Спосіб оцінки виду патологічного рубця, що формується в ранньому післяопераційному періоді

Спосіб оцінки виду патологічного рубця, що формується в ранньому післяопераційному періоді, який включає заливку шматочка рубця в парафін, приготування гістологічних зрізів та забарв 3 бульб картоплі і бузини чорної, кон'югованих з пероксидазою хрону, далі оцінюють гістотопографію глікополімерів та інтенсивність забарвлення клітин епідермісу і дерми, та при інтенсивності забарвлення лектином бульб картоплі 2-4 бали, а лектином бузини чорної 3-4 бали діагностують розвиток гіпертрофічного рубця, при інтенсивності забарвлення лектином бульб картоплі 1-2 бали і лектином бузини чорної 1-2 бали діагностують розвиток келоїдного рубця. Між сукупністю суттєвих ознак запропонованого способу та очікуваним технічним результатом простежується наступний причинно-слідчий зв'язок: використання забарвлення лектинами бульб картоплі і бузини чорної, кон'югованих з пероксидазою хрону гістологічних зрізів біоптатів патологічного рубця, що формується, та оцінка гістотопографії глікополімерів та інтенсивності забарвлення клітин епідермісу і дерми дозволяє оцінити вид рубця, що розвивається, наприклад, гіпертрофічний або келоїдний, в ранні строки після хірургічного втручання або інших ушкоджень шкірних покривів, а також розпочати його своєчасне специфічне лікування, тобто досягти очікуваного технічного результату. Спосіб заключається в наступному. Біоптати рубців через два тижні після оперативного втручання або інших ушкоджень фіксують 10%-м нейтральним формаліном не менш 12 годин; потім проводиться проводка в спиртах зростаючої концентрації 70% - 20 хвил., 80% - 20 хвил., 96% І - 15 хвил. і 96% II - 15 хвил.; потім проводка по ксилолам - І, II ксилол по 5 хвил. і III ксилол - 10 хвил., після чого проводиться заливка в парафін. Зрізи виконуються на мікротомі для світлової мікроскопії товщиною 5-7мкм. Парафінові зрізи наносяться на скельця без овальбуміну і висушуються в термостаті протягом 48-72 годин при температурі 42°-45°С. Депарафінізація здійснюється в двох ксилолах, після чого проводиться дегідратація в спиртах. Потім препарати переносяться в забуференний ізотонічний розчин ЗІР, 8г NaCL, 0,2г KCL, 1г Na2PO4x12 H2O і 0,1 M Na2PO4 при рН 7,4. Кон'югат лектину з пероксидазою хрону розводять ЗІР і наносять на зрізи при кімнатній температурі протягом 45-60 хвил. Розведення здійснювалось в концентрації, рекомендованій НВК «Лектинотест», згідно паспорта лектинів. Після цього препарати, поміщені в темну камеру, оброблюють тричі в ЗІР по 5 хвил., а потім в ЗІР з 0,005%-м 3,3'-діамінобензидином і 0,015%м Н2О2 протягом 0,5-5 хвил. Потім препарати промивають дистильованою водою, проводять дегідратацію в спиртах зростаючої концентрації і заключають в канадський бальзам. Виявляють різну гістотопографію та оцінюють кількість глікополімерів з кінцевою вуглеводною детермінантою N-ацетил-D-глюкозаміну - рецептори лектину бульб картоплі і сіалової кислоти – рецептори лектину бузини чорної в клітинах і позаклітинних структурах епідермісу і дерми майбутнього гіпертрофічного або келоїдного рубця. Далі оцінюють інтенсивність забарвлення клітин епідермісу і дерми. 54941 4 Інтенсивність забарвлення лектинами визначають в балах як відсутню – 0 балів, слабку - 1 бал, помірну - 2 бали і сильну - 3 бали та дуже сильну - 4 бали. При інтенсивності забарвлення лектином бульб картоплі 2-4 бали, а лектином бузини чорної 3-4 бали діагностують розвиток гіпертрофічного рубця, при інтенсивності забарвлення лектином бульб картоплі 1-2 бали і лектином бузини чорної 1-2 бали діагностують розвиток келоїдного рубця. У келоїдних рубцях епідермоцити синтезують помітну кількість біополімерів з кінцевими нередукованими залишками N-ацетил-D-глюкозаміну рецептори лектину бульб картоплі. Колагенові волокна різних зон дерми експресують різну кількість таких вуглеводних детермінант. Найбільш яскрава бензидинова мітка в зоні росту. У майбутньому гіпертрофічному рубці концентрація N-ацетил-D-глюкозамінокон'югатів мала, за виключенням цитолеми клітин базального шару. В дермі фібробласти накопичують дуже велику кількість таких біополімерів. Колагенові волокна бідні моносахаридними залишками N-ацетил-Dглюкозаміну. У формирующихся келоїдних рубцях сіалірованих глікополімерів - рецепторів лектину бузини чорної дуже мало, так як і в фібробластах субепідермального шару. Колагенові волокна бідні такими біополімерами. В гіпертрофічних рубцях, що розвиваються, епітеліоцити епідермісу експресують велику кількість сіалірованих глікополімерів, як і фібробласти дерми. Одночасно колагенові волокна багаті вуглеводними залишками сіалових кислот. У таблиці наведені зміни гістотопографії і кількості рецепторів лектинів бульб картоплі і бузини чорної в епідермісі і дермі гіпертрофічного і келоїдного рубця, що формується, у осіб, які два тижні тому перенесли хірургічне втручання. Запропонований спосіб ілюструється наступними прикладами його виконання. Приклад 1 Хворий П., 1979р.н., перебував на лікуванні в хірургічному відділенні. Через 2 тижні після хірургічного втручання був досліджений лектиногістохімічним методом біоптат патологічного рубця, що формується. Інтенсивність забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином бульб картоплі 2-4 бали. Інтенсивність забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином бузини чорної 3-4 бали. Аналіз одержаних результатів показав, що формується гіпертрофічний рубець. Призначено відповідне лікування. Приклад 2 Хворий P., 43p., перебував на лікуванні в хірургічному відділенні. Через два тижні після хірургічного втручання був досліджений лектиногістохімічним методом біоптат патологічного рубця, що формується. Інтенсивність забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином бульб картоплі 1-2 бали. Інтенсивність забарвлення клітин епідермісу і дерми лектином бузини чорної 1-2 бали. 5 54941 Аналіз одержаних результатів показав формування келоїдного рубця. Призначено відповідне лікування. Наведені приклади підтверджують ефективність запропонованого способу. Заявляємий спосіб прогнозування розвитку келоїдного і гіпертрофічного рубців у післяопераційному періоді застосований у лікуванні 30 хворих. Вік хворих склав від 25 до 62 років. Ускладнень не було. 6 Заявляємий спосіб простий та інформативний, легко виконується в умовах патогістохімічної лабораторії. Дозволяє діагностувати гіпертрофічний або келоїдний рубець, що розвивається, через два тижні після хірургічного втручання або інших ушкоджень шкірних покривів, коли клінічно це зробити неможливо. Дає можливість використовувати його для раннього початку лікування гіпертрофічного або келоїдного рубця. Таблиця Назва структури Гіпертрофічний рубець Лектин бульб Лектин картоплі бузини чорної Епідерміс Клітини базального шару цитолема цитоплазма Клітини шиповатого шару цитолема цитоплазма Клітини зернистого шару цитолема цитоплазма Клітини рогового шару цитолема цитоплазма Дерма волокна Клітини цитолема цитоплазма Комп’ютерна верстка М. Ломалова Келоїдний рубець Лектин бульб Лектин картоплі бузини чорної 4 4 2 1 2 4 1 2 2 3 1 2 2 3 1 1 2 4 1 1 2 3 1 1 2 4 2 2 2 2 4 4 4 3 4 4 2 1 2 2 2 2 1 1 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601