Спосіб кількісного визначення цефтриаксону

Спосіб КІЛЬКІСНОГО визначення цефтриаксону, що включає приготування проби для аналізу, взаємодію її з ХІМІЧНИМ реагентом у розчині, вимірювання інтенсивності флуоресценції розчину, який відрізняється тим, що пробу піддають взаємодії із стандартним розчином хлориду європію при рН 4,5-6,0, у присутності цетилпіридинію хлориду та вимірюють інтенсивність флуоресценції європію (III), за величиною якої визначають концентрацію цефтриаксону Винахід відноситься до аналізу матеріалів, а саме до флуоресцентного визначення лікарського препарату - цефтриаксону (Цеф) (див Машковский М Д Лекарственные средства, Харьков, Торсинг, 1998, т 2, с 251) Відомий спосіб визначення цефтриаксону у сироватці крові за допомогою рідинної хроматографії високого тиску з спектрофотометричним детектуванням (див S Bompadre, Ferrante L , Leone L, 1998, v 812, №1 -2, p 191 -196) Спосіб передбачає розчинення сироватки крові за допомогою дистильованої води (у 2 рази) і введення її у хроматографічну колонку з послідуючою обробкою промиваючим розчином (5% метанол у 0,01 М фосфатному буфері) для елімшірування компонентів біологічної матриці Далі пробу хроматографують на колонці сумішшю ацетонітрілу, метанолу та 0,01 М фосфорного буферу Використовують ультрафіолетову детекцію цефтриаксону при Я,=265нм Чутливість способу визначення - 2,0мкг/мл гою 0,5М НСІ, додають 1,0мл Na-боратного буферу з рН 9,3 і 4,0мл ацетону, перемішують і доводять водою до об'єму 10мл, далі проводять флуоресцентне визначення цефтриаксону при А.3будж-365нм, Я,фл=395 - 520нм Дане рішення обрано прототипом Прототип збігається із винаходом , що заявляється утому, що містить такі операції - приготування проби, - взаємодія проби з ХІМІЧНИМ реагентом у розчині, - вимірювання інтенсивності люмінесценції розчину Але спосіб за прототипом забезпечує чутливість визначення препарату - 2мкг/мл У способі за прототипом вживають молекулярну люмінесценцію органічного ліганда - цефтриаксону Молярний коефіцієнт поглинання цефтриаксону при Я,=365нм, невеликий s=1,2 - 103, у зв'язку з чим відсутнє ефективне поглинання енергії збудження , наслідком чого є низька інтенсивність флуоресценції В основу винаходу поставлено задачу створити спосіб КІЛЬКІСНОГО визначення цефтриаксону, у якому за рахунок заміни реагентів забезпечується підвищення чутливості визначення Поставлену задачу вирішено у способі КІЛЬКІСНОГО визначення цефтриаксону, який включає приготування проби для аналізу, взаємодію її з ХІМІЧНИМ реагентом у розчині, вимірювання інтенсивності флуоресценції розчину тим, що пробу піддають взаємодії з стандартним розчином хлориду європію при рН 4,5 - 6,0 у присутності цетілпірідшію хлориду (ЦПСІ) з подальшим вимі Найбільш близьким до способу , що заявляється, є спектрофлуориметричне визначення цефтриаксону у біологічних сполуках (див Yang Jinghe, Zhou Guangjun, Jie Nianqin, Han Ronhang, Lin Cunguo, Hu Jingtian Anal Chim Acta - 1996, V325, №3 P 195-200) Спосіб передбачає спочатку хімічну обробку цефтриаксону для переведення його у флуоресцируючу сполуку Визначення здійснюють наступним чином До 1мл проби додають Змл 1М NaOH, суміш розводять до об'єму 25мл і нагрівають ЗО хвилин при 100°С По охолодженні в аліквотній частині розчину установлюють рН«7,0 за допомо о (О ю 56022 рюванням інтенсивності флуоресценції Новим у заявляемому винаході є використання сенсибілізованої флуоресценції юну європію, посиленої у присутності поверхнево-активної речовини - цетілпірідшію хлориду Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються і досягнутим результатом можна пояснити наступним чином Підвищення чутливості стало можливим завдяки використанню сенсибілізації флуоресценції юну європію (111) внаслідок внутрішньомолекулярної передачі енергії збудження цефтриаксону Цефтриаксон має у ультрафіолетовій зоні спектру смугу поглинання Я,тах=240нм Високий молекулярний коефіцієнт поглинання s=48700 обумовлює ефективне поглинання світлової енергії лігандом Триплетний рівень ліганда складає 20500см 1 Мабуть, уданому випадку виникає передача енергії збудження на енергетичний рівень європію 5 DI(19000CM 1) з подальшою безвипромінювальною дезактивацією до першого збудженого стану 5D0(17300см 1) Це усе надає можливості досягнути найвищої інтенсивності флуоресценції на відміну від прототипу Використання поверхнево-активної речовини цетілпірідшію хлориду сприяє дегідратації комплексу, що веде до збільшення інтенсивності флуоресценції Взаємодія цефтриаксону з європієм відбувається при рН 2,0 - 9,5, максимум флуоресценції комплексу спостерігається при рН 4,5 - 6,0 (Фіг 1) В пропонованому способі для створення рН розчину (4,5 - 6,0) використовується уротропін (0,1мл 4%-го розчину) Інтенсивність флуоресценції європію у розчині оптимальна при ВМІСТІ цетілпірідшію хлориду 0,5мл ( 1 - Ю 2 мол/л) (Фіг 2) Спосіб здійснюється таким чином готують пробу для аналізу (наважку препарату розчиняють у дистильованій воді при 30°С, охолоджують), яку піддають взаємодії із стандартним розчином хлориду європію при рН 4,5 - 6,0 у присутності цетілпірідінію хлориду з подальшим вимірюванням інтенсивності флуоресценції європію, по величині якої визначають концентрацію цефтриаксону Приклад Наважку лікарського препарату "Цефтриаксон" 50мг розчиняють у 50мл дистильованої води при 30°С, розчин охолоджують і доводять об'єм до МІТКИ Визначення проводять за методом добавок (див Васильєв В П Аналитическая химия, Москва, Высшая школа, 1989, т 2, с 8) Для цього у три пробірки вміщують по 0,1мл приготовленого аналізованого розчину, у дві пробірки додають 0,2мл та 0,3мл робочого розчину цефтриаксону з концентрацією 1мг/мл У кожну пробірку додають по 0,1 мл розчину хлориду європію з концентрацією 1 - 10 моль/л, додають по 0,5мл водного розчину 1-10 2 моль/л цетілпірідшію хлориду, 0,1мл 4% розчину уротропіну і доводять об'єм до 10мл водою Паралельно готують розчин холостої проби, яка містить усі компоненти, крім цефтриаксону Проби перемішують, вимірюють інтенсивність флуоресценції європію при Я,=612нм Чутливість способу, яка визначена за допомогою стандартних розчинів цефтриаксону, складає 0,02мкг/мл Точність І достовірність визначення цефтриаксону у розчині перевірена шляхом статистичної обробки результатів визначення При п=5, Р=0,95 величина відносного стандартного відхилення 0,035 - 0,055 Таким чином, спосіб дозволяє підвищити чутливість визначення цефтриаксону в 10 разів ФІГ.1 Фіг.2 Підписано до друку 05 05 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24