Спосіб прискореного визначення чутливості ранової мікрофлори до антибактеріальних препаратів

Спосіб прискореного визначення чутливості ранової мікрофлори до сучасних антибактеріальних препаратів шляхом застосування індикатора, який відрізняється тим, що як індикатором величини зон затримки росту поверхню інфікованого травного середовища з дисками обробляють реактивом нейтральним червоним, по 4-5 мл на кожну чашку Петрі. (19) (21) u200910848 (22) 27.10.2009 (24) 12.04.2010 (46) 12.04.2010, Бюл.№ 7, 2010 р. (72) ДАЦЕНКО БОРИС МАКАРОВИЧ, БІРЮКОВА СВІТЛАН А ВАСИЛІВНА, БОЛЬШАКОВА ГАЛИНА МИ ХАЙЛІВНА, ГВОЗДИК ЮРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, ХМИЗОВ РУСЛАН АНДРІЙОВИЧ (73) ХАРКІВСЬКА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ 3 48941 ють у термостат на 4-4,5 години при температурі 37°С, після чого обробляють поверхню агару індикатором ТТХ та знову поміщають у термостат на 20-30хв. (друга інкубація).Урахування результатів: ділянки травного агару, на яких є ріст бактерій, набувають буровато-червоного забарвлення, а зони пригнічення росту навколо дисків з антибіотиками залишаються безбарвними - їх замірюють в міліметрах. Недоліками описаного способу є короткий (до 12 годин) термін придатності свіжевиготовленого розчину ТТХ (в умовах холодильника) та, головне, відсутність в теперішній час цього порівняно дорогого індикатора в бактеріологічних лабораторіях через припинення його закупівель. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу прискореного визначення чутливості ранової мікрофлори до антибактеріальних препаратів, в якому за рахунок зміни індикатора досягається суттєве (до 4-5 годин) скорочення термінів визначення чутливості ранової мікрофлори до сучасних антибактеріальних препаратів, який не поступається за ефективністю протеїну, але виключає його недоліки. Відмінна ознака запропонованого рішення полягає в заміні індикатора ТТХ, який використовується в прототипі, на більш доступний та дешевий - нейтральний червоний. Спосіб, що заявляється, дозволяє безпосередньо досліджувати клінічний матеріал - рановий біоптат або гнійне відділення ран та в короткі терміни визначити у порівняльному аспекті вираз ність пригнічувальної дії антибактеріальних препаратів, які використовуються в клініці, на життєздатність ранової мікрофлори як в монокультурі, так і в асоціаціях. Спосіб, що заявляється, здійснюють таким чином. 4 Вміст гнійної рани або суспензію біоптата краю (дна) рани в ізотонічному розчині (1:10) вносять до пробірки зі середовищем Мілера-Хілтона з 10% розчином глюкози, ретельно перемішують та вливають у стерильні чашки Петрі, встановлені на горизонтальній поверхні. На застиглу поверхню середовища накладають диски з антибіотиками, а чашки встановлюють у термостат на 4-4,5 години при температурі 37°С. У кінці терміну інкубації чашки виймають, поверхню середовища обробляють індикатором нейтральним червоним (4-5мл на кожну чашку Петрі) та знову встановлюють у термостат на 20-30 хвилин (друга інкубація). Індикатор: 100мл 0,001% водно-спиртового розчину, який складається із 0,1 граму нейтрального червоного, 40мл спирту та дистильованої води. Урахування результатів: ділянки середовища Мілера-Хілтона, на яких є ріст бактерій, набувають яскраво-червоного забарвлення, а зони пригнічення росту навколо дисків з антибіотиками залишаються безбарвними. Термін отримання кінцевого результату становить 4-5 годин. Для підтвердження правомочності способу прискореного визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів, який пропонуємо, було проведено серію бактеріологічних досліджень з використанням, як індикатора ТТХ (прототип), так і нейтрального червоного (спосіб, що пропонується). Дослідження показали, що розроблений спосіб за своєю ефективністю ідентичний прототипу: зони затримки росту навколо дисків з тим чи іншим антибактеріальним препаратом, які виявляються з використанням ТТХ, є рівновеликими зонам затримки росту, які встановлюються за допомогою пропонованого індикатора (нейтральний червоний). Таблиця Порівняльні результати прискореного визначення чутливості мікроорганізмів (клінічні штами) до антибактеріальних препаратів Антибактеріальні препарати Гатіфлоксацин Цефотаксим Кларитроміцин Діоксидин Иодопирон Індикатор ТТХ Нейтральний червоний ТТХ Нейтральний червоний ТТХ Нейтральний червоний ТТХ Нейтральний червоний ТТХ Нейтральний червоний Зони затримки росту (мм) навколо дисків з бактеріальним препаратом S.aureus S.faeccalis K.pneumon Е.соlі P.aerugino sa (n=6) (n=10) іае (n=9) (n=6) (n=7) 30,05±0,11 22,07±0,13 20,37±0,10 33,09±0,1 22,05±0,13 31,35±0,11 22,08±0,17 21,17±0,12 32,19±0,12 23,05±0,13 27,13±0,09 26,43±0,11 28,46±0,12 31,78±0,12 19,55±0,09 26,13±0,49 27.23±0,16 28,27±0,11 30,78±0,13 19,42±0,07 9,11±0,08 22,82±0,11 0 0 0 28,11±0,18 23,12±0,13 0 0 0 10,19±0,05 8,37±0,07 23,03±0,06 19,95±0,11 9,03±1,13 11,01±0,05 8,12±0,01 23,13±0,16 20,05±0,10 7,08±0,19 12,08±0,09 11,03±0,08 20,72±0,12 20,09±0,11 19.05±0,21 12,69±0.09 10,83±0,07 21,12±0,02 20,26±0,13 18,09±0,11 Примітки: вірогідність показників р 0,05 5 48941 Як приклад приводимо результати прискореного визначення чутливості основних збудників гнійної хірургічної інфекції до сучасних антибіотиків - гатіфлюксацину (група фтор хінолонів), цефотаксиму (група цефалоспоринів), кларитроміцину (група макролидів), а також антисептикам - діоксидину та йодопирону. Дані таблиці свідчать, що порівняльно більшу активність проти стафілококів мають фторхінолони, в той час як антисептики (діоксидин та йодопирон) не забезпечують дії, яка достатньо пригнічує їх ріст. Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко 6 Кларитроміцин позбавлений активності у відношенні кишкових та синє-гнійних паличок, помітну дію на які мають фторхінолони та антисептики. Таким чином, розроблений спосіб прискореного визначення чутливості ранової мікрофлори до сучасних антибактеріальних препаратів, де як індикатор використовується реактив нейтральний червоний, забезпечує отримання відповіді в короткий (через 5-6 годин) термін, ідентичний за ефективністю прототипу, але відрізняється від нього доступністю та більш низькою вартістю. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601