Вакцинний штам fusobacterium necrophorum чн-2000

Штам Fu so bacterium necrophorum ЧН-2000, який депонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 140 від 05 08 2002 року, використовується для виробництва шактивованої асоційованої вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин, володіє стабільними морфологічними та культуральнобюхімічними властивостями і є патогенним для білих мишей (100%-ну загибель білих мишей викликає в дозі 0,5 см КІЛЬКІСТЮ мікробних клітин 5,8x109) Винахід відноситься до ветеринарної мікробіологи, зокрема до нового штаму анаеробного мікроорганізму, що використовується для виготовлення вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин Аналогом винаходу є лабораторний штам Fusobactenum necrophorum BN-2, що був використаний для виготовлення анатоксин-вакцини проти некробактерюзу [2] До недоліків даного штаму мікроорганізму можна віднести те, що він використовується для виділення токсину при виробництві анатоксин-вакцини, а профілактичний ефект такої вакцини невисокий -33,3 % [3] Прототипом винаходу є колекційний штам Fusobactenum necrophorum 2030A, що зберігається в колекції кафедри епізоотології та інфекційних хвороб Московської Державної академії ветеринарної медицини та біотехнологм (м Москва) [4] Подібними ознаками прототипу із заявленим штамом є те, що він високо токсигенний та патогенний для білих мишей і при культивуванні на кров'яному агарі викликає гемоліз еритроцитів, а також володіє подібними морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями Подібним також є те, що цей штам використовується для виробництва шактивованої асоційованої вакцини проти некробактерюзу великої рогатої худоби - "Нековак" [4] ВІДМІННИМИ ознаками прототипу від заявленого штаму є слідуючі - штам задепоновании в колекції мікроорганізмів Російської Федерації і на Україні даного штаму мікроорганізму немає, - для виробництва вакцини використовується бульйонна 2-х добова культура Fusobactenum necrophorum 2030А - вакцина "Нековак", компонентом якої є антиген із штаму, що взятий за прототип, не завжди має бажаний ефект при вакцинації великої рогатої худоби і не забезпечує високої імуногенності у щепленого поголів'я [2] Метою даного винаходу є вакцинний штам Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 ("Чернігівський 2000"), який володіє стабільними морфологічними, культурально-бюхімічними та патогенними властивостями і виділений з матеріалу відібраного від великої рогатої худоби з ознаками некробактерюзу в одному із господарств Чернігівської області Штам Fusobactenum necrophorum ЧН-2000, отриманий шляхом культивування ізоляту з вражених ділянок дистальних ВІДДІЛІВ КІНЦІВОК великої рогатої худоби, співробітниками лабораторії анаеробних інфекцій IBM УААН Штам Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 депонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 140 від 5 08 2002 р Морфологічні властивості У мазках із бульйонних та агарових культур, штам Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 має вигляд поліморфних форм клітин (короткі ланцюжки, поодинокі палич 00 1^ 00 00 ю 58878 ки, палички з шаровидними вздуттями), що при фарбуванні звичайними аніліновими фарбами фуксином Циля, синькою Лефлера, а також по Муромцеву, мають добревиражену зернистість Культуральні властивості Оптимальна температура культивування штаму 37±1,0°С На середовищі Кітта-Тароцці поява росту відмічається через 24-36 годин, що супроводжується помутнінням середовища, при подальшому культивуванні утворюється кришковидний осад на шматочках печінки На агаровому середовищі з 5-10%ми крові чи сироватки крові великої рогатої худоби та 5-10%-ми глюкози, в анаеробних умовах утворює дрібні до 1 мм сірувато-білі колонії Не утворює гемолізу на кров'яному агарі Ферментативні властивості Штам Fusobacterium necrophorum ЧН-2000 ферментує з утворенням кислоти і газу глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, не ферментує фруктозу, маніт, дульцит Утворює індол та сірководень Таблиця 1 БІОХІМІЧНІ властивості штаму Fusobacterium necrophorum ЧН-2000 Глюкоза + Мальтоза Фруктоза Галактоза + Сахароза + Маніт + Дульцит Утворення індолу + Утворення сірководню Патогенні властивості Штам Fusobacterium necrophorum ЧН-2000 патогенний для великої рогатої худоби, кролів та білих мишей У кролів на 45 день викликає некроз при підшкірному введенні семидобової бульйонної культури в дозі 1 см 3 та загибель тварин на 7-9 добу, 100%-ну загибель білих мишей викликає в дозі 0 5 см 3 та КІЛЬКІСТЮ мікробних клітин 5,8x10 Стабільність вірулентності штаму встановлена шляхом б-ти кратних пасажів протягом 2 років Винахід ілюструється наступними прикладами Приклад 1 Штам Fusobacterium necrophorum ЧН-2000 (культура 1) отриманий шляхом культивування ізоляту з уражених ділянок дистальних ВІДДІЛІВ КІНЦІВОК великої рогатої худоби, відселекційований, як такий, що володє характерними для роду Fusobacterium, родини Bactenodaceae морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями Але був патогенним для білих мишей, оскільки при підшкірному та внутрішньочеревному введенні двохдобової бульйонної культури в дозі 0,5 см 3 по 10 тварин на кожне введення, гинуло 90-100 % тварин, при 100 % загибелі у контролі Приклад 2 Штам Fusobacterium necrophorum ЧН-2000 (культура 2), отриманий шляхом культивування ізоляту з уражених ділянок печінки КІНЦІВОК великої рогатої худоби, що володіє характерними для роду Fusobacterium, родини Bactenodaceae морфологічними та культуральнобюхімічними властивостями, але був слабопатогенним для білих мишей, оскільки при підшкірному та внутрішньочеревному введенні бульйонної культури в дозі 0,5 см 3 по 10 тварин на кожне введення, гинуло 10-20 % тварин, при 100% загибелі у контролі + Таблиця 2 Порівняльна характеристика властивостей прототипу та штамів Fusobacterium necrophorum Морфологія Штами F necrophorum2030 F necrophorum4H2000(культура 1) F necrophorum ЧН2000 (культура 2) F necrophorum ЧН2000 (культура 3) Н П + + Термін культивування Гемоліз еритштаму роцитів Наявність токсину Патогенність для білих мишей 2 доби + + 9/10 ± 7 діб + + 10/10 + 7діб + 2/10 + 7 діб + 4/10 Примітка Н - нитчата форма, П - поліморфна форма Приклад 3 Штам Fusobacterium necrophorum ЧН-2000, отриманий шляхом культивування ізоляту з уражених ділянок легень великої рогатої худоби, що володів характерними для роду Fusobacterium, родини Bactenodaceae морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями, але був слабо патогенним для білих мишей, оскільки при підшкірному та внутрішньочеревному введенні бульйонної культури в дозі 0,5 см 3 по 10 тварин на кожне введення, гинуло 30-40 % тварин, при 100 % загибелі у контролі Порівняльна характеристика властивостей прототипу та випробуваних і вищезазначених прикладів наведені в таблиці 2 Імуногенні властивості Із штаму Fusobacterium necrophorum ЧН-2000 була виготовлена моновакцина для встановлення імуногенності штаму у дослідах на білих мишах та кролях Лабораторних тварин щепили підпікіряно ДВІЧІ З інтервалом 14 58878 діб у дозах білих мишей по 0,5 см , кролів по 1,0 см3 з концентрацією мікробних клітин 4 м л р д м к / с м 3 На 10-ту добу після другого щеплення провели гостре зараження дослідних та контрольних (не щеплені) тварин бульйонною культурою штаму Fusobactenum necrophorum -ЧН 2000 в дозі 0,5 см та концентрацією мікробних клітин 5,8х10 9 Тварини із дослідної групи залишилися живими у порівнянні із 100%-вою загибеллю в контролі Титри антитіл у сироватці крові кролів, щеплених моновакциною із штаму Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 наведені у таблиці З Таблиця З Динаміка титрів антитіл в РИГА у кролів, щеплених моновакциною із штаму Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 Термін дослідження Група тварин Дослід Титри Антитіл не виявлено Контроль ВИХІДНІ дані Після 1-ГО щеплення на 7-у добу на 14-у добу Після 2-ГО щеплення на 7-у добу на 14-у добу на 30-у добу Антитіл не виявлено ід 1 4-1 16 1 32-1 64 0,6-1,2 1,5-1,8 1 256-1 512 1 512-1 1024 1 256-1 512 2,4-2,7 2,7-3,0 2,4-2,7 Отже, встановлено, що моновакцина із штаму Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 є імуногенною Крім того, вакцина не викликає поствакцинальних ускладнень і викликає імунологічну ВІДПОВІДЬ та формування специфічних антитіл Антигенні властивості Визначення антигенної спорідненості штаму Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 з іншими епізоотичними штамами Fusobactenum necrophorum проводили по їх типізації з протинекробактерюзними сироватками в РИГА Досліджено 5 різних епізоотичних штамів F necrophorum , які були найбільш репрезентативними представниками роду Fusobactenum серед виділених по морфологічним, культуральним, біохімічним та вірулентним властивостям Сироватки були виготовлені нами шляхом пперімунізацм кролів, вище зазначеними штамами Результати наведені у таблиці 4 Таблиця 4 Показники антигенної спорідненості штамів F necrophorum Максимальні титри в PA з сироватками Штам F necrophorum ДН-97 F necrophorum ДН-97 F necrophorum- K F necrophorum XC F necrophorum ЧН2000 F necrophorum ДОН 1 2048 1 124 1 512 1 124 1 2048 1 32 1 124 1 512 F necrophorum ЧН2000 F necrophorum ДОН 1 512 1 32 1 2048 1 32 1 512 1 32 1 512 1 512 1 512 1 512 1 32i 1 2048 1 32 1 512 1 512 1 32 1 2048 F necrophorum- К F necrophorum XC Як видно з таблиці 4, титри антитіл в протинекробактерюзних сироватках до гомологічних штамів F necrophorum в РИГА становили 1 2048 Високо вираженою серологічною спорідненістю між собою володіли штами F necrophorum ЧН-2000 та F necrophorum - К Титри антитіл в перехресній РИГА між цими антигенами становили 1 512 Результати досліджень свідчать про те, що запропонований штам Fusobactenum necrophorum ЧН-2000 володіє високою патогенністю, має антигенну спорідненість з іншими епізоотичними штамами Fwobactenum necrophorum, а також придатний для виробництва вакцини проти некробактеріозу Запропонований штам може бути використаний для виробництва вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин Джерела інформації 1 Определитель бактерий Берджи /под ред Дж Хоулта, Н Крита, П Снита и др Перевод с англ акад РАН ГА Заварзина — 9-е изд в 2-х томах -1997 - 8 0 0 с 2 А А Самоловов, С В Допатин, В А Чурбанов,, А В Киселев Конструирование и оценка вакцин для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных Сб науч тр РАСХИ—Новосибирск -1997С 108-113 7 58878 3 Самоловов А А , Лопатин С В Некробаїсгериоз крупного рогатого скота и пути решения проблемы //Аграрная Россия - 2001 -№ 3-С 34-37 4 Федосеенко В А Усовершенствование средств специфической профилактики некробак Комп'ютерна верстка М Клюкін 8 териоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец Автореф дис - канд вет наук 16 00 03Моек гос акад вет медицины и биотехнологии им К И Скрябина М,-1998 -16с Підписано до друку 05 09 2003 Тираж 39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна