Штам pasteurella multocida серотипу а

Штам Pasteurella multocida №7 серотипу А, що застосовується у ветеринарній біотехнологм, задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм та штамів під реєстраційним номером 270 Галузь техніки, до якої відноситься винахід ветеринарна, мікробіологічна, бютехнолопчна промисловість Винахід застосовується в технології виготовлення "Вакцини проти пастерельозу, сальмонельозу та колібактеріозу свиней "Пасако" та "Набору типових сироваток для індикації та ідентифікації штамів Pasteurella multocida" Аналогом технічного рішення є штами роду Pasteurella multocida, що входять до серологічного типу "В" У свиней збудники цього типу викликають септичну форму хвороби На даний момент при виготовленні протипастерельозних профілактичних препаратів застосовуються штами серологічного типу "В" [1,2] За цих умов тяжко здійснювати діагностику та профілактику хвороб, що викликаються Pasteurella multocida серотипу "А" (інфекційні пастерельозні пневмонії, атрофічний риніт) Адже антигенна спорідненість! штамів серотипу "В" та "A" Pasteurella multocida складає 30% Суть винаходу і його ознаки В основу винаходу покладена мета виділити штам Pasteurella multocida серотипу "А", антигенне ВІДМІННИЙ ВІД штамів серотипу "В", має високу вірулентність та імуногенність, який можна застосовувати в технологи виготовлення діагностичних та профілактичних біопрепаратів Для досягнення цієї мети дослідження властивості ряду штамів, типованих , як Pasteurella multocida серотипу "А" Технічний результат Штам Pasteurella multocida серотипу "А" №7 виділений з трупу свині в свиногосподарстві Херсонської області в 1999 році Ретельно вивчені його біохімічні, морфологічні, вірулентні, антигенні та імуногенні властивості Штам задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм та штамів мікроорганізмів має реєстраційний номер 270 Штам Pasteurella multocida серотипу "А" №7 досить стабільний, характеризується наступними властивостями Морфологічні властивості Штам має характерні для мікроорганізмів даного виду короткі, овоідні грамнегативні нерухомі палички, спор не утворює Має ліпополіцукрову капсулу, біохімічний склад якої притаманний мікроорганізмам сероваріанту "A" Pasteurella multocida Культуральні властивості Штам добре росте на звичайних поживних середовищах з рН=7,2-7,4 На м'ясопептонному бульйоні утворює рівномірне помутніння через 10-12 годин, на м'ясопептонному агарі через 24 години культивування утворює характерні середньовеликі круглі слизоподібні колони білувато-сірого кольору (М-форма) Ферментативні властивості Штам ферментує до кислоти без утворення газу глюкозу, цукрозу, галактозу, маніт, сорбіт, не ферментує лактозу, дульцит, ксилозу, рамнозу, арабшозу, мальтозу Редукує нітрати в нітрити Утворює індол Не утворює сірководень Не гемолізує еритроцити Вірулентні властивості Штам вірулентний для білих мишей (ЛД5о-Ю3-104 мікробних тіл при підшкірному введенні), кролів, великої рогатої худоби, свиней, дрібної рогатої худоби та птахів У свиней викликає пастерельозну пневмонію та атрофічний риніт Диференціація виділеного штаму Pasteurella multocida №7 здійснюється за морфологічними, антигенними та імуногенними особливостями За морфологічними ознаками добова агарова культура має вигляд слизоподібних середньовеликих матових колоній округлої форми (М-форми) Для диференціації штаму за антигенними властивостями готують капсульний антиген Добову агарову культуру штаму змивають фізіологічним розчином, доводять до концентрації 1 (О 00 о (О 60867 20млрд мікр тіл\см , поміщають в водяну баню на тати випробувань демонструють розвиток за цих 45 хвилин при 56°С Потім культуру центрифугуумов різних форм захворювання (табл 1 ) ють при 4,5-5,0тис об\хв , протягом ЗО хвилин НаПісля внутрішньо-м'язового зараження тварин досадову рідину збирають окремо, що являє соштамом №9 серотипу В протягом перших 2-х діб бою капсульну субстанцію захворіли й загинули всі поросята з ознаками сепсису При штраназальному введенні цього ж штаТипування штаму за капсульним антигеном му тваринам іншої групи захворіло 1 порося з підздійснюють в реакції дифузійної преципітації вищенням температури тіла При Для цього в плексиглазових чашках Петрі з патологоанатомічному дослідженні цієї тварини 1%-м агаром Діфко проробляють спеціальним змін, притаманних пастерельозній інфекції виявстандартним штампом лунки В центральну лунку лено не було вносять капсульну речовину (антиген) Pasteurella multocida №7 серотипу "А", а в периферійні - окреНа відміну від другої групи в першій групі твамо типоспецифічні сироватки, отримані на штам рин на п'яту добу після інтраназального зараження серотипу "А" та штам серотипу "В" спостерігалось погіршення КЛІНІЧНОГО стану з ознаками пневмонії При внутрішньо-м'язовому зараЧіткий результат реакції буде спостерігатись женні тварини залишались КЛІНІЧНО здоровими тільки у випадку взаємодії капсульного антигену При патологоанатомічному дослідженні тварин, штаму Pasteurella multocida №7 серотипу "А" з гощо хворіли, були виявлені типові ознаки катаральмологічною сироваткою Це свідчить про антигенно-геморагічної пневмонії Крім того, у всіх хворих ну своєрідність пропонованого штаму тварин помічені зміни носового кістково-хрящового Винахід ілюструється наступними прикладами комплексу Контрольна група тварин змін не мала Прикладі Антигенну особливість штаму PasТаким чином, штам серотипу "А" викликає ВІДМІНteurella multocida №7 серотипу "А" чітко ілюструє НИЙ ВІД штаму серотипу "В" перебіг хвороби й має дослід по зараженню ним та штамом гетерогенносвій характерний шлях проникнення до організму го сиротипу "В" чутливих тварин(свиней) РезульТаблиця 1 Схема досліду та результати експериментального зараження поросят різними збудниками пастерельозу Тип збудника та шлях за- КІЛЬКІСТЬ дослідКІЛЬКІСТЬ ГОЛІВ, ЩО раження них тварин Захворіли Мали атологоанатомічні зміни п 1 2 3 4 5 6 7 Група 1, Серовар A, Pasteurella multocida №7 Інтраназально Внутрішньо-м'язово Група 2, Серовар В, Pasteurella multocida №9 Інтраназально Внутрішньо-м'язово Група 3, Контроль без зараження Р п Р 4 3 4 0 0,001 0,001 4 0,001 0,001 5 3 1 3 0,01 0,001 3 0,5 0,001 3 0 0 Приклад 2 Імуногенні особливості штаму Pasteurella multocida №7 визначали в ДОСЛІДІ З перехресним зараженням білих мишей Для цього 12 груп білих мишей щепили моновакциною, виготовленою на основі антигенновідмінного штаму Pasteurella multocida №9 серовару В, в різних імунізуючих дозах Ще дві групи мишей залишались не щепленими - контроль Через 2 тижні шість груп мишей, щеплених різними дозами моновакцини та одну контрольну групу заразили 5ЛД50 штаму №7 Pasteurella multocida серовару А Результати досліду подані в таблиці 2 Таблиця 2 Імуногенність штамів пастерел різних серогруп Доза щеплення моно вакциною Нативна 0,5 0,25 0,125 0,0625 0,3125 0,0156 Контроль Об'єм дози Заражаюча доза щеплення см 3 культур, ЛД 50 0,5 -"-"-"-"-"-" 5 -"-"-"-"-"-"-" Pasteurella multocida Штам №7 а\в 6/10 8/10 10/10 10/10 10/10 10/10 10/10 10/10 Примітка, а\в - відношення загиблих мишей до залучених в дослід Штам №9 КІЕ,% 40 20 0 0 0 0 0 а\в 0/10 0YI0 0YI0 0YI0 0YI0 1YI0 3YI0 10YI0 КІЕ,% 100 100 100 100 100 90 70 При повній загибелі обох контрольних груп мишей превентивна активність моновакцини зі штаму Pasteurella multocida №9 серовару В була 100%-ю в переважній КІЛЬКОСТІ випадків Порівняно з іншими групами білих мишей, які були заражені антигенне ВІДМІННИМ штамом серотипу А цей показник не перевищував 40% 10 Таким чином, ВІДМІННІСТЬ імуногенних властивостей штамів різних серологічних типів №7 та №9 очевидна Задепонований в ДНКІБШМ штам Pasteurella multocida №7 серовару "А" морфологічно, антигенне й імуногенне особливий та стабільний по Комп'ютерна верстка Т Чепелєва відношенню до відомих виробничих штамів серологічного типу "В" Pasteurella multocida Це дає підстави рекомендувати його для виготовлення протипастерельозних біопрепаратів профілактичного та діагностичного призначення Джерела інформації 1 Інструкція по виготовленню та контролю "Вакцина проти пастерельозу, паратифу та диплококоваї інфекції поросят" від 21 09 1995р 2 Інструкція по виготовленню та контролю "Формолвакцини проти пастерельозу овець та свиней преципітованої" від 01 03 1995р Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119