Спосіб оцінки сполученої дії на організм ссавців метилтретбутилового ефіру та зниженої температури в експерименті

Спосіб оцінки сполученої дії на організм ссавців хімічної речовини та зниженої температури в експерименті, що включає вимірювання показників змін функціонування біологічних систем організму ссавців після 30 затравок, який відрізняється тим, що оцінку токсичної дії метилтретбутилового ефіру в сполученні зі зниженою температурою здійснюють за змінами функціонального стану нирок шляхом визначення вмісту залишкового азоту крові та сечовини крові і сечі. (19) (21) u201013551 (22) 15.11.2010 (24) 11.04.2011 (46) 11.04.2011, Бюл.№ 7, 2011 р. (72) БАЧИНСЬКИЙ РУСЛАН ОРЕСТОВИЧ, ЗАВГОРОДНІЙ ІГОР ВОЛОДИМИРОВИЧ, КАПУСТНИК ВАЛЕРІЙ АНДРІЙОВИЧ, М'ЯСОЄДОВ ВАЛЕРІЙ ВАСИЛЬОВИЧ, ТКАЧУК НАТАЛІЯ МИХАЙЛІВНА, НІКУЛІНА ГАЛИНА ЛЕОНІДІВНА (73) ХАРКІВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 ред. Д.С. Саркисова. - М.: Медицина, 1987. - 448с.) шляхом визначення змін показників вмісту залишкового азоту крові та сечовини крові і сечі. Відомо, що МТБЕ викликає некроз епітеліальних клітин ниркових канальців, індукцію -2-мікроглобуліну у нирках та проліферацію цитоплазматичних гіалінових крапельок у проксимальних тубулярних епітеліальних клітинах, що свідчить про підвищене поглинання протеїну. Така нефропатія відзначається майже у 88 % щурів-самців при щоденному внутрішньошлунковому введенні у дозі 1428 мг/кг на 14 добу та на 30 добу при дозі 440 мг/кг (Leavens T.L. Physiologically Based Pharmacokinetic Model of Methyl Tertiary Butyl Ether and Tertiary Butyl Alcohol Dosimetry in Male Rats Based on Binding to alpha-2-microglobulin / T.L. Leavens, S.J. Borghoff // Toxicol. Sci. - 2009. - № 109 (2). - P. 321335.). He менш постійним ефектом на обмін органічних речовин внутрішнього середовища ссавців володіє холод, змінюючи секрецію антидіуретичного гормону (АДГ) і порушуючи водно-сольовий обмін (Fregly M.G. Water and electrolyte exchange during exposure to cold / M.G. Fregly // Pharmacol. Ther. - 1982. - Vol. 18, № 2. - P. 199-231). Особливості сполученого впливу МТБЕ та зниженої температури на організм ссавців оцінено експериментально. Задачею експерименту було вивчення особливостей токсичної дії МТБЕ на організм ссавців при його сполученій дії з позитивними низькими температурами (+4°±2°С), тобто в умовах моделювання холодового стресу. Дослідження виконані на безпородних статевозрілих білих щурах-самцях з вихідною масою тіла 246±17 г в умовах підгострого токсикологічного експерименту (протягом 30 днів з експозицією по 4 години на день). Тварин утримували на звичайному збалансованому раціоні віварію. Тварини були розподілені на 4 групи по 6 особин у групі. Тварини 1-ї групи піддавалися сполученій дії МТБЕ і зниженої температури повітря +4°±2°С. Тварини 2-ї групи піддавалися ізольованій дії зниженої температури +4°±2°С, тобто були контролем по відношенню до тварин 1-ї групи. Тварини 3-ї групи піддавалися дії МТБЕ при температурі повітря 25°±2°С (нормальна температура навколишнього середовища). Тварини 4-ї групи служили контролем при температурі повітря 25°±2°С. Позитивні низькі температури (тобто холодовий стрес) моделювали в умовах, які забезпечували охолоджування повітряного середовища в діапазоні температур +4°±2°С. 58522 4 Вивчення особливостей токсикодинаміки МТБЕ в умовах холодового стресу і температурного оптимуму в умовах підгострого токсикологічного експерименту проводилося шляхом введення МТБЕ у шлунок у дозі 1/10 ЛД50, що складає 5000 мг/кг маси тіла щурів (Яворовський О.П. Метилтретбутиловий ефір як глобальний забруднювач довкілля. Токсикологічні та екологічні аспекти ризику впливу в Україні / О.П. Яворовський, В.І. Зенкіна // Довкілля та здоров'я. - 2005. -№ 1 - с. 7580.). З метою виявлення змін показників, що вивчалися, їх визначення у контрольних і піддослідних тварин проводили після 15 і 30 затравок МТБЕ. В токсикологічному експерименті оцінювали комплекс показників змін функціонального стану нирок, як біологічної системи, яка відбиває патогенну дію хімічних речовин, в тому числі при зниженій температурі. Для вирішення питання про нефротропність МТБЕ в умовах холодового стресу застосована методична схема, що включала визначення в динаміці вмісту залишкового азоту крові титрометричним гіпобромідним методом (метод РаппопортаЕйхгорна), креатиніну сироватки і сечі кольоровою реакцією Яффе (метод Поппера з соавт.) (Колб В.Г. Справочник по клинической химии. - 2-е изд., перераб. и доп. / В. Колб, B.C. Камышников Минск: Беларусь, 1982. - 366 с.), сечовини крові і сечі уреазним методом, хлоридів сечі і сироватки фотометричним методом, білка сечі біуретовим методом (Энциклопедия клинических лабораторных тестов / под ред. Н.У. Тица; пер. с англ. под ред. В.В. Меньшикова - М.: «Лабинформ», 1997. 960 с.), відносної щільності та рН сечі. Вірогідність результатів токсикологічних досліджень визначали за критерієм Стьюдента. Було встановлено, що вірогідними результатами є показники вмісту залишкового азоту крові та сечовини крові та сечі. Відомо, що у клініці визначення концентрації сечовини крові і сечі та залишкового азоту крові набуло найбільшого значення для діагностики захворювань нирок. По кількості сечовини та залишкового азоту, що затримуються у крові, можна швидше розпізнати початкову стадію ниркової недостатності. Вірогідні результати змін показників функціонального стану нирок у білих щурів при підгострому впливі метилтретбутилового ефіру в умовах холодового стрессу та в умовах температурного комфорту представлені в табл. 1. 5 58522 6 Таблиця 1 Показники функціонального стану нирок у білих щурів при підгострому впливі МТБЕ (t=+4°±2°С) Показники n Контроль (t=+4°±2°С) X+Sx Залишковий азот крові, г/л 6 Сечовина сечі, мг/дл 6 Сечовина крові, ммоль/л 6 Залишковий азот крові, г/л 6 Сечовина сечі, мг/дл 6 Сечовина крові, ммоль/л 6 МТБЕ (t=+4°±2°С) n X±Sx 15 затравок 0,21±0,01 6 0,27±0,02* 385,31±29,76 6 275,02±10,78** 5,07±0,68 6 5,4±0,48 30 затравок 0,22±0,01 6 0,27±0,02* 571,59±38,69 6 429,38±41,22* 3,54±0,21 6 4,32±0,15* n Контроль (t=+25°±2°С) X+Sx МТБЕ (t=+25°±2°С) n X+Sx 6 6 6 0,24±0,02 915,80±354,27 5,33±0,19 6 0,25±0,02 6 836,80±134,99 6 5,60±0,18 6 6 6 0,25±0,02 1413±192,43 6,20±0,05 6 0,25±0,03 6 949,37±122,29 6 5,61±0,25* Примітка: * - різниця вірогідна при Р