Спосіб лікування алергічних станів

Спосіб лікування алергічних станів, що включає використання індуктивних алергічних станів та фулеренів, який відрізняється тим, що як індуктори алергії використовують алерген, а як фулерени використовують модифіковані та немодифіковані його форми. (19) (21) u201003903 (22) 06.04.2010 (24) 27.12.2010 (46) 27.12.2010, Бюл.№ 24, 2010 р. (72) КАЙДАШЕВ ІГОР ПЕТРОВИЧ, КУЦЕНКО НЕЛЯ ЛЕОНІДІВНА, ВЕСНІНА ЛЮДМИЛА ЕДУАРДІВНА, МИКИТЮК МАРИНА ВОЛОДИМИРІВНА 3 мкл фосфатно-сольового буферу. Через 24 години мишам вводили 100 мкг DNP-альбуміну в 100 мкл фосфатно-сольового буферу. Недоліком існуючого способу є використання не самих алергенів, а їх імітаторів (анти-IgE антитіла) та використання лише однієї водорозчинної форми фулерену (полігідроксиСбо) під час розвитку опасисто-залежної системної анафілактичної реакції з переважним вивченням клітинно-залежного синтезу та викиду біологічноактивних речовин, що не дає можливості оцінити розвиток алергічного запалення в органах мішенях. В основу корисної моделі поставлена задача створити спосіб лікування алергічних станів, шляхом удосконалення відомого, використовуючи експериментальну модель бронхіальної астми з метою створення умов розвитку алергічного запалення. При цьому в організм одночасно можуть надходити алергени, які є причинними у розвитку алергічного запалення та терапевтичні агенти у вигляді різних форм фулеренів. Поставлена задача вирішується шляхом створення способу лікування алергічних станів, що включає використання індуктивних алергічних станів та фулеренів, який відрізняється тим, що в якості індукторів алергії використовують алерген, а в якості фулеренів використовують модифіковані та немодифіковані його форми. Запропонований спосіб дозволяє високоспецифічно впливати на патогенетичні механізми розвитку алергічного запалення, що суттєво підвищить ефективність лікувальнопрофілактичних заходів та покращить надання медичної допомоги при алергіях. Заявлений спосіб виконується наступним чином: Експериментальні дослідження були проведені на мишах лінії Balb/c віком 6 тижнів. У піддослідних тварин була відтворена експериментальна бронхіальна астма (БА) шляхом внутрішньочеревної сенсибілізації тварин розчином овальбуміну (ОВА група) в стерильному фізіологічному розчині. Сенсибілізацію проводили в 0 та 14 день. На 24, 25, 26 дні тваринам вводився ОВА у вигляді аерозолю, генерованого із 1 % ОВА у 0,9 % фізіологічному розчині за допомогою інгалятора ультразвукового «Муссон-2» (ФГУП «Алмаз», г. Ростов-на-Дону, Россия) протягом 40 56016 4 хвилин. Тваринам з БА в 1 дослідній групі вводили водну дисперсію FС60 (ОВА-FС60 група), тваринам з БА в 2 дослідній групі вводили водну дисперсію FС60 в суміші з ОВА (ОВА-FС60-ОВА група), тваринам з БА в 3 дослідній групі вводили розчин модифікованого фулерену (1,2метанофулеренСбо)-б1карбоксилацид (OBAmFCeo група), тваринам з БА в 4 дослідній групі вводили розчин модифікованого фулерену кон'югованого з ОВА (ОВА-mFС60-ОВА група). Досліджувані фулерени вводили внутрішньочеревно в дозі по 50нг у вигляді розчинів за 1 годину до кожної інгаляції. На 26 день після останньої інгаляції ОВА тваринам проводили евтаназію шляхом цервікальної дислокації. У тварин після забою забирали селезінку з подальшим отриманням суспензії спленоцитів для оцінки стану імунокомпетентних клітин та легені для отримання тканинних відбитків для оцінки змін в органах мішенях. Розвиток БА у тварин підтверджений клінічними симптомами алергічного запалення, зниженням температури тіла (зумовлене синтезом та вивільненням основного медіатору алергії гістаміну), легеневою еозинофІлІєю та зниженням загальної кількості імунокомпетентних клітин в суспензії спленоцитів експериментальних клітин. Введення фулеренів експериментальним тваринам з БА призводило до попередження зниження температури тварин після інгаляції ОВА. При цьому mFC60 більш виражено запобігав зниженню температури та сприяв більш стрімкому її відновленню. Отримані дані свідчать про здатність фулеренів попереджати синтез та вивільнення гістаміну і таким чином пригнічувати розвиток реакції гіперчутливості негайного типу. Під час вивчення змін в органах мішенях, а саме зменшення кількості еозинофілів у відбитках тканин, як один з критеріїв алергічного запалення, показано, що введення фулеренів призводило до зниження числа цих клітин (табл.). При цьому найбільш ефективним виявився модифікований некон'югований FC60. Саме у тварин даної групи число еозинофілів наближалося до показників інтактної групи І складало 5,5±2 %. Тож зниження рівня легеневої еозинофіли є показником того, що введення фулеренів виявляло імунорегулюючу дію при алергічному запаленні в легенях при експериментальній БА. Таблиця Вплив фулеренів на рівень еозинофілів у відбитках тканин легень у тварин з експериментальною БА (М±m) Групи тварин 1н такт, (n = 6) ОВА-ОВА, (n = 6) ОВА-FС60, (n = 6) ОВА-FС60-ОВА (n = 6) ОВА-mFС60, (n = 6) ОВА-mFС60-ОВА, (n = 6) Примітки: * - вірогідно щодо показників інтактної групи # - вірогідно щодо показників групи тварин з експериментальною БА Кількість еозинофілів, % # 4,3±1,0 16,5±4,9* * 14,3±4,8 * 12,5±4,7 # 5,5±1,5 * 12,2±4,1 5 56016 При оцінці імунної системи мишей з БА в групі тварин, яким вводили модифікований фулерен, кон'югований з ОВА, спостерігалося підвищення + експресії молекул CD4 спленоцитів на 25 %, а в групі тварин, яким вводили FС60 в суміші з ОВА на 6 %. В той час як в групах тварин, яким вводили інші форми фулеренів, рівень експресії молекул CD4+ майже не змінювався. Кількість CD8+ клітин вірогідно збільшувалась на 63 % у тварин, яким вводили FC60 в суміші з ОВА та у тварин, яким вводили модифікований фулерен на 16,3 %. В групі тварин, яким вводили водну дисперсію FС60 відмічалося зниження CD8+ клітин на 14,3 % у Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 6 порівнянні із тваринами з БА. Введення модифікованого FС60, кон'югованого з ОВА, не виявило змін у рівні експресії CD8+. Позитивний результат від заявленого способу лікування алергічних станів з використанням фулеренів полягає в зниженні інтенсивності алергічного запалення на фоні введення різних форм фулеренів С60 за умов розвитку експериментальної БА. При цьому, терапевтичний ефект спостерігається як для фулерену, кон'югованого з алергеном, так І не кон'югованого, що свідчить про прямий антиалергійний ефект фулерену. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601