Спосіб визначення стійкості картоплі до збудника раку synchytrium endobioticum (schilb) perc. в умовах in vitro

Спосіб визначення стійкості картоплі до збудника раку, що включає зараження паростків бульб картоплі літніми зооспорангіями збудника хвороби і їх аналіз, який відрізняється тим, що заражають зооспорами паростки мікробульб картоплі в умовах in vitro і аналіз проводять мікроскопією. (19) (21) u201015179 (22) 16.12.2010 (24) 12.09.2011 (46) 12.09.2011, Бюл.№ 17, 2011 р. (72) ЗЕЛЯ АВРЕЛІЯ ГЕОРГІЇВНА, ХОМ'ЯК ВІРА ВАСИЛІВНА, СЕМЕНЧУК ВАЛЕНТИНА ГРИГОРІВНА, МЕЛЬНИК ПАВЛО ОЛЕКСІЙОВИЧ, БОНДАРЧУК АНАТОЛІЙ АНДРІЙОВИЧ, ОСИПЧУК АНДРІЙ АНТОНОВИЧ, КРАВЧЕНКО ОЛЕКСІЙ АРСЕНТІЙОВИЧ, СИДОРЧУК ВАСИЛІЙ ІВАНО 3 62605 підвищеною вологістю і температурі 11-13 °С. Час експозиції 24 години. Інфекцію з паперовими кільцями знімають з бульб і залишають зразки картоплі при температурі 17-18 °С протягом 20 діб, після чого відзначають реакцію паростків картоплі на зараження патогеном. Для цього їх аналізують під бінокулярною лупою і відрізняють ступінь ураження: 1 - некротизована тканина паростка, одиничні соруси; 2 - розсіяні соруси (якщо більше 5), щільні соруси без деформації паростка; 3 - щільні соруси з деформацією паростка, раковий наріст. В аналізованих таким чином сортів картоплі (таблиця 1, додаток 1, фото 1) ступінь ураження паростків картоплі зооспорангіями збудником раку склала: Серпанок - 3 ступінь, Явір - 2 ступінь, Щедрик - 3 ступінь. Приклад 2 Після розмноження в умовах in vitro відбирають мікробульби картоплі, розміщують у пробірках, 3 додають 5 мл дистильованої води та 0,5 см ракових наростів, що вміщують літні зооспорангії збудника раку картоплі. Зразки залишають у клімокамері з підвищеною вологістю і температурі 11-13 °С. Час експозиції 24 години. Дистильовану воду разом з інфекцією відливають, а пробірки з зразками мікробульб картоплі залишають при температурі 17-18 °С протягом 7 діб, після чого визначають реакцію паростків картоплі на зараження патогеном. Для цього їх аналізують під мікроскопом (8 х 15) і визначають ступінь ураження: 1 - некротизована тканина паростка, одиничні соруси; 2 - розсіяні соруси (якщо більше 5), щільні соруси без деформації паростка; 3 - щільні соруси з деформацією паростка, раковий наріст. В аналізованих таким чином сортів картоплі (таблиця 1, додаток 1, фото 2) ступінь ураження паростків картоплі збудником раку склала: Серпанок - 3 ступінь, Щедрик - 3 ступінь, Явір - 3 ступінь. Математичну обробку даних проводили за Масловим Ю.І. [6] Таким чином, шляхом зараження мікробульб картоплі літніми зооспорами зі свіжих ракових наростів, вдається визначити ступінь стійкості паростків картоплі до раку мікроскопією в умовах in vitro. Процес визначення ступеню стійкості 3 зразків картоплі до збудника раку мікроскопією склав 10 4 хвилин, а способом зараження зооспорами зі свіжих ракових наростів (найближчим аналогом) - 21 день. Запропонований спосіб визначення стійкості картоплі до раку підтверджує експериментальна перевірка, яка здійснювалась при ураженні патогеном сортів, отриманих з Інституту картоплярства НА АН України. ЛІТЕРАТУРНІ ДЖЕРЕЛА 1. Вилкова Н.А., Шапиро И.Д., Борщева Т.А. Использование инфракрасной микроскопии для диагностики повреждения и устойчивости зерновок к клопам. В сб. Методы исследований патологических изменений растений. - М.: Колос, 1976. С.216-219. 2. Деклараційний патент на винахід. №38722, МКВ А01C 1/00, G01J 3/28. Спосіб визначення стійкості картоплі до збудника раку Synchytrium endobioticum (Schilb) Perc. Заявл. 06.09.2000, опубл. 15.05.2001 // Офіційний бюлетень. Промислова власність, 2001. - №4, частина 2. - С. 14. 3. Деклараційний патент на корисну модель №6317, МПК А01H 3/00, G01J 3/28. Спосіб визначення успадкування стійкості картоплі до збудника раку Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. Опубл. 16.05.2005.// Офіційний бюллетень. Промислова власність. - 2005. - Бюл.№5. С.124. 3. Зеля А.Г., Мельник П.О. Методологія оцінки та відбору селекційного матеріалу картоплі стійкого до раку Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. УкрНДСКР - Чернівці, 2007 p. 4. Зеля А.Г. Стійкість картоплі проти збудника раку Synchytrium endobioticum (Schilb) Perc, методи його виявлення і диференціації. Авт. канд. дис. К., 2009, 24 с. 5. Зеля А.Г. Біохімічні методи визначення стійкості картоплі до збудника раку Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc.// Вісник Чернівецького національного університету, серія «Біологія». 2007. - №343. - С.78-90. 6. Маслов Ю.И. Статистическая обработка данных биохимических исследований // Методы биохимического анализа растений. Л., 1978. - С. 163-178. 7. Салтыкова Л.П., Тарасова В.П. Методические указания по испытанию картофеля на ракоустойчивость. - Л., 1982. - 51 с. 8. Салтыкова Л.П., Яковлева В.И. Лабораторная диагностика ракоустойчивости картофеля методом заражения ростков от свежих раковых наростов: Методические указания. - М., 1979. - 8 с. Додаток 1, таблиця 1 Реакція на зараження картоплі зооспорами збудника раку різними способами. № п/п 1. 2. 3. Сорти, гібриди картоплі Серпанок Щедрик Явір Ступінь стійкості Прямим способом зараження, бали В умовах in vitro, (M±m) 1 1±0,72 1 1±0,52 2 1±0,51 5 Комп’ютерна верстка А. Крулевський 62605 6 Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601