Рідке транспортне середовище для діагностики трихомоніазу “скм-т”

Рідке транспортне середовище для діагностики трихомоніазу, що містить дефібринізовану плазму донорської людської крові, бульйон з бичачих сердець, розчин Рінгера, розчин тіосечовини та антибіотик, яке відрізняється тим, що як антибіотик середовище містить пеніцилін, та додатково 10% розчин харчового желатину, 10% розчин неконсервованої гемолізованої еритроцитарної маси донорської людської крові та 5% розчин харчового зеленого барвника Е 102 при такому співвідношенні компонентів: Корисна модель стосується медицини, а саме, клінічної лабораторної діагностики, мікробіології і дерматовенерології і може бути використаною при проведенні культуральної бактеріологічної діагностики трихомоніазу і амебіазу. Серед відомих комерційних та стандартних бактеріологічних середовищ та їх модифікацій для вирощування трихомонад (СКДС та ін.) багато мають ряд недоліків, головним серед яких є їх низька якість висіюваності найпростійших у таких середовищах. Багато середовищ не підлягають транспортуванню, погано зберігаються та нетривалі при застосуванні. Найбільш близьким за технічною сутністю та результатом, що досягається, є рідке середовище для діагностики трихомоніазу "СКМ-1", що містить наступні компоненти при такому співвідношенні: рідке тіогліколеве середовище 100мл бульйон з бичачих сердець 100мл дріжджовий аутолізат 15мл панангін 10мл 15% розчин фруктози 10мл 15% розчин гліцину 10мл 15% розчин тіосечовини 7мл дефібрінізована плазма донорської людської крові 70мл стрептоміцин 100000 МО 4% розчин гентаміцину 20мл розчин Рінгера 158мл. (Патент України №13850, МПК (2006): C12N1/20, C12Q1/04, бюл. №4/2006). Спільними суттєвими ознаками прототипу і середовища, що пропонується, є наявність в їх складі: - дефібрінізованої плазми донорської людської крові; - бульйону з бичачих сердець; - розчину Рінгера; - антибіотику; - розчину тіосечовини. Однак таке середовище небажано використовувати як транспортне для доставки в ньому матеріалів, що досліджуються, із лікарняних закладів до лабораторії. Середовище за прототипом використовується як вже готове для виділення найпростіших. При транспортуванні в результаті перепаду температур, струшування, а також попадання світла, середовище швидко втрачає свої якості, що потім утруднює і погіршує якість росту найпростіших. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення середовища шляхом введення до його складу додаткових компонентів, що забезпечить можливість використання його для транспортування зразків для дослідження, покращення діагностичних властивостей середовища. 12 мл 100 мл 300мл 7мл 500000ОД 15мл 7мл UA (11) 56406 (13) U 0,05мл. (19) дефібрилізована плазма донорської людської крові бульйон з бичачих сердець розчин Рінгера 15% розчин тіосечовини пеніцилін 10% розчин харчового желатину 10% розчин неконсервованої гемолізованої еритроцитарної маси донорської людської крові 5% розчин харчового зеленого барвника Е 102 3 Поставлена задача вирішується тим, що у середовищі, яке містить дефібрінізовану плазму донорської людської крові, бульйон з бичачих сердець, розчин Рінгера, розчин тіосечовини та антибіотик новим є те, що як антибіотик середовище містить пеніцилін, та додатково - 10% розчин харчового желатину, 10% розчин неконсервованої гемолізованої еритроцитарної маси донорської людської крові та 5% розчин харчового зеленого барвника Е 102 при такому співвідношенні компонентів: дефібрілізована плазма донорської людської крові 12мл бульйон з бичачих сердець 100мл розчин Рінгера 300мл 15% розчин тіосечовини 7мл пеніцилін 500000 ОД 10% розчин харчового желатину 15мл 10% розчин неконсервованої гемолізованої еритроцитарної маси донорської людської крові 7мл 5% розчин харчового зеленого барвника Е 102 0,05мл. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Введення до складу середовища 10 % розчину харчового желатину дозволяє підвищити осмотичну щільність рідини до 430±2,0 і загальна щільність складає 1009±1,0, яка біологічно близька до щільності сечі людини. Такі умови дозволяють добре зберігатися найпростішим у даному середовищі. Для покращення трофічних (харчувальних) властивостей для найпростіших в середовище, що заявляється, додається 10% розчин гемолізованої еритроцитарної маси донорської крові людини. Оскільки еритроцити людини вміщують велику кількість протеїнів, мікроелементів і гемоглобіну, і при гемолізі ці елементи знаходяться у водному розчині, вони добре доступні для поглинання найпростішими. Крім цього, в розчині гемолізованих еритроцитів людини міститься менш специфічних гуморальних антигенів і антитіл, які можуть гальмувати зростання найпростіших в умовах in vitro. Вищезазначені компоненти, які вводяться до середовища згідно вказаної пропорції, дозволяють створити білкову рідину, кислотний показник якої знаходиться в межах 5,0-5,5, що також наближено до біологічних рідин урогенітального тракту людини. Пеніцилін, на відміну від стрептоміцину, більш стійкий до руйнування при введенні його до бактеріологічних середовищ, володіє широким спектром дії відносно пригнічення патогенної і сапрофітної мікрофлори, яка попадає одночасно з урогенітального тракту при заборі матеріалу у хворого. Нетоксичний харчовий барвник марки Е 102 застосовують для того, щоб медпрацівник, який виконує забирання діагностичного матеріалу від хворого (в лікарні), відрізняв транспортне середовище від інших пробірок з середовищами (наприклад, такі ж пробірки з 0,9% фізіологічним розчином), а також для лаборанта баклабораторії, який проводить пересівання з цього середовища на 56406 4 постійне для остаточного зростання і виділення найпростіших - "СКМ-1". Все це дозволяє добре зберігатись матеріалу, який підлягає подальшому дослідженню (виділення з урогенітального тракту жінок та чоловіків), в умовах лабораторії. Найпростіші - вагінальні трихомонади, їх цистформи, а також амеби при транспортуванні в даному середовищі не втрачають своїх біологічних властивостей, не гинуть і добре зберігаються, після чого їх в лабораторії помішують в пробірки з вже готовим середовищем "СКМ-1" для розмноження, підрахування та діагностики. Приготування такого середовища рутинним методом можливе в будь-якій бактеріологічній лабораторії. Середовище готують таким чином. Бульйон з бичачих сердець готують таким чином. Свіжі яловичі серця очищують від жиру, плівок та сухожилків. Пропускають через м'ясорубку, складають отриману масу у емальовану каструлю та заливають водою у співвідношенні 1:1. Залишають на 12 годин при кімнатній температурі, потім кладуть до автоклаву з температурою 100°С, тиск 0,2-0,5 атмосфер на годину. Автоклавована маса після відстоювання фільтрується через мілке сито, отриманий бульйон розливають до стерильних флаконів по 400мл, які потім стерилізуються в автоклаві на протязі 45 хвилин при тиску 1 атмосфера. Флакони можна зберігати у холодильнику на протязі року. В стерильний флакон ємністю 500мл додають 100мл бульйону з бичачих сердець, при помішуванні додають 300мл розчину Рингера, 12мл дефібрінізованої плазми донорської людської крові, 15мл розчину желатину 10%, 7мл – 10% розчину неконсервованої гемолізованої еритроцитарної маси донорської людської крові. До готової суміші, після повного розчинення усіх вищезазначених складових, обережно невеликими краплями при постійному перемішуванні суміші, додають 7мл – 15% тіосечовини. Далі суміш помішують до термостату з постійною температурою 36,5±1,0°С на 4 години. Після цього до суміші додають 1 флакон пеніциліну 500000 ОД і повільно струшують суміш до повного розчинення кристалів антибіотика. Після розчинення пеніциліну в готову суміш останнім додають харчовий 5% водний розчин зеленого барвнику в об'ємі 0,05мл до утворення готового середовища смарагдово-зеленого кольору. При правильному приготуванні транспортного середовища, осаду та пластівців у розчині не повинно утворюватись. Використовується транспортне середовище відразу ж після приготування. Для цього його розливають по стерильним пробіркам в об'ємі по 23мл, зверху пробірку закривають ватно-марлевою пробкою і видають в лікувальні заклади. Матеріал, що досліджується, з статевих органів (піхва, уретра), або з секреторних органів (сеча, секрет передміхурової залози у чоловіків) розчинюють у 5 56406 пробірці з середовищем та транспортують до лабораторії. В лабораторії з пробірки з транспортним середовищем лаборант-бактеріолог за допомогою петлі Пастера отримує 0,5мл зависі і розміщує її в готовому середовищі СКМ-1 під вазелінову пробку, розчиняючи частину матеріалу так, щоб не попадало повітря, для подальшого росту найпростіших. Пересіяний матеріал від хворого в пробірці з СКМ-1 маркують та залишають на доростання у термостаті з температурою 36,5±1,0°С на 5-10 діб. Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 6 Умови зберігання: флакон з готовим середовищем, або середовище, розлите по пробірках по 2-3мл і закрите стерильною пробкою, зберігаються у холодильнику при температурі 4°С. У флаконі середовище зберігається 25-30 діб, у пробірках - до 2 діб. Пробірки з транспортним середовищем доправляють злабораторії до лікувального закладу у звичайних умовах - вертикально в штативі, уникаючи надлишкового струшування, перегрівання та перевертання. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601