плазми крові донорів, імунізованих шактивованою концентрованою культуральною антирабічною вакциною, з'єднують з люмінуючим барвником, наносять на досліджуваний матеріал і за наявності специфічної люмінесценції виявляють антиген вірусу сказу Винахід відноситься до галузі медицини і призначається для експрес-діагностики сказу Відомо, що Україна належить до територій небезпечних за сказом ДІЮЧІ СТІЙКІ природні вогнища цієї інфекції активно функціонують не тільки на всій її території, але й за її межами [1, 2] Для діагностики сказу використовують біологічну пробу на мишах, метод мікроскопи мазків та ГІСТОЛОГІЧНИХ зрізів, реакцію зв'язування комплементу, прижиттєві методи, сучасні імуноензиматичні дослідження, імунопреципітацію в агаровому гелі [3 - 10] Усі ЦІ методи характеризуються подовженим терміном виконання, високою вартістю робіт, необхідністю складного устаткування та коштовних реактивів Найбільш точним, швидким та порівняно дешевим у виконанні з існуючих методів діагностики сказу s метод імунофлуоресценцм, завдяки якому в абсолютної більшості випадків можна встановити діагноз на протязі від декількох хвилин до декількох годин Комітет експертів ВООЗ /1994/ вважав швидким та чутливим методом діагностики сказу у тварин та людини метод флуоресціюючих антитіл і рекомендує за його допомогою проводити лабораторну діагностику [11] Дані Світового огляду по сказу /1996/ свідчать, що 28 з 32-х країн, які брали участь у II Міжнародному симпозіумі, використовують тест флуоресціюючих антитіл з діагностичною метою при сказі у людини та 69 з 75-и лабораторій, які працюють в цих країнах, використовують цей тест для діагностики сказу у тварин [12] Прототипом технічного рішення, що пропонується, є спосіб одержання флуоресціюючих конью гатів шляхом імунізації кролів очищеним антигеном вірусу сказу [13] Кон'югати вдержували після чотириразової імунізації кролів очищеним інактивованим вірусом сказу /CVS - 27/ з інтервалами в 1 тиждень та послідуючої дворазової імунізації живим вірусом сказу з тим же проміжком Глобулінову фракцію крові імунізованих кролів мітили ізоціанатом флуоресцеїну Титр віруснейтралізуючих антитіл складав > 1 5000 Оптимальними розведеннями кон'югатів для використання у реакції імунофлуоресценцм були 1 510-1 570 Наведене технічне рішення мав ряд недоліків імунізація кролів вірусами сказу [3 вкрай небезпечшю і петребуе особливих умов щодо техніки безпеки роботи, кон'югат флуоресцеїну є ксеногенним в умовах діагностики гідрофобії великі розведення кон'югату безумовне знижують чутливість діагностики В основу винаходу поставлено задачу створити швидкий метод діагностики сказу в Україні та водночас удосконалити технічне рішення, що пропонується прототипом, шляхом заміни у способі роботи з живими вірусами на вакцинні препарати та заміни кролячого імуноглобуліну на донорський Поставлена задача досягається послідовним одержанням флуоресціюючих кон'югатів, які отримують з антирабічного імуноглобуліну плазми крові донорів, Імунізованих шактивованою концентрованою культуральною антирабічною вакциною, з'єднують з люмінуючим барвником, наносять на досліджуваний матеріал і за наявності специфічної люмінесценції виявляють антиген вірусу сказу ю (О 46195 Алогенний антирабічний імуноглобулін одерНВО "Імунопрепарат" /м Уфа/ Марковані скельця жують з донорської антирабічної плазми, імунізувисушували на повітрі за кімнатної температури, ючи чотириразове донорів концентрованою кульпотім фіксували та промивали фізіологічним розтуральною антирабічною вакциною /схема - 0, 7, чином хлориду натрію На мазки наносили різні 15, ЗО доба/ Плазму фракціонують за методом розведення антирабічного люмінуючого імуноглоКона згідно з діючим регламентом виробництва 10 буліну серії 10799/суцільний, 1 5, 1 10/ Скельця -16% розчину імуноглобуліну з донорської плазми витримували у вологій камері за кімнатної температури впродовж 20хв, потім послідовно відмиА саме виділяють осад білків фракцій II + III, вали від надлишку Імуноглобуліну у забуференому який містить гама-глобулінову фракцію Проводять фізіологічному розчині натрію хлориду та дистийого переосадження, відокремлюючи фракцію II, з льованій воді, після чого висушували на повітрі якої потім висалюють гама-глобулін Отриманий Дослідження препарату проводили за допомогою 10% розчин білку піддають діафільтрацм та стерилюмінесцентного мікроскопу в імерсійній системі лізуючій фільтрації, розливають в ампули та люУ разі яскраво-зеленої дифузної люмінесценції в філізують [14] Алогенний антирабічний імуноглотяжах білка судили про наявність антигенів вірусу булін з'єднують з люмінуючим барвником і викорисказу Результати особистих досліджень подано в стовують для діагностики сказу таблиці 1 Ознаками, що відрізняють винахід, є 1 Використання комерційного /стандартного/ За даними табл 1 найбільшими антигенними антигену для імунізації донорів - концентрованої властивостями характеризувалася КОКАВ с 117, культуральної антирабічної вакцини яка при взаємодії зі специфічним люмінуючим імуноглобуліном /як суцільним, так і в розведенні 1 2 Відпрацьована схема імунізації донорів, яка 5/ давала більш виразну люмінесценцію /+ + + +/ забезпечує вироблення віруснейтралізуючих антиВакцини КОКАВ с 111 та КАВ с 10 були помірними тіл у високих титрах для одержання високоспециза антигенними властивостями, що проявлялося фічної антирабічної плазми слабким СВІТІННЯМ /+ +/ та /+/, як у разі викорис3 Використання існуючого виробництва претання суцільного імуноглобуліну, так і в різних розпаратів імуноглобулінів на станціях переливання веденнях Тому для подальшої роботи в якості крові для одержання високоспецифічного алогенматеріалу, що містить антиген, було відібрано КОного антирабічного імуноглобуліну з антирабічної КАВ с 117 донорської плазми 4 При потребі алогенний антирабічний імуноПриклад 2 Досліджували люмінесценцію антиглобулін поряд з лікувальною метою можливо вигенів вірусу сказу за допомогою люмінуючого імукористовувати для експрес-діагностики гідрофобії ноглобуліну с 20799 /габл 2/ та сказу, з'єднавши з люмінуючим барвником Вакцину наносили, фіксували та забарвлювали люмінуючим імуноглобуліном аналогічно 5 При використанні запропонованого люмінуприкладу 1 Спостерігали люмінесценцію за допоючого препарату діагностика гідрофобії здійснюмогою суцільного діагностичного імуноглобуліну /+ ється в алогенній системі, що підвищує її специфі+ + +/та у розведенні 1 5 /+ + + +/ чність та чутливість Суть винаходу характеризується конкретними Приклад, 3 Досліджували люмінесценцію анприкладами Приклад 1 Донорів імунізують інактигенів вірусу сказу за допомогою люмінуючого тивованою концентрованою культуральною антиантирабічного імуноглобуліну с 30799 /габл 2/ рабічною вакциною /КОКАВ/ 3 плазми крові отриВакцину наносили, фіксували та забарвлювали мують алогенний антирабічний імуноглобулін із аналогічно прикладу 1 Спостерігали люмінесценспецифічними антитілами не менше, ніж 1 50000 тне СВІТІННЯ антигенів при нанесенні на КОКАВ /400МО/ суцільного діагностичного імуноглобуліну /+ + +/ та у розведеннИ 5 - 1 10/+ + +/ 2 % розчин антирабічного імуноглобуліну у карбонатно-бікарбонатному буфері з'єднують з ізоТаким чином, розроблено та досліджено три ціанатом флуоресцеїну за допомогою магнітної серії люмінуючого антирабічного імуноглобуліну, мішалки на протязі 18 - 20год за температури 4°С який може бути використано для експрес-діагносіз розрахунку 0,03 - 0,05мг на 1мг білка Кінцеву тики сказу та гідрофобії в реакції імунофлуоресцеконцентрацію в кон'югаті "білок-барвник" визначанцм ють за допомогою спектрофотометру Кон'югат "білок-барвник" розділяють на колонці з сефа-дексом G-200 або G-50 за допомогою Таблиця 1 0,01 М фосфатно-буферного фізіологічного розВивчення антигенних властивостей різних серій чину натрію хлориду на дві фракції Фракція І ораконцентрованої та культуральної антирабічних нжево-зеленого кольору являє собою люмінуючии вакцин у реакції антиген-антитіло за допомогою антирабічний імуноглобулін Фракція II - залишки люмінуючого антирабічного імуноглобуліну барвника, що не зв'язався з білком Облік специфічного СВІТІННЯ вакРозведення Люмінуючии імуноглобулін розливають по цинних препаратів, серії імуноглобуліну 1,0мл в ампули або скляні флакони, люфілізують 111/К375/ 117/К1416/ 10/К878/ або зберігають у замороженому стані суцільний ++ + +++ ++ Активність 3-Х серій люмінуючого антирабіч1 5 + + +++ + ного імуноглобуліну досліджували в експерименті 1 10 + + + На предметному склі готували мазки з КОКАВ серій 117/К1416/, 111/К375/ та культуральної антирабічної вакцини /КАВ/ серп 10/К878/ виробництва 46195 туальные вопросы вирусных инфекций" АлмаАта, 1973 - С 158-159 Таблиця 2 7 Шашенько А С , Ковалев Н К Лабораторный Вивчення специфічного СВІТІННЯ люмінуючого анметод прижизненной диагностики бешенства//Матер Республ научно-практ конфер по тирабічного імуноглобуліну серій 20799 та 30799 зоонозным инфекциям Минск, 1974 - С 64 - 65 8 Ботвинкин А Д , Чернов С М , Матвеев Л Э Препарат імуноглобуліну Інтенсивність специПрименение иммуноферментных методов в диагфічного СВІТІННЯ серія розведення ностике бешенства//Природно-очаговые болезни ++++ суцільний человека Сб статей, Омск, 1986 - С 12 - 22 20799 ++++ 1 5 9 Ботвинкин А Д , Чернов С М , Грибанова Л Я + 1 10 Обнаружение вируса бешенства в головном мозге +++ суцільний и слюнных железах животных с помощью имму30799 +++ 1 5 ноферментного метода//Вопр вирусологии 1987 +++ 1 10 №6 -С 747-750 Література 1 Бережнов С П , Падченко А Г Аналітичний огляд інфекційної захворюваності в Україні за II МІСЯЦІВ 1998 року//Сучасні інфекції - 1999 - №1 С5-15 2 Шестопалов А М , Аксенов В И , Рассадкин Ю Н , Устинова Е Н Обстановка по рабической инфекции в Новосибирской области//Журн микробиол , эпидемиол и иммунобиологии -1999 - №6 - С 83 - 84 3 Kaplan M , Koprowsdm H , Методы лабораторных исследований по бешенству/ВОЗ, Женева, 1975 -С 73-80 4 Коломакин Г А , Баринова Т Д , Смирнова М М , Тимонина М С Комплексная диагностика бешенства//Вопр вирусологии 1968 - №4 - С 470 474 5 Анина-Радченко Н Д К вопросу о применении реакции связывания комплемента для диагностики бешенства//Симпозиум по бешенству М , 1972 -С 123-124 6 Коломакин Г А , Тимонина М С Материалы к прижизненной диагностики бешенства//В сб "Ак 10 Лейбензон А С , Малахова Т С Применение иммуно-преципитации в агаровом геле для ускоренной диагностики бешенства в лабораторных условиях//Вирусы и вирусные заболевания Сб статей, К "Здоров'я", 1977 - Вып 5 - С 106 -107 11 Комитет экспертов ВОЗ по бешенству/Серия технических докладов, Женева, 1994 -117с 12 World Survey of Rabies №30 for the year 1994/World Healtn Organization Devision of Emerging anil ofn Communicable Deseases Surveillance and Control -1996 - p 13 Тримарчи С , Деббис Дж Получение флуоресцирующих коньюгатов путем иммунизации кроликов очищеным антигеном вируса бешенства/Бюлл ВОЗ, 1975 - Т 51 - №5 - С 431 - 432 14 А с №1745257 СССР, МКИА6ІК39/205, G01 N33/531 Способ получения антирабического иммуноглобулина/Е А Федоровская, А П Рыбальская, М А Селимов, В Ф Соболев, А А Шинкаренко, В П Логвинова - Опубл 07 07 92, Бюл №25 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71

Дивитися

Додаткова інформація

Автори англійською

Rybalska Alla Petrivna, Melnyk Olena Anatoliivna, Melnyk Liudmyla Mykolaivna, Fedorovska Olena Oleksiivna, Stepanchuk Valentyn Andriovych

Автори російською

Рыбальская Алла Петровна, Мельник Елена Анатольевна, Мельник Людмила Николаевна, Федоровская Елена Алексеевна, Степанчук Валентин Андреевич

МПК / Мітки

МПК: A61K 39/205, G01N 33/533, G01N 33/563, A61K 39/395, C07K 16/08, A61P 31/12

Мітки: сказу, експрес-діагностики, спосіб

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/3-46195-sposib-ekspres-diagnostiki-skazu.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб експрес-діагностики сказу</a>

Подібні патенти