Спосіб кількісного визначення лецитину

Спосіб КІЛЬКІСНОГО визначення лецитину в Винахід відноситься до фізико-хімічних методів аналізу, а саме, до КІЛЬКІСНОГО визначення лецитину і може бути застосований в косметичній промисловості, в медицині, в харчовій промисловості, де лецетин використовують як емульгатор, при виробництві труб та прокату, де лецитин використовують як антикорозійну добавку до мастила Відомий спосіб КІЛЬКІСНОГО визначення лецитину за допомогою хроматографії [Кейтс Дж Техника липидологии М Мир, 1975, 322с], який включає виділення суми фосфоліпідів із рослинної сировини у вигляді хлороформного розчину, випарування розчинника у струмі азоту, проведення повного гідролізу лецитину метанольним розчином НСІ Далі визначення лецитину проводять по залишку лецитина після гідролізу - холіну, розчиняють останній в ацетоні і фотометрують відносно холостого розчину при X = 526нм Недоліками цього способу є використання токсичних, летких та коштовних органічних розчинників (хлороформ, метанол), складність та довготривалість (240 хвилин) аналізу, неможливість прямого фотометричного визначення лецитину, багатостадійність аналізу Відомий також кондуктометричний спосіб [А с № 1800348 (СССР) от 06 12 90, опубликовано 07 03 93 В И Вакарюк, Л Л Димитрова, М К Волога, И И Берил Способ измерения концентрациии фосфатидов ] КІЛЬКІСНОГО визначення фосфатидів в соняшниковій олії, який включає стадії аналізу відбір проби, пробопідготовку до кондуктометричних вимірювань, вимір питомої електро рослинних масляних концентратах за допомогою 12-молібденофосфорноі гетерополікислоти, який відрізняється тим, що рослинний масляний концентрат спочатку екстрагують ацетоном, далі ведуть екстракцію етиловим спиртом з подальшим титруванням отриманого розчину спиртовим розчином 12-молібденофосфорноі гетерополікислоти з полярографічною індикацією точки еквівалентності провідності олії і розрахунок вмісту фосфатидів в олії в залежності від температури в досліджуваній пробі Недоліками цього способу є складність та довготривалість пробопідготовки, наявність значних відхилень при вимірюванні опору олії в залежності від молекулярно-міцелярного стану фосфатидів при даній температурі та можливої присутності неорганічних ІОНІВ, ЯКІ мають високу рухомість і можуть суттєво знижувати опір досліджуваної проби Найбільш близьким за технічною суттю до винаходу, що заявляється, є спосіб гравіметричного визначення суми фосфатидів з умовним перерахуванням на вміст лецитіну через аналітичну форму - жовтий осад амонійної солі 12молібденофосфорної гетерополікислоти [Гютюнников Б Н Химия жиров М Пищевая промышленность, 1966 607с] Спосіб полягає втому, що наважку жиру змішують з оксидом магнію, розкладають в муфелі 1 5 - 2 0 хвилин при 250 300°С, залишки прожарюють в муфелі протягом години при 800 - 900°С, осад розчиняють сумішшю НІЧОз та H2SO4, додають розчин молібденовокислого амонію і залишають на 1 - 2 години для осадження осаду, який відфільтровують, висушують та зважують Вміст лецитіна розраховують за формулою х = — — ! , де а - вага осаду, г, Р Р - наважка жиру, 36,523 - коефіцієнт перерахунку ваги отриманого осаду на лецитін наданого складу До недоліків способу-прототипу слід віднести 00 ю (О ю 56548 багатостадійність процесу та його складність, довготривалість аналізу (240 - 270 хвилин), та низьку точність визначення Задачею винаходу є розробка прямого, спрощеного та експресного способу КІЛЬКІСНОГО визначення лецитину шляхом утворення малорозчинної сполуки з 12-молібденофосфорною гетерополікислотою Задача вирішується тим, що в відомому способі КІЛЬКІСНОГО визначення лецитину за допомогою 12-молібденофосфорноі гетерополікислоти, згідно з винаходом, спочатку рослинний масляний концентрат екстрагують ацетоном, далі ведуть екстракцію етиловим спиртом з подальшим титруванням отриманого розчину спиртовим розчином 12-молібденофосфорноі гетерополікислоти (ГПК) з полярографічною індикацією точки еквівалентності Амперометричне титрування базується на реакції взаємодії між лецитіном та гетерополіаніоном 12-молібденофосфорноі ГГЖ з утворенням малорозчинної сполуки До складу молекули лецитіну входить залишок аміноспирту (холіну), атом азоту якого має добре виявлені протоноакцепторні властивості Тому в кислому середовищі молекула лецитину протонується, перетворюючись в стійку катіонну форму Реакція взаємодії між гетерополіанюном РМ012О403 і трьома молекулами лецитіну проходить стехіометричне в середовищі рН = 4,0 - 4,5 гетерополіанюна Приклад виконання засобу Наважку фосфатидного концентрату масою 1,5 - 2г декілька разів промивають ацетоном, доки все масло не перейде в розчин Осад висушують 0,7808г сухого осаду розчиняють в етиловому спирті 20 хвилин при підігріванні до 40°С Кефалін, який не розчинився, відфільтровують, а розчин переносять в колбу на 50мл і доводять до мітки спиртом До 5мл отриманого розчину додають 5мл ізопропілового спирту, 1мл 0,1 н Na2SO4 та 2,5мл 0,8н НСІ Розчин переносять в електрохімічну комірку з системою електродів (індикаторний -торцевий графітовий електрод з діаметром робочої поверхні 5,0мм та швидкістю оберту ббОоб/хв, електрод порівняння - насичений каломельний полуелемент), задають напругу +0.15В і через 60 секунд фіксують величину "нульового струму" В електрохімічну комірку додають титрант - 10 2моль/л спиртовий розчин 12молібдснофосфорної гетерополікислоти порціями по 0,25мл У межах точки еквівалентності титрант додають порціями по 0,10мл Фіксують величину сили дифузійного струму через 10 секунд після додавання титранту Амперометричне титрування закінчують після різкого збільшення сили дифузійного струму Об'єм титранту, який був використаний на титрування, визначають графічно на кривій амперометричного титрування (фіг) Масу лецитіну розраховують за формулою 3Kat+ + РМ012О403 -» (Kat)3PMoi204o і При катодній поляризації в інтервалі від +0.5В до -0,5В лецитін є неелектроактивним, в той час як гетерополіанюн 12молібденофосфорної гетерополікислоти на фоні 0,1 М розчину сульфата натрію дає чітку хвилю електровідновлення двох атомів молібдена РМоі 2 О 40 3 + 2е -» РМо2Моіо04о5 Величина сили дифузійного струму даного електродного процесу залежить ЛІНІЙНО ВІД концентрації деполяризатора до 1х105моль/л [Ткач В І Гетерополіанюни як аналітичні реагенти на азотвміщуючі органічні речовини Дніпропетровськ, ДДУ, 1995, 196с] Виходячи з того, що між речовиною, яка визначається, і титрантом проходить реакція з утворенням малорозчинної сполуки, а титрант є електроактивною речовиною, можливе амперометричне титрування лецитіну спиртовим розчином ГПК з індикацією точки еквівалентності по силі дифузійного струму електровідновлення 3 -Cm-VM1,fle 1000 З - КІЛЬКІСТЬ моль лецитіну, які взаємодіють з 1 моль ГПК, Cm - молярна концентрація розчину ГПК, яка дорівнює 10 2 моль/л, МІ - молярна маса лецитіна, яка дорівнює 787 г/моль, V - об'єм ГПК, який був використаний на титрування, мл Кількісне визначення лецитіну методом амперометричного титрування відрізняється достатньою чутливістю (5 х 10 4 моль/л), селективністю та експресністю (час, який використовується на аналіз, не перевищує 10 хвилин) В таблиці наведені метрологічні характеристики аналізу лецитіну методом амперометричного титрування m = Таблиця Метрологічні характеристики аналізу лецитіну методом амперметричного титрування № п/п 1 2 3 4 5 6 7 то лецитіну, грам 0,0295 0,0295 0,0295 0,0295 0,0295 0,0295 0,0295 Маса лецитіну отримана, грам m 0,0280 0,0286 0,0295 0,0286 0,0302 0,0295 0,0295 m середня m-mcep Метрологічні характеристики 0,0291 0,0011 0,0005 0,0004 0,0005 0,0011 0,0004 0,0004 Sr = 0,0055 (х+ 5) = 0,0291 +0,00016 5 56548 6 Як видно з таблиці, спосіб КІЛЬКІСНОГО визнаСпосіб КІЛЬКІСНОГО визначення лецитіну може чення лецитіну в рослинних масляних концентрабути використаний в косметичній та харчовій протах, який пропонується, дозволяє підвищити точмисловості, в медицині, в виробництві труб та проністьта відтворюваність результатів аналізу кату as Фіг. Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24