Спосіб оцінки активності генітальної герпесвірусної інфекції у жінок репродуктивного віку з пухлиноподібними ураженнями яєчників

Спосіб оцінки активності генітальної герпесвірусної інфекції у жінок репродуктивного віку з пухлиноподібним ураженням яєчників, що реалізується шляхом імуноферментного дослідження крові на наявність специфічних антитіл до ВПГ-2 (IgM, 3 95 % [Иванюта Л. И., Илюк Т. А. Частота и особенности течения инфекционно-воспалительных заболеваний половых органов гениталий у женщин с фолликулярными кистами яичников. - Вісник асоціації акушерів-гінекологів України. - 2000. - № 2(7). - С. 15-19; Инфекции, передаваемые половым путѐм: руководство для врачей. - Соколовский Е. В., Савичева A. M., Домейка М. и др. - М.: Медпресс-информ, 2006. - 256 с]. Відомий спосіб діагностики герпесвірусної інфекції [патент Російської Федерації № 2192473 від 26.06.2001] - детекція вірусного геному методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), який дозволяє виявити поодинокі копії вірусної ДНК у клітинах, біологічних рідинах (кров, слина, матеріал, взятий із уретри або цервікального каналу); цей спосіб є достатньо інформативним, проте він не дає інформації про стадійність процесу, він є дорогим, його реалізація можлива лише у спеціалізованих медичних центрах за наявності відповідного обладнання. Також відомі серологічні способи діагностики герпесвірусної інфекції [патент Російської Федерації № 2239840 від 10.04.2003, деклараційний патент України на корисну модель № 24197 від 25.06.2007] - виявлення специфічних антитіл (IgG) до вірусу простого герпесу (ВПГ), що дозволяє діагностувати лише активність хронічної (персистуючої) герпесвірусної інфекції і антигену методом імуноферментного аналізу (ІФА) (чутливість більшості відомих ІФА тест-систем для виявлення ВПГ-інфекції варіює в межах 48-98,7 % і залежить від досліджуваного матеріалу). Найбільш близьким за технічною сутністю є спосіб діагностики ступеня активності персистувальної герпесвірусної інфекці [деклараційний патент України на корисну модель № 24197 від 25.06.2007]. Недоліком даного способу є те, що неможливо отримати дані про стан вірусологічного навантаження організму людини в цілому (береться до уваги лише один вірусологічний показник), про стадійність процесу та його активність, що унеможливлює шлях для розробки індивідуального аналізу кожної окремої клінічної ситуації; це призводить до зниження ефективності лікування пацієнтки. В основу корисної моделі покладено задачу створення способу оцінки активності ГГВІ у жінок репродуктивного віку з пухлиноподібними ураженнями яєчників, в якому використана вірусологічна діагностика тканин-мішеней (тканина яєчника та тканина кісти - антиген генітального герпесу), біологічних рідин (фолікулярна та перитонеальна рідина, сироватка крові - концентрації Ig M та G до генітального герпесу) та відділів нижнього статевого тракту (зскрібки з поверхні піхви та цервікального каналу - антиген генітального герпесу), медична ефективність запропонованого способу полягає у максимально всебічному урахуванні стану взаємовідносин системи «збудник - організм жінки» з метою оцінки вірусологічного навантаження, що дає змогу зробити вибір адекватного індивідуального алгоритму ведення клінічного випадку з урахуванням подальших репродуктивних намірів та відновлення функції яєчників. 56380 4 Поставлене завдання способу оцінки активності генітальної герпесвірусної інфекції у жінок репродуктивного віку з пухлиноподібним ураженням яєчників вирішується шляхом імуноферментного дослідження крові, згідно корисної моделі додатково здійснюється вірусологічне обстеження зскрібків з піхви, цервікального каналу, відбитків оперативного матеріалу з виявленням типової локалізації в структурних елементах клітин, біологічних рідин (фолікулярна рідина, перитонеальна рідина, сироватка крові) з метою виявлення специфічного герпетичного антигену ВПГ-2, у разі виявлення одного або декількох позитивних результатів продовжувалось обстеження пацієнтки в динаміці, призначалися комплексне лікування та рекомендації з урахуванням подальших репродуктивних намірів та з метою відновлення функції яєчників. Спосіб реалізується наступним чином: інтраопераційно проводиться забір зразків тканин від хворої, у якої під час передопераційного обстеження верифіковано (за УЗ-даними, бімануальне дослідження) пухлиноподібне ураження яєчника функціональну кісту (кісту жовтого тіла чи фолікулярну кісту); зразки матеріалу, потрапляючи до лабораторії вірусології, приймаються до підготовки проведення досліджень, а саме: - використовується метод імунофлуоресценції Кунса в прямій модифікації з використанням типоспецифічного флуоресцентного імуноглобуліну до вірусу герпесу ВПГ-2 (піхва, цервікальний канал); оцінка проводиться в залежності від вираженості ступеня люмінесценції препарату ("++++", "+++", "++" - позитивна проба; "+" - рекомендовано до обстеження в динаміці; відсутність світіння - як негативний результат). Метод дозволяє не тільки виявити наявність специфічного антигену у клітинах, але і його типову локалізацію в структурних елементах клітин; - використовується непрямий метод Кунса в модифікації із застосуванням мічених флуоресціюючим барвником моноклональних антитіл до ВПГ-2 (капсула кісти, тканина яєчника), які містять лише одну хімічно однорідну популяцію антитіл, комплементарну специфічній детермінанті антигену, що дозволяє здійснювати тонку диференціацію білків, і результат дослідження оцінюється за допомогою люмінесцентного мікроскопу як позитивний за наявності зміни зеленого кольору хемілюмінесценції мічених моноклональних антитіл, властивого їм у незв'язаному з антигенами стані, на червоний у випадку створення комплексу антиген-антитіло. Використовуються люмінесцентні мікроскопи МЛ-2А, ЛЮМАМ-ІІ; - серологічний метод дозволяє оцінити характер та напруженість гуморального імунітету проти герпесвірусних агентів (досліджувались; сироватка крові, фолікулярна рідина, перитонеальна рідина на наявність специфічних антитіл до ВПГ-2 (IgM, IgG)). Використовуються імуноферментні тестсистеми фірми "Novum diagnostica" (Німеччина) та стриповий імуноферментний аналізатор "Stat fax300" (США), при довжині хвилі 450 нм. Інтерпретація даних - порівняння показників з референтними значеннями (див. таб.): 5 56380 Таблиця Референтні значення 10NTU 9-11 NTU 11NTU Інтерпретація мітка відсічки "сіра зона" від'ємний результат позитивний результат - комплексна оцінка отриманих показників. У разі виявлення одного або декількох позитивних результатів продовжувалось обстеження пацієнтки в динаміці, призначалися комплексне лікування та рекомендації з урахуванням подальших репродуктивних намірів та з метою відновлення функції яєчників. Сутність заявленого способу пояснюється наступними прикладами: Приклад 1. Хвора А., 32 p., прооперована з приводу «Безплідність - II. Хронічний двобічний сальпінгіт. Спайковий процес органів малого тазу. Обтяжений гінекологічний анамнез (позаматкова вагітність в анамнезі)». До проведення хірургічного лікування хвора отримала комплексну протизапальну терапію без противірусного компоненту. За УЗ-даними - кіста жовтого тіла лівого яєчника. Інтраопераційно отримано наступний матеріал: зскрібок з поверхні цервікального каналу - "++"; з бокової стінки піхви - "+++"; тканина капсули кісти жовтого тіла - "+++" (зміна кольору препарату на червоний); перитонеальна рідина - Ig М - 15,0 (позитивний результат), Ig G - 57,0 (різко позитивний результат); сироватка крові - Ig M - 21,0 (позитивний результат), Ig G - 50,0 (різко позитивний результат). Вищевказані зміни були розцінені, як наявність системного активного герпетичного процесу (реінфекція або реактивація), після чого призначено Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков 6 відповідне комплексне противірусне лікування (препарати як системної, так і місцевої дії) та дообстеження статевого партнера. Приклад 2. Хвора P., 29 p., прооперована з приводу «ФК правого яєчника. Хронічний двобічний сальпінгіт. Правобічний сактосальпінкс. Спайковий процес органів малого тазу». З анамнезу відомо про випадки появи герпетичних висипань на великих статевих губах біля 4-х місяців тому. Інтраопераційно отримано наступний матеріал: зскрібок з поверхні цервікального каналу - негативний; з бокової стінки піхви - "+"; тканина ураженого яєчника - негативна (відсутність зміни неспецифічного зеленуватого світіння); капсула фолікулярної кісти - "++" (позитивний результат поява типового червоного світіння, але локально); фолікулярна рідина - Ig M - 2,0 (негативний результат), Ig G - 1,0 (негативний результат); сироватка крові - Ig М - 7,0 (негативний результат), Ig G - 15,0 (позитивний результат). Вищевказані зміни були розцінені, як наявність латентної форми герпесвірусної інфекції, після чого призначена загальнозміцнююча, імуномодулююча терапія в період першого етапу післяопераційної реабілітації з рекомендаціями щодо обстеження в динаміці. Таким чином, наведені приклади доводять, що запропонований спосіб оцінки активності генітальної герпесвірусної інфекції у жінок репродуктивного віку з пухлиноподібним ураженням яєчників має високу клінічну інформативність, діагностичну і прогностичну значущість. Перевагами запропонованого способу є невисока вартість реактивів та обладнання і можливість дослідження одномоментного отриманих проб різних біологічних зразків для отримання більш детальної інформації про фазність та глибину ураження герпесвірусом організму жінки. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601