Спосіб визначення рівня поствакцинального імунітету до грипу

Спосіб визначення рівня поствакцинального імунітету до грипу, що включає аналіз сироваткових антитіл в реакції гальмування гемаглютинації з вірусним діагностикумом, який відрізняється тим, що як вірусний діагностикум застосовують шактивовану вакцину з актуальними сезонними грипозними антигенами Винахід відноситься до медицини, а саме, до досліджень або аналізу матеріалів особливими способами, переважно біологічних, здебільшого периферійної крові, та може бути використаним в епідеміологічних дослідженнях для визначення рівня поствакцинального імунітету або імуногенності вакцин Відомий спосіб визначення імунологічної ефективності вакцинації, у ВІДПОВІДНОСТІ З ЯКИМ кожну з парних сироваток, взятих до і після вакцинації, досліджують з декількома грипозними діагностикумами, що містять ЦІЛІ вірюни з особливим антигенним складом [1,2] Висновок про якість вакцинації, зокрема про імуногенні властивості вакцини, здійснюють на підставі оцінки відеотеку сероконверсм (підвищення титру антитіл до вірусу грипу в реакції гальмування гемаглютинації у другій з парних сироваток не менш ніж у 4 рази) та кратності підвищення середньоигеометричного титру антитіл у популяції вакцинованих Як свідчать результати цих досліджень КІЛЬКІСТЬ сероконверсій до трьох антигенів вирусів грипу серед вакцинованих трьохкомпонентною вакциною є практично однако во ю[3] Рівень техніки, що досліджений заявником, інформує про відсутність у джерелах патентної та науково-технічної інформації відомостей про використання інших «об'єктів того ж призначення», що дозволяє вважати відоме рішення найбільш близьким В основу винаходу поставлена задача розробити такий спосіб визначення рівня поствакцинального імунітету до грипу, який шляхом оптимізацм вибору вірусного діагностикуму для реакції гальмування гемаглютинації, підвищує ефективність і економічність виконання та спрощує інтерпретацію результатів при використанні Означений вище технічний результат досягається тим, що в способі визначення рівня поствакцинального імунітету до грипу, що містить аналіз сироваткових антитіл в реакції гальмування гемаглютинації, згідно з винаходом, як вірусний діагностикум застосовують шактивовану грипозну вакцину з актуальними сезонними грипозними антигенами Використання шактивованої вакцини з актуальними сезонними грипозними антигенами є найбільш оптимальним у вирішенні задачи, бо значущим показником виступає титр антитіл до вакцини, як єдиного діагностикума, для оцінки популяційного імунітету до грипу напередодні холодного сезону року, або у парних сироватках (до вакцинації та через 21-28 днів після неї) для визначення імунологічної ефективності вакцинації Причинно-слідчий зв'язок сукупності істотних ВІДМІННИХ ознак, що заявляються, з вищезгаданим технічним результатом полягає в наступному Інактивована грипозна вакцина обов'язково має у складі всі протективні (поверхневі) антигени До причини, що стримує досягнення очікуваного технічного результату, належить те, що виконання відомого способу не економічно, а інтерпретація його результатів є складною і замало ефективною для оцінки епідемічної ситуації Це зумовлене тим, що відомий спосіб рішення задачі доцільно використовувати перш за все для серологічної діагностики грипу, коли треба визначити, який саме серотип вірусу грипу спричинив хворобу, але не для оцінки популяційного імунітету (О 1 ю 57446 робочої дози грипозного антигена, в даному випаактуальних штамів вірусу грипу, в тому числі гемадку, грипозної вакцини Для цього проводять реакглютиніни Наприклад, одна доза спліт-вакцини цію гемаглютинації, визначають титр гемаглютині"Флюарікс" (0,5мл) містить по 15мг кожного з 3-х ну вакцини, який сгановить 1 АО (аглютинуюча основних штамів A(H1N1), A(H3N2) і В Одним з одиниця) В реакції гальмування гемаглютинації найважливіших критеріїв імунологічної ефективновикористовують (за стандартною методикою) 4 АО сті вакцини є показник сероконверсм, тобто питов 0,1мл В експериментальних дослідженнях титр мої ваги вакцинованих осіб, у яких відбулося зросвакцини сягав 1 2560, тобто для виготовлення ротання титру антитіл не менш, ніж у 4 рази [4] бочої дози антигена вакцину потрібно було розвеВведення одночасно трьох антигенів з однаковою сти до 1 640 Для порівняння титри стандартних КІЛЬКІСТЮ кожного з компонентів призводить до грипозних діагностикумів становили від 1 128 до синхронного зростання титру антитіл до кожного з 1 160, ВІДПОВІДНО робочі дози - від 1 32 до 1 40 антигенів Згідно З проведеними нами паралельДля постановки основного дослідження готовлять ними дослідженнями, титр антитіл до вакцини у серії послідовних двукратних розведень сироваток 77,3% з 207 сироваток дорослих осіб, майже спів(з 1 10 до 1 1280) на ізотонічному розчині натрія падає з середньо геометричним титром (СГТ) анхлоріда в обсязі 0,1 мл До кожного розведення титіл до трьох діагностикумів, що містять окремі додають 0,1мл робочої дози антигена (4 АО) Пісштами грипу A(H1N1), A(H3N2) і В У 21,5% сироля контакт}' протягом 1 години додають по 0,2мл ваток титр антитіл до вакцини суттєво (в 4 рази) 1% суспензії еритроцитів Облік реакції виконують перевищує (СГТ) до окремих штамів і у 1,2% сировізуально через 40-45хв після осідання еритроциваток - навпаки, титр антитіл до вакцини суттєво тів у контролі нижчий, ніж СГТ до окремих штамів Отже, сукупність відокремлюючих ознак винаходу, що заявляється, є істотною, бо має причинно-наслідковий зв'язок з очікуваним технічним результатом, а саме, підвищення економічності реакції та спрощення інтерпретації результату імунологічного дослідження з метою оцінки рівня поствакцинального колективного імунітету ВІДОМОСТІ, ЩО підтверджують можливість здійснення способу визначення рівня поставакцинального імунітет}' до грипу, що заявляється, полягають у наступному Для здійснення способу залучають полістиролові планшети з лунками для реакції гемаглютинації мікро- або макрометодом, багатоканальні автоматичні піпетки, СВІЖІ курячі еритроцити Виконують забір крові у хворих (до 3-4мл) в суху пробірку Після згортання крові відсепаровують сироватку Перед дослідження сироватка має зберігатися у замороженому вигляді Для використання и розводять у співвідношенні 1 10 ІЗОТОНІЧНИМ розчином і прогрівають ЗОхв на водяній бані при 56-58°С, Виконання реакції гальмування гемаглютинації починають з виготовлення стандартної Доступність та мінімальний обсяг використаного антигенного матеріал}' (вакцина), мінімальний обсяг вивчаємого матеріалу, відсутність додаткової апаратури та обладнання підвищували оперативність, спрощували здійснення способу та підвищували його економічність при використанні для епідеміологічного нагляду за грипозною інфекцією Приклад 1 Перед проведенням чергової щорічної вакцинації проти грипу на підприємстві, співробітники якого були прищеплені по 2-3 рази у минулі роки, було вирішено визначити рівень сироваткових антитіл до актуальних грипозних штамів з метою визначення тактики подальшої імунопрофілактики на підприємстві У серпні-місяці, через 10 МІСЯЦІВ після попередньої вакцинації, у 207 осіб була взята кров для визначення рівня антитіл за допомогою РГГА в паралельному дослідженні з інактивованою спліт-вакциною "Флюарикс" і трьома стандартними грипозними діагностикумами A(H1N1) штам Леншград\325\88, A(H3N2) штам Сидней 05\97, В (Леншград\90\86М) Результати визначення титру антитіл у log 2 та зворотніх СГТ - в таблиці 1 Таблиця 1 Рівень антигемаглютинінових антитіл до окремих антигенів грипу та до вакцини в сироватках щеплених та нещеплених осіб Прищеплені п=207 Не прищеплені п=89 log 2 СГТ log 2 СГТ A(H1N1) 7Д 137,2 4,32 18,63 Як видно з табл 1 зворотній середньогеометричний титр (СГТ) антитіл до вакцини приблизно на 0,8 log або у 1,75 рази більше, ніж до окремих антигенів, як у щеплених при високих титрах, так і у не щеплених при низьких титрах антитіл Проте ця різниця не є достовірною, тому що в РГГА достовірною вважається різниця у 2 log 2, тобто в 4 рази стосовно СГТ КІЛЬКІСТЬ осіб, у яких титр антитіл до вакцини вищий за титр антитіл до окремих антигенів, складає від 18% у не щеплених до A(H3N2) 7,06 133,4 5,08 25,81 В 7,08 135,3 4,71 22,16 Вакцина 7,9 238,9 5,28 37,8 21,5% у щеплених На аналіз майже 300 сироваток була використана всього 1 доза (0,5мл) вакцини Обсяг роботи лаборантів зменшився утричі В результаті були визначено колективний імунітет серед прищеплених в порівнянні з не щепленими Приклад 2 Для визначення імунологічної ефективності вакцини було визначено показник сероконверем - питомої ваги вакцинованих осіб, у яких після вакцинації рівень антитіл збільшився не менш ніж у 4 рази, або на 2 log Окрім цього показ 57446 ніше не вакцинованіх осіб забирали 2 рази до ника, який для якісної вакцини згідно з критеріями вакцинації та через 14-21 день після неї РТГА Європейського Союзу, має складати не менш 40%, ставили в усіх парних сироватках одночасно Ревизначали ступінь сероконверем - кратність збільзультати в таблиці 2 шення СГТ антитіл після щеплення Кров у 89 раТаблиця 2 Показники імунологічної ефективності вакцинації ПОКАЗНИКИ Критерії ЄС Л Вакцина (ІІ 89) Частота сероконверем (%) более 40% 59,5% Як свідчать дані таблиці 2, імунологічна ефективність застосованої вакцини суттєво перевищує критерії ЄС до якісної вакцини Таким чином, після проведення лабораторного випробування запропонованого способу визначення рівня поставакцинального імунітет}' до грипу, заявником встановлено, що заявлений спосіб може бути широко використаний в лабораторній практиці санітарно-епідеміологічної служби, для заявляемого об'єкту у тому вигляді, як він схарактеризований у незалежному пункті формули, підтверджена можливість його здійснення за допомогою вказаних у заявці або відомих до дати пріоритету діагностичних приладів, спосіб, що втілює заявляємий винахід при здійсненні, забезпечує досягнення позитивного результату, а саме підвищення економічності та спрощення інтерпретації результату імунологічного дослідження по відношенню до прототипу з можливістю його використання для епідеміологічного нагляду за грипозною інфекцією та ефективністю вакцинації Ступінь сероконверем 2,5 54 «промислова придатність», «новизна», «винахідницький рівень» і може бути кваліфікований винаходом України Джерела інформації 1 Методические рекомендации по изучению коллективного иммунитета в рамках эпидемиологического надзора за этой инфекцией в стране -ЛД984-12е 2 Наказ №30 МОЗ України від 09 02 1998 "Нро заходи щодо профілактики та боротьби з грипом та гострими респіраторними захворюваннями в Україні" 3 Влияние кратности иммунизации детей инактивированной гриппозной вакциной на иммунный ответ и эффективность защиты \А В Слободнюк, В В Романенко, О С Утницкая, Т М Мотус, А В Переверзев \\ Журн микробная - 2002 №4 - С 36-39 4 Commission of European Communities Harmonization of requirements for influenza vaccines// EEC document 111/3188/*91-EN Отже, розроблений винахід відповідає умовам Комп'ютерна верстка О Кураєв Підписано до друку 05 07 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна