Застосування кардіотрилу та його метаболіту як кардіопротектора при натрію нітропрусидному стресі

Застосування кардіотрилу та його метаболіту як кардіопротектора при натрію нітропрусидному стресі. (19) (21) u201006933 (22) 07.06.2010 (24) 10.09.2010 (46) 10.09.2010, Бюл.№ 17, 2010 р. (72) КЛИМЕНКО ОЛЕНА ВОЛОДИМИРІВНА, ЧЕКМАН ІВАН СЕРГІЙОВИЧ, ГОРЧАКОВА НАДІЯ 3 52941 кцію серцево-судинної системи, артеріальний тиск, частоту серцевих скорочень, потребу міокарду в кисні. [10]. В даній роботі вивчали вплив кардіотрилу та його метаболіту, а також АТФ-лонг на метаболізм оксиду азоту при стресі, викликаному натрію нітропрусид. Експериментальні дослідження проведені згідно рекомендацій Державного фармакологічного центру МОЗ України [11[. Досліди проведені на 30 білих безпорідних щурах лінії Wistar обох статей масою 210,0-250,0, що отримані з віварію НМУ. Всі експерименти виконані згідно «Методичних рекомендацій ДФЦ МОЗ України». Нітропрусид натрію вводили внутрішньоочеревинно в дозі 20мг/кг. Досліджувані препарати вводили внутрішньоочеревинно в дозах - кардіотрил - 5мг/кг, МТ - 5мг/кг, АТФ-лонг - 10мг/кг. Експозиція 60 хвилин. Метаболізм NO оцінювали по активності NO-синтази (NOS), вмісту нітратів, рівню сумарних SH-груп і активності глутатіонредуктази (ГР). Стабільні метаболіти NO визначали по рівню нітратів в реакції Грісса, активність NOS - по різниці між швидкістю окислення NADPH, реєстрованого флюорометричним методом. Вміст сумарних SH-груп визначали спектрофотометричним методом по реакції з 5,5 дитіобіс - 7 - нітробензойною кислотою. Концент 4 рацію білка оцінювали за методом Бредфорда. Нітротирозин визначали в гомогенаті серця твердофазним імуносорбентним методом по набору фірми ELISA (№4513К19). Статистичну обробку результатів проводили з використанням t-критерію Стьюдента [12]. Встановлено, що натрію нітропрусид призводить до порушень в системі синтезу і транспорту ендогенного NO міокарду. Проведені дослідження показали зниження активності NO-синтази (з 33,5±2,33мкм/мг/хв до 15,3±1,15мкм/мг/хв.), підвищення рівня маркеру нітрозуючого стресу - нітротирозину (з 17,0±0,75нмоль/г до 43,0±4,11нмоль/г), що характерно для розвитку гістотоксичної гіпоксії. Паралельно реєстрували зниження основних показників тіол-дисульфідної системи - відновлених тіолів (з 148,8±12,7мкм/г до 87,5±5,1мкм/г) і активність ГР (з 28,7±2,7мкм/мг/хв до 10,1±1,34мкм/мг/хв) в міокарді. Натрію нітропрусид призводить до розвитку нітрозуючого стресу в міокарді, внаслідок чого в активному центрі NOсинтази відбувається окислювальна модифікація NO і його дериватів. В результаті стресу, викликаного натрію нітропрусидом, реалізувалося окислення, нітрозування відновлених тіолів і пригнічення активності ГР. Таблиця Вплив кардіотрилу, його метаболіту та АТФ-лонг на показники метаболізму NO в міокарді при інтоксикації натрію нітропрусидом (НН) Досліджувані Інтактні тварини показники АктивністьNO33,5±2,33 синтетази, мкм/мг/хв Нітротирозин, нмоль/г 17,0±0,75 Відновлені SH-групи, 148,8±12,7 мкм/г ГР, мкм/мг/хв 28,7±2,7 НН НН + кардіотрил НН + МТ НН + АТФ-лонг 15,3±1,15* 18,0±1,12** 21,0±1,88** 15,0±2,7 43,0±4,11* 32,0±3,12** 28,0±2,88** 47,1±5,0 87,5±5,1* 110,0±9,8** 128,5±8,7** 82,0±6,8 10,1±1,34* 18,0±1,8** 21,7±1,27** 12,0±1,8 Примітка: * - р≤0,05 по відношенню до інтактних тварин ** - р≤0,05 по відношенню до НН Отримані результати свідчать, що протекторна дія АТФ-лонг не реалізується внаслідок позитивного впливу на зміни в системі NO і тіолдисульфідної системи, а обумовлено підвищенням ресурсів в міокарді, нормалізацією показників прооксидантно - антиоксидантного гомеостазу та активності іонтранспортних систем. Кардіотрил та його метаболіт обмежували стресорну дію натрію нітропрусид. Про це свідчить зниження рівня маркеру нітрозуючого стресу - нітротирозину (кардіотрил - з 43,0±4,11нмоль/г до 32,0±3,12нмоль/г, метаболіт - з 43,0±4,11нмоль/г до 28,0±2,88нмоль/г) на фоні поліпшення показників тіол-дисульфідної системи: відновленні тіоли (кардіотрил - з 87,5±5,1мкм/г до 110,0±9,8мкм/г, метаболіт - з 87,5±5,1мкм/г до 128,5±8,7мкм/г) та активність ГР (кардіотрил з 10,1±1,34мкм/мг/хв до 18,0±1,8мкм/мг/хв, метаболіт з 10,1±1,34мкм/мг/хв до 21,7±1,27мкм/мг/хв) в групах тварин, що отримували похідні тріазолу. Препара ти не викликали активуючого ефекту по відношенню NO-синтази (кардіотрил - з 15,3±1,15мкм/мг/хв до 18,0±1,12мкм/мг/хв., метаболіт з 15,3±1,15мкм/мг/хв до 21,0±1,88мкм/мг/хв.), тому що їх кардіопротекторна дія, як було показано попередньо реалізується завдяки пригнічення оксидативного стресу та усунення мітохондріальної дисфункції. Отримані дані константують наявність у похідних тріазолу - кардіотрилу та його метаболіту, кардіопротекторної дії при моделюванні натрію нітропрусидного стресу. Перспективним вважаються подальші дослідження механізмів захисної дії АТФ-лонг, кардіотрилу та його метаболіту при натрію нітропрусидом. Література 1. Реутов В.П., Оролов С.Н. Физиологическое значення гуанилатциклазы и роль окиси азота и нитросоединений в регуляции активности этого 5 52941 фермента Физиология человека. - 1993. - Т. 19. С. 124-137. 2. Соловьев А.И., Стефанов А.В. Фармакология и токсикология оксида азота: два лица одной и той же молекулы // Соврем. проблемы токсикологии. 1998. №1.С. 35-38. 3. Амосова К.М., Конопльова А.Ф., Мхітарян Л.С. та інш. Клінічна ефективність нового препарату метаболічного типу дії АТФ-лонг та його вплив на фізичний стан хворих з початковими формами ІХС //Ліки України. - 1999. - №6. - С. 57-58. 4. Davies M.J., Fu S., Wang H., Dean R.T. Stable markers oxidant damage to proteins and their application in study human disease //Free Radic. Biol. Med. - 1999. - Vol.27 №11-12. - P.1151-1163. 5. Патент №13132 (Україна), МПК JOIN 33/48.(UA). - №200509119 /Колесник Ю.М., Беленічев І.Ф., Абрамов А.В., Павлов С.В. /Спосіб визначення активності ферменту NO-синтетази в гомогенатах тканин. - Заявл. 27.09.2005. 6. Соломин X. Снайдер, Дейвид З. Бредт. Биологическая роль окиси азота. В мире науки. 1992. - №7. – С. 16-24. 7. Губский Ю.И., Беленичев И.Ф., Павлов С.В. и др. Токсикологические последствия окислительной модификации белков при различных патоло Комп’ютерна верстка М. Ломалова 6 гических состояниях (обзор литературы). //Совр. пробл. токсикол. - 2005. - №3. - с. 20-26. 8. Георгиевский Г.В., Куликов А.Ю., Мазур И.А. Определение примесей в отечественных субстанциях - производных 1,2,4-триазола методом ОФ ВЭЖХ //Річна сесія наукової ради з проблеми «Аналітична хімія» НАН України, 25-30 травня 2009, Новий світ, АР Крим, Україна: Тези доп. Київ: видавець B.C. Мартинюк, 2009. – 71с. 9. Голиков П.П. Оксид азота в клинике неотложных состояний. - М: Медпрактик - М., 2004. 180с. 10. Губский Ю.И., Беленичев И.Ф., Павлов С.В. и др. Токсикологические последствия окислительной модификации белков при различных патологических состояниях (обзор литературы) // Совр. пробл. токсикол. - 2005. - №3. - С. 20-26. 11. Горбунов Н.В. Активация образования окиси азота, опосредованная метаботропными глутаматными рецепторами в первичных культурах клеток-зерен мозжечка //Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1995. - №7. - С. 40-48. 12. Лапач С.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статистика в науке и бизнесе. - Киев.: Изд-во «Морион». 2002 – 639с. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601