Спосіб створення впф-статусу у безмікробних поросят корисною мікрофлорою

Спосіб створення ВПФ-статусу у безмікробних поросят корисною мікрофлорою, що включає пос 3 стей). Штами запропоновані лише для лабораторних тварин - при створенні ВПФ-статусу у морських свинок, щурів, мишей [1]. Мікробна асоціація Хаакса представлена анаеробними та аеробними мікроорганізмами: ентерококами, стафілококами, кишковою паличкою та ін. Асоціація Хаакса випробовувалась на лабораторних тваринах і застосовується виключно для них. Вона містить лише один штам Е.соlі, який збіднює спектр антигенів, необхідний для імунізації безмікробних тварин. Велику увагу надано представникам аеробної мікрофлори, які широко представлені у рослинних кормах і мають меншу питому вагу в мікробному вмісту кишечника. У цій асоціації також є представники роду Clostridium, багато з яких мають патогенне та умовно-патогенне значення. У той же час вона збіднена окремими представниками, які життєво необхідні здоровому макроорганізму анаеробної мікрофлори - у ній відсутні бактероїди. Недоліком є і те, що відсутні дані щодо дозування, а також необґрунтована послідовність введення окремих компонентів асоціації в організм безмікробних тварин. В основу корисної моделі поставлено завдання розробити Спосіб створення ВПФ-статусу у безмікробних поросят корисною мікрофлорою шляхом ефективної адаптації (за короткий термін) організму безмікробних поросят до мікробного фону санованого приміщення свинарського господарства. З цією метою застосовується набір корисної мікрофлори (підібраний у результаті вивчення антагоністичних властивостей). Безмікробним поросятам, які отримані у результаті операції гістеротомії і знаходяться у гнотобіологічному ізоляторі у перші доби життя разом з молочною дієтою згодовують наступні мікроорганізми у певній послідовності за такою схемою: - на 2-3 день - Е.соlі, штам №127 та М-17 у дозах від 1000-10000 до 1-5млн. мікробних клітин; - на 7 день - Staphilococcus epidermides, штам №1 і Streptococcus faestum, штам №52 у дозах від 1000-10000 до 1-5 млн. мікробних клітин; - на 11-12 день - Bifidobakterium bifidum, штам №1 в дозах від 100млн. до 1млрд. мікробних клітин; - на 13-14 день - Lactobacillus acidopfilus, штам №336 і Bacteroides, штам №1506 у дозах від 100млн. до 1 млрд. мікробних клітин. Таким чином, мікробна асоціація складається з компоненту А і компоненту Б. Компонент А складається з двох ампул, у яких містяться ліофільно висушені мікробні культури. Перша ампула містить два штами кишкової палички (разом у одній ампулі): непатогенні штами Е.соlі №127 та М-17, які входять до складу лікарського препарату «Колібактерин». Кількість мікробних клітин -100млн. у одній ампулі. Друга ампула містить разом два штами кокової мікрофлори: непатогенні штами Staphilococcus epidermides №1 та Streptococcus faestum №52, які виділені зі шкіри здорових свиней та вмісту кишечника. Кількість мікробних клітин - 100млн. у одній ампулі. 49134 4 Компонент Б складається із трьох ампул, у яких містяться ліофільно висушені мікробні культури. Перша ампула містить Bifidobakterium bifidum, штам №1, що входить до складу лікувальнопрофілактичного препарату «Біфідумбактерин», який застосовується у дозі від 100млн. до 1млрд. мікробних клітин. Друга ампула містить Lactobacillus acidopfilus, штам №336, який містить від 100млн. до 1млрд. мікробних клітин. Третя ампула знаходиться представник роду Bacteroides, штаму №1506, який містить від 100млн. до 1 млрд. мікробних клітин. При випоюванні поросятам молочної суміші вміст ампули розводиться на 5мл стерильної води і додається до молока за вищенаведеною схемою. Зберігати ампули з культурами потрібно у темному місці при температурі 2-6°С. Введення компоненту А потрібно поєднувати з вітамінами групи В (особливо В1), С та iншими, які застосовуються у складі стандартних дієт для безмікробних поросят. У порівнянні з сукупністю мікробних штамів, запропонованих Хааксом та ін. для лабораторних тварин, дана асоціація застосовується для свиней. З неї виключені представники роду Clostridium і аеробні бацили. Асоціація містить велику кількість штамів кишкової палички, що антигенно відрізняються одна від одної і необхідний здоровому організму представник нормальної мікрофлори свиней з роду Bacteroides. Запропонована біологічно обгрунтована послідовність заселення травного тракту поросят та оптимальне дозування мікроорганізмів, що важливо для одержання імунізаційного ефекту й виключення небажаної інтерференції всередині самої асоціації. Успішна адаптація організму безмікробних поросят обумовлюється трьома основними чинниками: - захватом екологічних ніш, що безпосередньо межують з епітелієм слизової кишки, корисними симбіотичними представниками мікробної асоції (Bacteroides, Bifidobakterium bifidum); - імунізуючою дією представників мікробної асоціації, які антигенно можуть бути близькими патогенним і умовно-патогенним мікробам (Е.соlі, Staphilococcus, Streptococcus), - антагонізмом лактобактерій і біфідобактерій у відношенні до умовно-патогенних та патогенних мікробів. Послідовність введення окремих компонентів мікробної асоціації обґрунтовується нижченаведеним. Застосування компоненту А у першу чергу і одразу ж після народження необхідно для того, щоб протягом 10 діб життя підвищити захисні сили слизової оболонки кишківника (місцева імунізація), а також і загальні захисні реакції, які мають місце при проникненні мікроорганізмів асоціації із кишківника у кров. Наступне введення через 12-14 днів компонентів Б не перешкоджає (за результатами досліджень) їх проникненню у кишківник і озброює організм симбіотичною для нього та антагоністично 5 49134 активною у відношенні до патогенних корисною мікрофлорою. Такі ВПФ-поросята добре пристосовуються до життя у нормальних умовах. Запропонована мікробна асоціація з успіхом застосовується Полтавською дослідною станцією IBM УААН. У результаті використання даної асоціації були отримані здорові ВПФ-поросята (більше 100 голів), що росли і розвивалися краще, ніж повністю безмікробні тварини, які відчували недостатність у вітамінах, що синтезуються у кишківнику корисною мікрофлорою. Після згодовування мікробної асоціації проводили спеціальні бактеріологічні та вірусологічні дослідження змивів зі слизової оболонки носової порожнини, гортані, мигдалин, коньюктиви, шкіри поросят, а також фекалій на наявність Clostridium perfringens, пастерел, сальмонел, лістерій, диплококів, мікробів роду Proteus, патогенних штамів ешіріхій (проводили висіви на селективні та елек Комп’ютерна верстка О. Рябко 6 тивні бактеріальні поживні середовища для виявлення анаеробних і аеробних патогенних мікроорганізмів, висіви інкубували при кімнатній температурі та у термостаті при 37°С протягом 72 годин). При проведенні вірусологічних досліджень змивів (кожну пробу інакулювали у чотири пробірки із перещеплюваною культурою клітин нирок поросят, проводили п'ятикратне пасажування). У результаті проведених досліджень у жодній із проб вищеназваних патогенних бактерій та цитопатичного агента не виявлено. Таким чином було підтверджено, що ВПФпоросята неконтаміновані найбільш поширеними патогенними мікробами. Джерела інформації, прийняті до уваги при експертизі: 1. Safron J., Goner J.C. The SPF Pig in Research. - In: ILAR Journal Online, Vol.38(1), 1997, P.86-93. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601