Спосіб одержання емульгатора

Спосіб одержання емульгатора, що включає культивування Rhodococcus erythropolis IMB Ac5017 на рідкому середовищі, що містить мінеральні солі і 2 % етанолу як джерела вуглецю і енергії, а також внесення цитрату натрію на початку стаціонарної фази росту, який відрізняється тим, що концентрація цитрату натрію становить 0,0850,095 %. (19) (21) u201002788 (22) 11.03.2010 (24) 27.09.2010 (46) 27.09.2010, Бюл.№ 18, 2010 р. (72) ПИРОГ ТЕТЯНА ПАВЛІВНА, ТАРАСЕНКО ДМИТРО ОЛЕКСАНДРОВИЧ, КОНОН АНАСТАСІЯ ДМИТРІВНА (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ХАРЧОВИХ ТЕХНОЛОГІЙ 3 53085 цента дає змогу знизити у 3 рази вміст солей у середовищі культивування R. erythropolis IMB Ac5017 та підвищити до 70 % індекс емульгування розбавленої у 70 разів куль-туральної рідини. Спосіб здійснюється наступним чином. Культивування R. erythropolis IMB Ac-5017 здійснюють на рідкому мінеральному середовищі такого складу (г/л): KNO3 - 1,0; NaCI - 1,0; Na2HPO4 - 0,6; КH2PO4 - 0,14; MgSO4 x 7H2O - 0,1; FeSO4 x 7H2O 0,001, pH 6,8-7,0. Як джерело вуглецю і енергії використовують етанол у концентрації 2 % (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру R. erythropolis IMB Ac-5017 з середини експоненційної фази (44-48 год росту), вирощену на рідкому середовищі з 1,2 % (об'ємна частка) етанолу. Кількість посівного матеріалу становить 5 % від об'єму середовища. На початку стаціонарної фази росту (58-60 год) у середовище вносять 0,085-0,095 % цитрату натрію. Цитрат натрію добавляють у середовище у вигляді 10 %ного розчину. Культивування здійснюють у колбах об'ємом 750 мл з 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 30 °С, рН 6,8-7,0 упродовж 120 год. Використання нового способу дає змогу знизити у 3 рази вміст солей у середовищі культивування (з 9 до 2,85 г/л) і підвищити до 70 % індекс емульгування розбавленої у 70 разів культуральної рідини. 4 Приклад 1. Синтез емульгатора за умов росту R. erythropolis IMB Ac-5017 на середовищах різного складу Культивування R. erythropolis IMB Ac-5017 здійснюють на рідкому мінеральному середовищі 1 (прототип) такого складу (г/л): КН2РO4 - 6,8; NaOH - 1,0; NH4NO3 - 0,6; MgSO4 x 7H2O - 0,4; СаСІ2 x 2Н2O - 0,1; FeSO4 x 7H2O - 0,001; рН 6,8-7,0; а також на середовищі 2 (г/л): KNO3 - 1,0; NaCl - 1,0; Na2HPO4 - 0,6; КН2РO4 - 0,14; MgSO4 x 7H2O - 0,1; FeSO4 x 7H2O - 0,001, рН 6,8-7,0. Як джерело вуглецю і енергії використовують етанол у концентрації 2 % (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру R. erythropolis IMB Ac-5017 з середини експоненційної фази (4448 год росту), вирощену на рідкому середовищі з 1,2 % (об'ємна частка) етанолу. Концентрація посівного матеріалу становить 5 % від об'єму середовища. Культивування здійснюють у колбах об'ємом 750 мл з 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 30 °С, рН 6,8-7,0 упродовж 120 год. Синтез емульгатора оцінюють за показником індексу емульгування (Е24, %) розбавленої у 50 і 70 разів культуральної рідини. Як субстрат для емульгування використовують соняшникову олію. Індекс емульгування культуральної рідини, одержаної після культивування штаму R. erythropolis IMB Ac-5017 на середовищах різного складу наведено у табл.1. Таблиця 1 Синтез емульгатора залежно від складу середовища культивування R. erythropolis IMB Ac-5017 Середовище 1(прототип) 2 Індекс емульгування культуральної рідини (Е24,%) 1:49 1:69 65 60 65 60 Як видно з наведених у табл. 1 даних, показники синтезу емульгатора є однаковими за умов росту R. erythropolis IMB Ac-5017 на обох середовищах. У подальших дослідженнях культивування продуцента здійснювали на середовищі 2, оскільки воно значно дешевше (містить у 3 рази менше солей, ніж середовище 1). Приклад 2. Вплив цитрату на синтез емульгатора R. erythropolis IMB Ac-5017 Культивування R. erythropolis IMB Ac-5017 здійснюють на рідкому мінеральному середовищі такого складу (г/л): КNO3 - 1,0; NaCI - 1,0; Nа2НРО4 - 0,6; КН2РO4 - 0,14; MgSO4 x 7H2O - 0,1; FeSO4 x 7H2O - 0,001, pH 6,8-7,0. Як джерело вуглецю і енергії використовують етанол у концентрації 2 % (об'ємна частка). Як посівний матеріал використовують культуру R. erythropolis IMB Ac-5017 з середини експоненційної фази (44-48 год росту), вирощену на рідкому середовищі з 1,2 % (об'ємна частка) етанолу. Концентрація посівного матеріалу становить 5 % від об'єму середовища. На початку стаціонарної фази росту (58-60 год) у середовище вносять цитрат натрію у концентрації 0,05-0,1 %. Культивування здійснюють у колбах об'ємом 750 мл з 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 30 °С, pH 6,8-7,0 упродовж 120 год. Індекс емульгування культуральної рідини, одержаної після культивування штаму R. erythropolis IMB Ac-5017 на середовищі з різною концентрацією цитрату натрію наведено у табл. 2. 5 53085 6 Таблиця 2 Синтез емульгатора залежно від концентрації цитрату натрію у середовищі культивування R. erythropolis IMB Ac-5017 Концентрація цитрату натрію, % Без цитрату (контроль) 0,06 0,07 0,08 0,09 0,10 Індекс емульгування культуральної рідини (Е24, %) 1:49 1:69 65 60 70 62 72 63 75 65 80 70 78 67 Як видно з наведених даних, індекс емульгування розбавленої у 70 разів культуральної рідини максимальний за концентрації цитрату у середовищі з етанолом 0,08-0,09 %. Приклад 3. Синтез емульгатора R. erythropolis IMB Ac-5017 залежно від моменту внесення цитрату натрію у середовище з етанолом Вирощування R. erythropolis IMB Ac-5017 здійснюють як описано вище. На початку процесу культивування і на початку стаціонарної фази росту (58-60 год) у середовище вносять цитрат натрію у концентрації 0,08-0,1 %. Культивування здійснюють у колбах об'ємом 750 мл з 100 мл середовища на качалці (320 об/хв) при 30 °С, рН 6,87,0 упродовж 120 год. Рівень синтезу емульгатора наведено у табл. 3. Як видно з наведених у табл. 3 даних, показник £24 розбавленої у 70 разів культуральної рідини досягає найвищого значення за внесення на початку стаціонарної фази росту цитрату натрію у концентрації 0,085-0,095 %. Таблиця 3 Вплив моменту внесення різних концентрацій цитрату натрію у середовище з етанолом на синтез емульгатора R. erythropolis IMB Ac-5017 Момент внесення цитрату Концентрація цитрату, % Е24, %(1:69) 0,08 62 0,085 64 0,09 64 На початку процесу культивування 0,095 65 0,10 61 0,08 67 0,085 69 На початку стаціонарної фази рос0,09 70 ту 0,095 70 0,10 67 5017 та підвищити індекс емульгування Отже, використання запропонованого способу розбавленої у 70 разів культуральної рідини до дає змогу знизити у 3 рази вміст солей у 70%. середовищі культивування R. erythropolis IMB Ac Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601