Поживне середовище для виділення та культивування урогенітальних трихомонад

Винахід відноситься до медичної мікробіології і може бути використаний у дерматовенерології, урології, гінекології для лабораторної діагностики сечостатевого трихомоніазу. На сьогодні відомо широкий арсенал поживних середовищ для вирощування урогенітальних трихомонад. Наприклад: середовище Джонсона -Трасела (вміщує екстракт печінки, розчин Рінгера, пептон, цистеін, мальтозу, кінську сироватку, антибіотики, метиленовий синій), середовище ЦОЛІПК (вміщує гідролізат казеїну с гідролізином, мінеральні солі, мальтозу, оротову кислоту, кінську сироватку, антибіотики), середовище ЦНДКВІ (вміщує ферментолізат біомаси мікроорганизмів, мальтозу, мінеральні солі, сироватку, антибіотики) ("Лабораторная диагностика мочеполового трихомониаза", пособие для врачей-лаборантов. ЦНИКВИ МЗ РФ. Москва, 1997). Відомо також середовище СКДС, до складу якого входять: сольовий розчин (хлористий натрій - 6,5г, хлористий калій - 0,14г, хлористий кальцій - 0,12г, бікарбонат натрію - 0,2г, 0,5% розчин метиленового синього 0,5мл, дистильована вода - 1л ) - 100мл, гідролізат казеіна для парентерального введення - 10мл, дріжджовий аутолізат- 10 мл, сироватка крові кінська або великої рогатої худоби - 30мл, 20% розчин мальтози - 10мл, пеніцилін-160000 ОД, стрептоміцин - 1мкг (Приказ МЗ СССР №936 от 12.07.85 "Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза", "Лабораторная диагностика мочеполового трихомониаза" Пособие для врачей - лаборантов. ЦНКВИ МЗ РФ. Москва, 1997). Вищезгадане поживне середовище є найбільш близьким по складу та результату, який може бути досягнут при його використанні, до того, що заявляється, тому його обрано в якості прототипу. Основним недоліком аналогів і прототипу є нестандартність їх складових частин по кількости, що впливає на ростові властивості та знижує якість цих середовищ. Також, деякі аналоги потребують для виготовлення харчову сировину, містять багаточисленні компоненти, що потребує значні працезатрати, затрати часу і коштів. Все це робить ці середовища малодоступними для використання в умовах лабораторій установ охорони здоров'я. У зв'язку з вищевикладеним, в основу винаходу покладено задачу підвищення якості поживного середовища для виділення та культивування урогенітальних трихомонад. Задача, яка поставлена в основу винаходу, вирішується тим, що до відомого поживного середовища для вирощування урогенітальних трихомонад, яке включає сольовой розчин, дріжджовий аутолізат, кінську сироватку, мальтозу, антибіотики, згідно з винаходом, включають екстракт плаценти, метилурацил, аденозинтрифосфат (АТФ). Складові середовища входять у такому співвідношенні (г/л): Екстракт плаценти 90-110 Дріжджовий аутолізат 60-80 Кінська сироватка 90-110 Мальтоза 9,0-11 Метилурацил 0,02-0,03 Аденозинтрифосфат 0,001-0,003 Пеніцилін, тис. ОД 900-1100 Стрептоміцин 0,9-1,1 Ністатин, тис. ОД 35-45 Сольовий розчин до 1 л Вміст амінного азоту, мг/% 30-50 рН 6,1-6,3 Якість поживного середовища, що заявляється, підвищується за рахунок стандартності складових частин по кількості амінного азоту та за рахунок включення до складу джерел пуринів та пиримідінів (метилурацил та АТФ), які трихомонади потребують для росту і самостійно синтезувати не здатні. Екстракт плаценти забезпечує збудник трихомоніазу необхідними амінокислотами. Дріжджовий аутолізат є джерелом необхідних вітамінів. Кінська сироватка є джерелом жирних кислот і стеролів, які не здатні виробляти урогенітальні трихомонади. Мальтоза забезпечує вуглеводно-енергетичний обмін. Метилурацил є джерелом піримідинів, яких не здатні синтезувати три хомонади. Аденозинтрифосфат є джерелом пуринів, яких не синтезують трихомонади. Стрептоміцин та пеніцилін пригнічують супутню мікрофлору. Ністатин не дозволяє розмножуватись грибам. Сольовий розчин - джерело мінеральних солей, забезпечує буферність середовища. Середовище одержують таким чином: викладені в рецепті компонента-екстракт плаценти, дріжджовий аутолізат, кінську сироватку, 20% розчин мальтози, сольовий розчин, зливають разом у стерильних умовах в приведених пропорціях в стерильну колбу, доводять рН до потрібних величин, додають метилурацил, аденозинтрифосфат, антибіотики і ністатин, ретельно змішують, розливають по 5мл у стерильні пробірки, зберігають в холодильнику при 4°С. Постійні властивості середовища підтримуються за рахунок постійної концентрації білкового вмісту. Усі компоненти розраховувались на 1л середовища. Дослідний матеріал засівають в 30 пробірок, вирощують в термостаті при 35-36°С. Облік результатів проводять на 1-3, 5-7, 9-11 добу. При цьому відмічають термін появи, інтенсивність росту, рухливість та морфологію трихомонад. Наводимо приклади зразків поживного середовища. Складові середовища входять у такому співвідношенні (г/л): Приклад 1. Екстракт плаценти 90 Дріжджовий аутолізат 60 Кінська сироватка 90 Мальтоза 9 Метилурацил 0,02 Аденозинтрифосфат 0,001 Пеніцилін, тис. ОД 900 Стрептоміцин 0,9 Ністатин, тис. ОД 35 Сольовий розчин до 1л Вміст амінного азоту, мг/% 30 pΗ 6,1 Кількість позитивних результатів: на першу добу-27, на другу-1, на третю-2. Інтенсивність росту трихомонад: 20-25 клітин в полі зору-20 проб, 15-20 клітин - 8 проб, 10-15 клітин - 2 проби. Рухливість: інтенсивний рух три хомонад-12 проб, активний рух джгутів та поступовий рух тіл трихомонад-16 проб, коливальний рух тіл трихомонад та активний рух джгутів-2 проби. Мікроскопічне дослідження показує, що трихомонади, вирощені на даному середовищі, не відрізняються від трихомонад, що культивуються у відомому середовищі та мають типічну морфологію. Приклад 2. Екстракт плаценти 100 Дріжджовий аутолізат 65 Кінська сироватка 100 Мальтоза 10 Метилурацил 0,025 Аденозинтрифосфат 0,002 Пеніцилін, тис. ОД 1000 Стрептоміцин 1,0 Ністатин, тис. ОД 40 Сольовий розчин до 1л Вміст амінного азоту, мг/% 40 рН 6,2 Кількість позитивних результатів на першу добу-2 8, на другу-2. Інтенсивність росту: 20-25 клітин в полі зору-26 проб, 15-20 клітин в полі зору-4 проби. Інтенсивний рух трихомонад-19 проб, активний рух джгутів та поступовий рух тіл-8 проб, коливальний рух тіл та активний рух джгутів-3 проби. Морфологія типічна. Приклад 3. Екстракт плаценти 110 Дріжджовий аутолізат 70 Кінська сироватка 110 Мальтоза 11 Метилурацил 0,03 Аденозинтрифосфат 0,003 Пеніцилін, тис. ОД 1100 Стрептоміцин 1,1 Ністатин, тис. ОД 45 Сольовий розчин до 1л Вміст змінного азоту, мг/% 50 рН 6,3 Кількість позитивних результатів на першу добу-24, на другу-3, на третю-3. Інтенсивність росту: 20-25 клітин в полі зору-18 проб, 15-20 клітин в полі зору-6 проб, 10-15 клітин в полі зору4 проби, 50-10 клітин в полі зору-2 проби. Інтенсивний рух-10 проб, активний рух джгутів та поступовий рух тіл 13 проб, коливальний рух тіл та активний рух джгутів-6 проб, рухливі тільки жгути-1 проби. Морфологія типічна.