Спосіб визначення вмісту гідроген сульфіду в сироватці крові

Спосіб визначення вмісту гідроген сульфіду в сироватці крові, що передбачає додавання 0,1 мл 3 фенілендіаміну гідрохлориду, 0,4 мл 30 мМ розчину FeCl3 в 1,2 М НСl. Проводять інкубацію 5 хв. при 18-25 °С, осаджують білки 1 мл 20 % ТХО, центрифугують 10 хв. при 3000 об/хв. Оптичну щільність надосадової рідини вимірюють при 590 нм проти контрольної проби, в яку замість сироватки крові додають 0,1 мл 7,5 % розчину альбуміну. Як стандарт використовують водні розчини Na2S x 9Н2О. Конкретний приклад застосування способу. В пробірки з 0,5 мл 1 % свіжого розчину ацетату цинку додають по 0,1 мл проб сироватки крові людини чи експериментальних тварин, 2,5 мл дистильованої води (всі проби дублюють). Проби ретельно перемішують і додають 0,5 мл 50 мМ свіжого водного розчину пара-фенілендіаміну гідрохлориду, 0,4 мл 30 мМ розчину FeCl3 в 1,2 М НСl. Проводять інкубацію 5 хв. при 18-25 °С, додають 1 мл 20 % ТХО, центрифугують 10 хв. при 52136 4 3000 об/хв. Оптичну щільність надосадової рідини вимірюють при 590 нм в кюветі на 1,0 см проти контрольної проби, в якій замість сироватки крові використовують 0,1 мл 7,5 % розчину альбуміну. Вміст гідроген сульфіду розраховували за формулою: Сд=(Ед/Ест)хСст мкмоль/л, де Сд - концентрація гідроген сульфіду в сироватці крові, Ед - оптична щільність дослідної проби, Ест - оптична щільність стандартної проби, Сст - концентрація гідроген сульфіду в стандартній пробі. Стандартом слугували водні розчини Na2Sx9Н2О з концентрацією 31,2-3120 мкмоль/л. Результати наведені в таблицях 1, 2. Таким чином, запропонований спосіб визначення вмісту гідроген сульфіду в сироватці крові людини за утворенням тіонінового барвника має вищу аналітичну чутливість та кращу відтворюваність, ніж його відомий прототип, а також дозволяє скоротити час проведення аналізу. Таблиця 1 Показники оптичної щільності проб з різним вмістом гідроген сульфіду, визначеними за реакціями з НКдиметил-пара-фенілендіаміном (прототип) та пара-фенілендіаміном Оптична щільність, Е (% - коефіцієнт варіації) Вміст гідроген сульфіду в стандартному розчині, Реакція з N,N-диметил-параРеакція з пара-фенілендіаміном мкмоль/л фенілендіаміном 15,6 0,003±0,0008 (23,8 %) 0,007±0,0010 (13,7 %) 31,2 0,006±0,0008 (12,2 %) 0,013±0,0008 (6,12 %) 62,4 0,013±0,0010 (8,39 %) 0,024±0,0015 (6,09 %) 156,0 0,035±0,0029 (8,35 %) 0,056±0,0031 (5,46 %) 312,0 0,072±0,0042 (5,80 %) 0,110±0,0055 (4,98 %) 624,0 0,131±0,0132 (10,1 %) 0,215±0,0125 (5,81 %) 1248,0 0,212±0,0271 (12,8 %) 0,400±0,0257 (6,42 %) Примітки: 1. Е - різниця між оптичною щільністю дослідної та контрольної проб; 2. результати вимірювань представлені як середні величини з 4 паралельних проб (М± ) Таблиця 2 Конкретні приклади застосування способу визначення вмісту гідроген сульфіду в сироватках крові людини та тварин у порівнянні з прототипом Реакція з N,N-диметил-параРеакція з пара-фенілендіаміном фенілендіаміном мкмоль/л мкмоль/л Е1 Е2 1 Стандарт 0,068 312 0,127 312 2 Донор 1 0,002 0 0,030 73,7 3 Донор 2 0,006 0 0,028 68,8 4 Донор 3 0,005 0 0,034 83,5 5 Донор 4 0,010 45,8 0,041 100,7 6 Щурі 0,012 55,0 0,056 137,6 7 Щур 2 0,015 68,8 0,062 152,3 8 Щур 3 0,012 55,0 0,048 117,9 9 Кролик 1 0,011 50,5 0,032 78,6 10 Кролик 2 0,009 41,2 0,034 83,5 11 Кролик 3 0,012 55,0 0,038 93,3 Примітка. Е - різниця між оптичною щільністю дослідної та контрольної проб. № Проби сироватки крові (та стандарту) 5 Комп’ютерна верстка І.Скворцова 52136 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601