Штам pasteurella multocida серотипу d

Штам Pasteurella multocida №3 серотипу D, що застосовується в ветеринарній біотехнологм, задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм та штамів під реєстраційним номером 271 морфологічні, вірулентні, антигенні та імуногенні властивості Штам задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм та штамів мікроорганізмів має реєстраційний номер 270 Штам Pasteurella multocida серотигту "Д" №3 досить стабільний, характеризується наступними властивостями Морфологічні властивості Штам має характерні для мікроорганізмів даного виду короткі, ОВОІДНІ грамнегативні нерухомі палички, спор не утворює Має ліпополіцукрову капсулу, біохімічний склад якої притаманний мікроорганізмам сероваріанту "Д" Pasteurella multocida Культуральні властивості Штам добре росте на звичайних поживних середовищах з рН=7,27,4 На м'ясопептонному бульйоні утворює рівномірне помутніння через 10-12 годин, на м'ясопептонному агарі через 24 години культивування утворює дрібні прозорі округлі блискучі колонії блакитного відтінку (S-форма), Ферментативні властивості Штам ферментує до кислоти без утворення газу глюкозу, цукрозу, галактозу, маніт, сорбіт, не ферментує лактозу, дульцит, ксилозу, рамнозу, арабшозу, мальтозу Редукує нітрати в нітрити Утворює індол Не утворює сірководень Не гемолізує еритроцити Вірулентні властивості Штам вірулентний для білих мишей (ЛДзо -10е*- 10' мікробних тіл при підшкірному введенні), кролів, великої рогатої худоби, свиней, дрібної рогатої худоби, У свиней викликає пастерельозну пневмонію та атро (О (О 00 о (О 60866 фічний риніт Диференціація виділеного штаму Pasteurella multocida №3 здійснюється за антигенними та имуногенними особливостями Для диференціації штаму за антигенними властивостями готують капсульний антиген Добову агарову культуру штаму змивають фізіологічним розчином, доводять до концентрації 3 20млрд мікртіл\см , поміщають в водяну баню на 45 хвилин при 56°С Потім культуру центрифугують при 4,55,0тисоб\хв, протягом ЗО хвилин Надосадову рідину збирають окремо, що являє собою капсульну субстанцію Типування штаму за капсульним антигеном здійснюють в реакції дифузійної преципітації Для цього в плексиглазових чашках Петрі з 1%-м агаром Діфко проробляють спеціальним стандартним штампом лунки В центральну лунку вносять капсульну речовину (антиген) Pasteurella multocida №3 серотипу "Д", а в периферійні - окремо типоспецифічні сироватки, отримані на штам серотипу "Д" та штам серотипу "В" Чіткий результат реакції буде спостерігатись тільки у випадку взаємодії капсульного антигену штаму Pasteurella multocida №3 серотипу "Д" з гомологічною сироваткою Це свідчить про антигенну своєрідність пропонованого штаму Винахід ілюструється наступними прикладами Приклад 1 Антигенну особливість штаму Pasteurella multocida №3 серотипу "Д" чітко ілюструє дослід по зараженню ним та штамом гетерогенного сиротипу "В" чутливих тварин(свиней) Результати випробувань демонструють розвиток за цих умов різних форм захворювання (табл 1 ) Після внутрішньо-м'язового зараження тварин штамом №9 серотипу В протягом перших 2-х діб захворіли й загинули всі поросята з ознаками сепсису При штраназальному введенні цього ж штаму тваринам іншої групи захворіло І порося з підвищенням температури тіла При патологоанатомічному дослідженні цієї тварини змін, притаманних пастерельозній інфекції виявлено не було На відміну від другої групи в першій групі тварин на п'яту добу після інтраназального зараження спостерігалось погіршення КЛІНІЧНОЮ стану з ознаками пневмонії При внутрішньо-м'язовому зараженні тварини залишались клінічне здоровими При патологоанатомічному дослідженні тварин, що хворіли, були виявлені типові ознаки катарально-геморапчної пневмонії Крім того, у всіх хворих тварин помічені зміни носового кістковохрящового комплексу Контрольна група тварин змін не мала Таким чином, штам серотипу "Д" викликає ВІДМІННИЙ від штаму серотипу "В" перебіг хвороби й мас свій характерний шлях проникнення до організму Таблиця 1 Схема досліду та результати експериментального зараження поросят різними збудниками пастерельозу № Тип збудника та шлях зараження КІЛЬКІСТЬ ДОСЛІДНИХ Захворіли КІЛЬКІСТЬ ГОЛІВ, ЩО Мали патологоанатомічні зміни Р п Р тварин 1 2 3 Група 1 Серовар Д Pasteurella multocida №3 Інтраназально Внутрішньо-м'язово Група 2 Серовар В Pasieurella multocida №9 Інтраназально Внутрішньо-м'язово Група 3 Контроль без зараження п 3 2 2 0 0,05 0,05 2 0,01 0,001 2 2 2 2 0,01 0,01 2 0,01 0,01 2 0 Приклад 2 Імуногенні особливості штаму Pasteurella multocida №3 визначали в ДОСЛІДІ З перехресним зараженням білих мишей Для цього 12 груп білих мишей щепили моновакциною, виготовленою на основі антигенновідмінного штаму Pasteurella multocida №9 серовару 0 В, в різних імунізуючих дозах Ще дві групи мишей залишались не щепленими - контроль Через 2 тижні шість груп мишей, щеплених різними дозами моновакцини та одну контрольну групу заразили 5ЛД50 штаму №3 Pasteurella multocida серовару Д Результати досліду подані в таблиці 2 60866 Таблиця 2 Імуногенність штамів пастерел різних серогруп Доза щеплення моновакциною Нативна 0,5 0,25 0,125 0,0625 0,03125 0,0156 Контроль Об'єм дози щеп- Заражаюча доза лення, CM культур, Л Д 5 0 0,5 -"-"-"-"-"-" 5 -"-"-"-"-"-"-" Pasteurella multocida Штам №3 Штам №9 а\в КІЕ,% а\в КІЕ,% 9/10 10 0/10 100 10/10 0 0\10 100 10/10 0 0\10 100 10/10 0 0\10 100 10/10 0 0\10 100 10/10 0 1\10 90 10/10 0 3\10 70 10/10 1\10 Примітка а\в - відношення загиблих мишей до залучених в дослід При повній загибелі обох контрольних груп мишей превентивна активність моновакцини зі штаму Pasteureha irmltocida №9 серовару В була 100%-ю в переважній КІЛЬКОСТІ випадків Порівняно з іншими групами білих мишей, які були заражені антигенно ВІДМІННИМ штамом серотипу Д, цей показник не перевищував 10% Таким чином, ВІДМІННІСТЬ імуногенних властивостей штамів різних серологічних типів № 3 т а №9 очевидна Задепонований в ДНКІБШМ штам Pasteureha multocida №3 серовару "Д" морфологічно, антигенно й імуногенно особливий та стабільний по Комп'ютерна верстка Т Чепелєва відношенню до відомих виробничих штамів серологічного типу "В" Pasteurella multocida Це дає підстави рекомендувати його для виготовлення протипастерельозних біопрепаратів профілактичного та діагностичного призначення ДЖЕРЕЛА ІНФОРМАЦІЇ 1 Інструкція по виготовленню та контролю "Вакцина проти пастерельозу, паратифу та диплококоваї інфекції поросят" від 21 09 1995р 2 Інструкція по виготовленню та контролю "Формолвакцини проти пастерельозу овець та свиней преципвтованої" від 01 03 1995р Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119