Спосіб диференційної діагностики келоїдного і гіпертрофічного рубців в післяопераційному періоді

Спосіб диференційної діагностики келоїдного і гіпертрофічного рубців в післяопераційному періоді, що включає заливку шматочка рубця в парафін і приготування гістологічних парафінових зрізів з 3 гани 1-4 бали і лектином золотого дощу - 1-4 бали діагностують розвиток гіпертрофічного рубця, при значенні інтенсивності забарвлення лектином карагани 1-2 бали і лектином золотого дощу - 1-2 бали діагностують розвиток келоїдного рубця. Між сукупністю суттєвих ознак запропонованого способу та очікуваним технічним результатом простежується наступний причинно-слідчий зв'язок: використання забарвлення лектинами карагани і золотого дощу, кон'югованих з пероксидазою хрону гістологічних зрізів біоптатів патологічного рубця, що формується та подальша оцінка гістотопографії глікополімерів і інтенсивності забарвлення клітин епідермісу і дерми, дозволяє визначити вид рубця, що розвивається, в ранні строки після хірургічного втручання або інших пошкоджень шкірних покривів, а також розпочати його своєчасне специфічне лікування. Спосіб, що заявляється, диференційної діагностики келоїдного і гіпертрофічного рубців в післяопераційному періоді застосований у лікуванні 40 хворих. Вік хворих становив від 30 до 70 років. Ускладнень не було. Спосіб полягає в наступному. Біоптати рубців через два тижні після оперативного втручання або інших пошкоджень фіксують 10%-м нейтральним формаліном не менше 12 годин; потім проводиться проводка в спиртах зростаючої концентрації 70% - 20 хвил., 80% - 20 хвил., 96% І - 15 хвил. і 96% II - 15 хвил.; потім проводка по ксилолам - І, II ксилол по 5 хвил. і III ксилол - 10 хвил., після чого проводиться заливка в парафін. Зрізи виконуються на мікротомі для світлової мікроскопії товщиною 5-7 мкм. Парафінові зрізи наносяться на скельця без овальбуміну і висушуються в термостаті упродовж 48-72 годин при температурі 42°-45°С. Депарафінізація здійснюється в двох ксилолах, після чого проводиться дегідратація в спиртах. Потім препарати переносяться в забуферений ізотонічний розчин ЗІР, 8 г NaCL, 0,2 г KCL, 1 г Na2PO4×12H2O і 0,1 M Na2PO4 при рН7,4. Кон'югат лектину з пероксидазою розводять ЗІР і наносять на зрізи при кімнатній температурі протягом 45-60 хвил. Розведення здійснювалось в концентрації, рекомендованій НВК "Лектинотест", згідно паспорта лектинів. Після цього препарати, поміщені в темну камеру, оброблюють тричі в ЗІР по 5 хвил., а потім в ЗІР з 0,005%-м 3,3'-діамінобензидином і 0,015%-м Н2О2 упродовж 0,5-5 хвил. Потім препарати промивають дистильованою водою, проводять дегідратацію в спиртах зростаючої концентрації і заключають в канадський бальзам. Виявляють різну гістотопографію та оцінюють кількість глікополімерів з кінцевою вуглеводною детермінантою N-ацетил-D-галактозаміну - рецептори лектину карагани і альфа-L-фукози - рецептори лектину золотого дощу в клітинах і позаклітинних структурах епідермісу і дерми майбутнього гіпертрофічного або келоїдного рубця. Далі визначають величину інтенсивності забарвлення клітин епідермісу і дерми патологічного рубця. Інтенсивність забарвлення лектинами позначають в балах. 57688 4 Як відсутню - 0 балів, слабку - 1 бал, помірну 2 бали, сильну - 3 бали та дуже сильну - 4 бали. При величині інтенсивності забарвлення лектином карагани 1-4 бали та величині інтенсивності забарвлення лектином золотого дощу 1-4 бали діагностують розвиток гіпертрофічного рубця. При величині інтенсивності забарвлення лектином карагани 1-2 бали і величині інтенсивності забарвлення лектином золотого дощу 1-2 бали діагностують розвиток келоїдного рубця. Аналіз одержаних результатів показав, що в майбутньому колоїдному рубці рецепторів лектину карагани дуже мало тільки в клітинах базального і рогового шарів. Волокна дерми також бідні бензидиновою міткою. Порівняно багато N-ацетил-Dгалактозамінокон'югатів експресують тільки молоді фібробласти зони росту. У гіпертрофічному рубці, що дозріває, клітини епідермісу багаті місцями зв'язування лектину карагани, особливо цитолема епітеліоцитiв базального і рогового шарів. В дермі сама велика кількість N-ацетил-D-галактозамінокон'югатів синтезується фібробластами. У келоїдному рубці, що формується, епідерміс бідний рецепторами лектину золотого дощу. Вони є в помітній кількості тільки в клітинах рогового шару. Дерма багата фукозокон'югатами, особливо клітини і волокна зони росту. Епідермоцити всіх шарів епідермісу гіпертрофічного рубця, що розвивається, експресують дуже багато місць зв'язування лектину золотого дощу. Також ними багаті всі компоненти дерми. В таблиці 1 наведені зміни гістотопографії і кількості рецепторів лектинів карагани і золотого дощу в епідермісі і дермі гіпертрофічного і келоїдного рубця, що формується, у осіб, які два тижні тому перенесли хірургічне втручання. Запропонований спосіб ілюструється наступними прикладами його виконання. Приклад 1. Хворий Ш., 1985 р.н., перебував на лікуванні в хірургічному відділенні. Через 2 тижні після хірургічного втручання хворому була проведена діагностика по запропонованому способу. Був досліджений лектиногістохімічним методом біоптат патологічного рубця, що формується. Величина інтенсивності забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином карагани склала 1-4 бали. Величина інтенсивності забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином золотого дощу була 1-4 бали. Аналіз одержаних результатів показав, що формується гіпертрофічний рубець. Хворому було призначено відповідне лікування. Приклад 2. Хворий Ф., 1947 р.н., перебував на лікуванні в хірургічному відділенні. Через два тижні після хірургічного втручання був досліджений лектиногістохімічним методом біоптат патологічного рубця, що формується. Величина інтенсивності забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином карагани склала 1-2 балів. 5 57688 Величина інтенсивності забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином золотого дощу склала 1-2 балів. Аналіз одержаних результатів показав формування келоїдного рубця. Призначено відповідне лікування. Ускладнень не було. Наведені приклади підтверджують ефективність запропонованого способу. 6 Спосіб, що заявляється простий та більш інформативний, легко виконується в умовах патогістохімічної лабораторії. Дозволяє діагностувати гіпертрофічний або келоїдний рубець, що розвивається, через два тижні після хірургічного втручання або інших ушкоджень шкірних покривів, коли клінічно це зробити неможливо, також дає можливість використати його для раннього початку лікування гіпертрофічного або келоїдного рубця. Таблиця 1 Гіпертрофічний рубець Келоїдний рубець Лектин карага- Лектин золото- Лектин карага- Лектин золотони го дощу ни го дощу Епідерміс Клітини базального шару цитолема 4 4 0 0 цитоплазма 2 3 1 1 Клітини шиповатого шару цитолема 3 3 0 1 цитоплазма 1 1 0 0 Клітини зернистого шару цитолема 3 3 0 1 цитоплазма 1 1 0 0 Клітини рогового шару цитолема 4 4 1 2 цитоплазма 4 4 1 2 Дерма волокна 2 3 1 3 Клітини цитолема 3 4 2 3 цитоплазма 3 4 1 2 Назва структури Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601