Спосіб ідентифікації особи злочинця у разі статевого злочину

Спосіб ідентифікації особи злочинця у разі статевого злочину шляхом проведення аналізу змивів і відбитків зі статевого члена передбачува ного злочинця, який відрізняється тим, що взяті у підозрюваного змиви і відбитки зі статевого члена піддають диференційному лізису, ВІДДІЛЯЮЧИ КЛІТИНИ підозрюваного від клітин потерпілої з наступною постановкою полімеразної ланцюгової реакції, потім здійснюють візуалізацію продуктів ампліфікації, виявляючи алелі, не притаманні генотипу підозрюваного, порівнюють генотип взірця потерпілої з одержаним генотипом зі змивів і відбитків, визначають присутність ДНК у змивах підозрюваного, тим самим ідентифікуючи особу злочинця Винахід відноситься до області судової медицини і може бути використаний при ідентифікації особистості злочинця при статевому злочині Відома оптимізація способу вибіркового вилучення генетичного матеріалу сперматозоїдів зі змішаних біологічних СЛІДІВ, ЯКІ МІСТЯТЬ сперму, за рахунок підвищення ефективності процедури диференційного лізису клітин, які присутні в цих слідах [1] Ефективність диференціації клітин у досліджуваних об'єктах оцінювали ампліфікацією одержаних з них ДІЖ, специфічної для поліморфного локусу DIS80 [2], кінцеві продукти розділяли в 2,5% агарозному гелі Na Sieve (FMC, США) і аналізували за допомогою комп'ютерної інтерполяції і регресивного аналізу (пакет програм Центру "ГЭНЕКС" при Бюро судово-медичної експертизи Мінздравмедпрому РФ) Тампоні (змиві) ГОЛІВКИ статевого члена [2] Однак, при вказаних дослідженнях ідентифікація проводиться тільки за еритроцитарною ізосеролопчною системою АВО, що не дозволяє з достатнім ступенем вірогідності виключити або підтвердити/, В основу винаходу поставлено, задачу вдосконалення способу ідентифікації особи злочинця у разі статевого злочину шляхом проведення аналізу змивів і відбитків зі статевого члена підозрюваного злочинця методом ПЛР, що дозволить з високим ступенем вірогідності (99, 99%) підтвердити або виключити належність підекспертного до злочину Поставлена задача вирішується тим, що, згідно винаходу, взяті у підозрюваного змиви і відбитки зі статевого члена піддають диференційному лізису, ВІДДІЛЯЮЧИ клітини підозрюваного від клітин потерпілої з наступною постановкою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), потій здійснюють візуалізацію продуктів ампліфікації, виявляючи аллєлі, не притаманні генотипу підозрюваного, порівнюють генотип зірця потерпілої з одержаним генотипом із змивів і відбитків, визначають присутність ДНК клітин піхвового епітелію у змивах підозрюваного, тим самим ідентифікуючи особу злочинця Спосіб здійснюється наступним чином При розслідуванні статевих злочинів виникає питання про регіональну належність епітеліальних клітин у слідах, пов'язаних зі встановленням наяв Однак, даний спосіб може бути застосований тільки при аналізі піхвового тампона з метою ідентифікації особи злочинця шляхом типування сперматозоїдів Типування ж піхвового епітелію для ідентифікації особи злочинця методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) не відоме Найбільш близьким до запропонованого технічного рішення є проведення досліджень при судово-цитолопчній експертизі, коли об'єктом дослідження є змив з голівки статевого члена підозрюваного у статевому злочині Питанням, підлягаючим рішенню, є наявність і ідентифікаційна належність піхвового епітелію, виявленого у ю ю ю 51559 ності клітин слизової оболонки піхви Цитологічному дослідженню підлягають мазки-відбитки і змив з голівки статевого члена підозрюваного у згвалтувванні жінки Запропонований метод був застосований при проведенні судово-медичної експертизі у 12 випадках Була використана зберігаюча процедура диференційного лізису, яка є найбільш раціональною і запобігаючою втрати інтересуючої ДНК При цьому генотипування вказаних вище об'єктів запропонованим методом з використанням ПЛР дозволяє підтвердити або виключити з високим ступенем вірогідності причетність підозрюваного до злочину Приклади конкретного виконання запропонованого способу Випадок І з практики СМЕ В м Ізмаїлі Одеської області було знайдено труп жінки приблизно 25 років з ознаками насильної смерті При проведенні судово-медичного дослідження в тампонах з вмістом піхви винайдені сперматозоїди, що вказують про можливий насильний статевий акт При проведенні слідства у припустимо підозрюваних у здійсненні даного злочину були відібрані наступні об'єкти для дослідження - у гр К - зірці крові, сперми, змив і 2 відбиткиз голівки статевого члена, - у гр Кл - зірці крові, змиви і 2 відбитки з голівки статевого члена По даній справі була призначена судовомедична експертиза, в ході якої було встановлено, що сперма, виявленаї в тампоні з вмістом піхви потерпілої невідомої жінки належить гр АВ за ізосеролопчною системою АБО, у змивах з голівки статевого члена підозрюваних К і Кл виявлені клітини слизової оболонки піхви, які належать ЖІНЦІ з групою крові, схожою з такою у потерпілої, але категорично сказати про належність піхвового епітелію не можна через одногрупність крові потерпілої і підозрюваних Приймаючи до уваги все вищесказане, прокуратура призначає - за даною кримінальною справою провести генотипоскопічну експертизу, при рішенні котрої поставити наступні питання - чи можливе походження клітин слизової оболонки піхви, знайдених у змивах голівок статевих членів гр К і Кл , від невідомої жінки 20 - 25 років, якщо "да", то з якою вірогідністю'? Висновки При молекулярно-генетичному аналізі ДНК, виділеної зі змиву з голівки статевого члена гр К , виявлені аллєлі, які відповідають таким в ДНК зірця крові трупа невідомої жінки Таким чином, клітини слизової оболонки піхви, виявлені у змиві з голівки статевого члена гр К, належать трупу невідомої жінки 20 - 25 років з вірогідністю 99,9995%, що є підтвердженням причетності підозрюваного К до статевого злочину Випадок II з практики СМЕ ЗО червня 1999 року о 4 годині біля будинку середньої школи Запоріжжя було знайдено труп гр Б , 1980 року народження з ознаками механічної асфіксії На принадність до здійснення вбивства перевіряються гр Ш і гр К 27 07 99 до Бюро судово-медичної експертизи було доставлено два опечатаних пакети, у одному з яких знаходилися зірці крові гр Ш , гр К і трупа гр Б У другому пакеті знаходилися тампони з вмістом піхви, а також 2 мазки - відбитки з голівки статевого члена підозрюваного гр Ш і аналогічні речові докази підозрюваного гр К Видано ВІСІМ предметних склів - змиви зі статевих членів гр Ш та гр К Для геномної дактилоскопії були відібрані такі об'єкти 1 Зірець крові гр Б , об'єкт № 1, 2 Тампон з вмістом піхви потерпілої гр Б , об'єкт № 2, 3 Зірець крові підозрюваного гр Ш , об'єкт № З, 4 Змив з голівки статевого члена підозрюваного Ш, об'єкт № 4, 5 Зірець крові гр К , об'єкт № 5, 6 Змив з голівки статевого члена гр К , об'єкт №6 Генотипічні дослідження Типування геномної ДНК проводили з використанням метода полімеразної ланцюгової реакції з шістю парами праймерів, котрі є гомологічними пперваріабельним локісам генома людини ДНК плям крові виділяли за модифікайною методикою (Biotechmques, 1991, VI О, Р 506 - 513) до матеріалу з плямою крові додавали 1мл бідистильоіваної води, перемішували і інкубували при кімнатній температурі на протязі ЗОхвил Центрифугували Зхвил при ЮОООд Надосадкову рідину видаляли, крім 20мкл, додавали ЮОмкл 5% Chelex-100 Інкубували ЗОхвил при 60°С Ретельно перемішували, кип'ятили на водяній бані 8хвил Інтенсивно струшували, центрифугували Зхвил при ЮОООд Для ПЛР відбирали по Юмкл супернатанта ДНК з рідкої крові підозрюваних виділяли у ВІДПОВІДНОСТІ з приведеною вище методикою без етапу замочування, використовуючи об'єм крові 50мкл ДНК тампона з вмістом піхви потерпілої Б (об № 2) і змив з голівок статевих членів підозрюваних гр Ш і К (об № 4 і № 6) видаляли диференціальне із фракції епітеліальних клітин слизової оболонки піхви (об № 2 1 ) і з фракцій сперми (об № 2 2, 4 2, 6 2) Тканину дробили, добавляли лізуючий буфер ЮмМ NaCI, ЮмМтріс-НСІ рН 8,0, ЮмМДТА, 0,2% SDS, 40мМ DTT Інкубували 2 години при 37°С ДВІЧІ обробляли сумішшю хлоформ-ізо-аміловий спирт (24 1) до водно-сольової фази додавали 8М амоній ацетат до 2М Інкубували 1 годину у холодильнику Центрифугували при 10тисоб/хвил на протязі 5хвил До супернананту приливали 2,5 об'єма етанолу Інкубували на протязі ночі при температурі - 20°С Центрифугували 10тис об/хвил на протязі 5хвил Осад ДВІЧІ промивали 70% етанолом, висушували, розчиняли в ТЕ-буфері Ампліфікацію ДНК проводили згідно Protocol II PCR Methods and Applications, 1991, VI, N2 на термоциклері MJR PTC-200 (USA) Висновки При молекулярно-генетичному аналізі ДНК, виділеної зі змиву з голівки статевого члена гр Ш і 51559 гр К, виявлені аллєлі, які не відповідають ДНК, виділеної із зірця крові потерпілої гр Б Таким чином, клітини слизової оболонки піхви, виявлені в змивах з голівок статевих членів підозрюваних гр Ш і гр К, не належать потерпілій гр Б , що є свідоцтвом непричетності підозрюваних гр Ш і гр К до статевого злочину В порівнянні з прототипом, запропоноване технічне рішення дозволяє 3f рахунок використання при проведенні молекулярно-генетичних досліджень метода полімеразної ланцюгової реакції, з високим ступенем вірогідності підтвердити або виключити принадність досліджуваного до статевого злочину Література 1 Л И Гыскэ, П Л Иванов Метод дифференциального лизиса клеток в молекулярногенетической идентификационной экспертизе вещественных доказательств вопросы оптимизации процедуры - Республиканский центр судебномедицинской экспертизы Минздравмедпрома РФ, Институт молекулярной биологии им В А Энгельгардта Журнал "Судебномедицинская экспертиза", РАН, Москва -1996 -С 16 2 Kasai К , Nakamura V, White R // Ibid -1990 Vol35 -P 1196-1200 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71