Спосіб прогнозування стану імунітету у новонароджених з внутрішньоутробними мікст-інфекціями групи torch

Винахід відноситься до медицини, а саме до неонатології і може бути використаний для прогнозування стану імунітету у новонароджених із внутрішньоутробними мікст-інфекціями групи TORCH. Проблема внутрішньоутробних інфекцій викликає інтерес, насамперед, як проблема, зв'язана з патологією плоду і немовлят, що приводить до формування пороків розвитку і важких поразок центральної нервової системи (ЦНС), а також до інвалідізації і смерті дитини. Однак багато украй необхідних для клініциста питань даної проблеми, залишаються мало вивченими. Так, наприклад, ряд робіт свідчать, що причиною важких форм поразки немовлят, як правило, є не моноінфекції, а асоційовані вірусно-вірусні і вірусно-бактеріальні інфекції, що у структурі вн утрішньоутробних інфекцій складають від 27 до 37%. Найбільш складними в плані діагностики дотепер залишаються вірусні інфекції. Протікаючи переважно у виді мікст-інфекції, вони збільшують плин інфекційного процесу, приводячи в остаточному підсумку до більш несприятливого результату. Ін фекції TORCH-комплексу протікають на тлі вторинного імунодефіциту або обумовлюють його виникнення. При цьому, незважаючи на вже проведені дослідження, залишається відкритим питання, які варіанти порушення імунної системи у немовлят із внутрішньоутробними специфічними інфекціями мають місце. Відомий спосіб визначення імунодефіцитного стану у дітей періоду новорожденості з інфекційно-запальними захворюваннями по визначенню стану гемокоагуляції (SU 1698789, G01N33/86, 1991). Наявність гіпокоагуляції дозволяє діагностувати імунодефіцитний стан. Недоліками способу є те, що імунодефіцитний стан прогнозують по зміні параметрів, що не відбивають стан імунної системи, а саме по показниках згортання крові. Спосіб не дозволяє об'єктивно оцінити ступінь тяжкості імунодефіциту. Найбільш близьким до способу, що заявляється, і обраним за прототип є спосіб прогнозування стану імунної системи новонародженого, що здійснюють шляхом дослідження пуповинної крові у новонародженого і визначення показника відносного змісту В-лімфоцитів (CD 19). При показниках, які перебільшують чи рівних 18%, прогнозують імунодефіцитний стан (RU №2107912, МПК6 G01N33/53, 1998). Недоліки способу зв'язані з неможливістю об'єктивної оцінки ступеня тяжкості імунодефіцитних станів у новонароджених. Оцінка тільки гуморальної ланки імунітету не дозволяє оцінити відхилення від норми, як убік перевищення, так і убік зменшення, що важливо в діагностичних цілях. В основу винаходу поставлена задача удосконалення способу прогнозування стану імунітету у новонароджених із внутрішньоутробними мікст-інфекціями групи TORCH, у якому за рахунок додаткового визначення показників імунітету і їх наступної математичної обробки, досягається об'єктивна оцінка ступеня ваги імунодефіциту. Поставлена задача вирішується в способі прогнозування стану імунітету у новонароджених із внутрішньоутробними мікст-інфекціями групи TORCH, що здійснюють шляхом забору крові і визначення змісту Влімфоцитів, відповідно до винаходу, додатково визначають вміст Т-лімфоцитів і IgG, проводять математичну обробку даних, одержують значення дискримінантних функцій і при величині D1=51,4849+2,4815CD3+0,9593CD19-0,0146IgG прогнозування важку ступенем ваги імунодефіциту, при величині D2=-110,381+3,503CD3+l,472CD19+l,408IgG6 прогнозують легкий ступінь ваги імунодефіциту, при значенні D3=70,5301+2,5840CD3+l,3588CD19+l,7866IgG середній ступінь ваги імунодефіциту, Де D1, D2, D3 - значення функцій; CD3 - вміст Т-лімфоцитів, CD 19 - вміст В-лімфоцитів; IgG- вміст імуноглобуліну G. Для оцінки імунного статусу використовують комплексний показник, алгоритм розрахунку якого заснований на використанні таксономічного підходу. За допомогою спеціальної згортки з безлічі приватних показників, що характеризують стан об'єкта дослідження з окремим, локальним критерієм, можна одержати інтегральний показник, що визначає стан об'єкта по загальному, глобальному критерію. Використовуючи модифікацію цього алгоритму, з'являється можливість при формуванні загального імунного статусу врахува ти відхилення від норми, як убік перевищення, так і убік зменшення, що важливо в діагностичних цілях. Спосіб, що заявляється, здійснюють у такий спосіб. Для дослідження імунітету необхідний забір у немовляти мікро кількості крові для дослідження. Результати дослідження відомі протягом 24 годин. У крові визначають показники клітинної і гуморальної ланок імунітету: CD3, CD19, IgG. Спосіб здійснений на групі в кількості 80 дітей. Застосовують метод кластерного аналізу, що дозволяє на підставі значень по ряду найбільш важливих для дослідження показників одержати розбивку на кластери, тобто схожі, однорідні групи. Для визначення якості розбивки на кластери використовують ряд функціоналів якості і статистичних критеріїв. Найбільш уживані з них: сума внутрішньокласових дисперсій, сума по парних внутрішньокласових відстаней, критерій Фішера. На підставі аналізу цих даних можна зробити висновки про те, наскільки розрізняються середні показники. Якщо для більшості чи для всіх показників, використовуваних в аналізі, середні істотно розрізняються, то якість розбивки на кластери вважається гарною. Крім того, значення F-статистики, отримані для кожного виміру, є іншим індикатором для визначення того, наскільки добре відповідає вимір (відрізняє) кластер. Якщо отримана розбивка на кластери незадовільна, то необхідно або вибрати інший метод кластеризації, або внести зміни до складу показників, додати нові чи усунути частин у показників, значення яких практично збігаються для об'єктів. На другому етапі використовують дискримінантний аналіз. Задача дискримінантного аналізу полягає в тому, що визначають приналежність об'єкта до кожного з кластерів (груп), що задані навчальними вибірками. Дискримінантний аналіз дозволяє вивчати розходження між двома чи більш групами об'єктів по декількох перемінних одночасно. Для перевірки якості отриманих дискримінантних функцій використовують X- статистику Уїлкса. Чим ближче значення X, до 0, тим краще розрізнення класів. Якщо Х прагне до 1, то ступінь розходження дуже низький, класи практично збігаються. Для перевірки якості розпізнавання об'єктів навчальних вибірок на основі побудованих дискримінантних функцій передбачена процедура розрахунку імовірності приналежності об'єкта до класу, порівняння результатів класифікації на основі апріорної інформації й у результаті використання дискримінантного аналізу. На третьому етапі здійснюють прогноз, тобто визначення приналежності нового об'єкта дослідження до одному з раніше сформованих кластерів. Для нового об'єкта дослідження визначають значення перемінних, вхідних у дискримінантні функції, розраховують значення дискримінантних функцій і з них визначають максимальні. Та дискримінантна функція, що буде мати максимальне значення для заданого набору перемінних, визначить відповідний клас. Аналіз імунного статусу проведений з урахуванням показників динаміки імунологічних факторів у здорових немовлят і дітей раннього віку (Э. Н. Шля хів, 1986). У роботі міжгруповий порівняльний аналіз імунного стану хворих новонароджених був проведений по інтегральному показнику для клітинної і гуморальної ланок імунітету за допомогою вищенаведеного алгоритму. Слід зазначити, що отримані інтегральні показники, що характеризують ступінь ваги станів для клітинної і гуморальної ланок імунітету між собою не зв'язані, оскільки коефіцієнт x , парної кореляції менше 0,3 і дорівнює 0,05. Прийнято вважати, що зв'язок виражений слабко, якщо x p 0,3. Потім застосовують метод кластерного аналізу, що дозволяє на підставі значень по ряду найбільш важливих для дослідження показників одержати розбивку на кластери, тобто однорідні схожі групи. На початку проведення кластерного аналізу потрібно з ряду показників виділити ті, розходження між якими у середніх значеннях будуть очевидними і будуть задовольняти якості кластерної розбивки. Цим вимогам задовольняють показники клітинної і гуморальної ланок імунітету: CD3, CD19 і IgG, що надалі і будуть використані для виділення кластерів і їхнього аналізу. Кожний із трьох кластерів відповідає групі хворих з відповідним ступенем тяжкості імунодефіциту. Так кластер 1 відповідає групі хворих із середнім ступенем ваги (ССВ), кластер 2 - групі хворих з легким ступенем важкості (ЛСТ) і кластер 3 - хворим з важким ступенем важкості (ВСТ) імунодефіциту. Для одержання прогнозованої моделі загального рівня імунітету використовують дискримінантний аналіз. Коефіцієнт l -Уїлкса ( l =0,07597) показав достатній рівень дискримінації кластерів, коли l » 0 , значення за критерієм Фішера F=70,958>Fтабл.(6,162)=2,09. Отримано три дискримінантні функції D1, D2, D3, для яких відповідні постійні були отримані при виділенні груп хворих з різним ступенем важкості імунодефіциту (ТСВ, ЛСВ і ВСВ). У такий спосіб: - для хворих із ТСТ маємо D1=-51,4849+2,4815CD3+0.9593CD19-0,0146IgG; - для хворих із ЛСТ маємо D2=-110,381+3,503CD3+l,472CD19+l,408IgG; - для хворих з ВСТ маємо D3=-70.5301+2.5840CD3+1.3588CD19+1.78661IgG. На основі отриманих трьох дискримінантних функцій можна здійснити прогноз стану загального імунітету по показниках CD3, CD19, IgG. Підставляючи конкретні значення цих показників в отримані три моделі, одержуємо значення функцій D1, D2, D3. Найбільше з цих значень укаже на групу з відповідним ступенем тяжкості імунодефіциту, до якого належить це спостереження. Перевірити якість прогнозування за допомогою дискримінантного аналізу можна на основі наявної апріорної інформації. Приклад 1. Дитина К., 2001р. народження. Діагноз: внутрішньоутробна інфекція: правобічна вогнищево-зливна (субтотальна) пневмонія, енцефаліт специфічної етіології (герпес, цитомегаловірус). Імунодефіцитний стан. Перинатальна гіпоксично - ішемічна поразка ЦНС, гострий період, важкий плин. Набряк головного мозку, стовбура мозку. Перивентрикулярна ішемія II ступеня. Синдром гноблення ЦНС, судорожний синдром. Сечокислий діатез. Гіпербілірубінемія змішаного генезу. Синдром поліорганної недостатності. Синдром затримки внутрішньоутробного розвитку, асиметричний варіант. Множинні стигми ембріогенезу. Методом ПЦР у лікворі виділений антиген вірусу простого герпесу II типу і цитомегалії, із крові - мікоплазма. Методом ІФА в крові визначені титри специфічних антител у відношенні відповідних збудників: До вірусу простого герпесу І/IІ типу - IgG-6.7 Ig M - відсутній, до цитомегаловирусу - IgG-2.9 Ig М - відсутній, до мікоплазми - IgG - відсутній Ig M - відсутній. Імунний статус IgA-2,0г/л; IgG-4,4r/n; Ig M-1,2г/л; Т -лімфоцити-24%; Т-хелпери -20%; Т -супресори - 20%; Імунорегуляторний індекс -1,0; Т-активні клітки - 10%; В-лімфоцити - 19%; ЦИК з 3,5% ПЕГ - 0,035од. опт. щільн.; 7% ПЭГ-0,045од.опт.щільн.; Комплемент-0,64од.опт.щільн.; Лімфоцитотоксичність - 11%; Гетерофільні гемолізини - 0,34од. опт. щільн. Висновок лікаря: відзначене різке зниження показників Т і В клітинного імунітету, різке зниження субпопуляції Т-лімфоцитів і Т-хелперів, що характерно для інтоксикацій організму, вір усних захворювань і зв'язаним з ними симптомокомплексом. Низьке значення імуноглобуліну класу G свідчить про гноблення імунної системи. При визначенні значення дискретної функції діагностований важкий ступінь імунодефіциту. Летальний результат на 11 добу життя. Приклад 2. Дитина Ш., 2001р. народження. Діагноз: внутрішньоутробна вогнищево-зливна пневмонія, важкий плин. Дихальна недостатність Пст. Псевдокісти головного мозку на тлі перенесеного внутрішньоутробного енцефаліту токсоплазмової етіології. Преперинатально гіпоксична - ішемічна поразка ЦНС, важкого ступеня, з набряком головного мозку, ранній відбудовний період. Синдром рухови х порушень. Постнатальна гіпотрофія 1-11 ступеня, змішаної етіології. Методом ПЦР із ліквору виділений антиген збудника токсоплазмозу, із крові - мікоплазмоз. Методом ІФА в крові визначені титри специфічних антитіл у відношенні конкретних збудників: До мікоплазми IgG-1,9 IgМ- відсутній, до токсоплазми - IgG-99,7 IgM - відсутній Імунний статус. Ig А-2.5г/л,. IgG-17.4r/n,. IgM-1.8 г/л., Т- лімфоцити - 48%,. Т-хелпери-20%; Т -супресори-14%; Імунорегуляторний індекс-1,43; Т-активні клітки-14%; В -лімфоцити-16%; ЦІК з 3,5% ПЕГ0,025од.опт.щільн.; 7% ПЕГ-0,030од.опт.щільн.; Комплемент-0,56од.опт.щільн.; Лімфоцитотоксичність-12%; Гетерофільні гемолізини - 0,29од.пот.щільн. Висновок лікаря: Виявлена недостатність клітинної ланки імунітету, що полягає в зниженні Т-лімфоцитів і їх імунорегуляторних субпопуляцій Т-хелперів і Т-супресорів, Т-активних кліток і комплементу, що свідчить про інтоксикацію організму, наявність інфекційного захворювання. При розрахунку значення дискретної функції по способу, що заявляється, діагностований середній ступінь ваги імунодефіциту. Інвалідізація (атрофія кори головного мозку). Приклад 3. Дитина С., 2001р.народження. Діагноз: перинатальна гіпоксично-ішемічна поразка ЦНС, гострий період, важкий плин. Синдром ліквородинамічних порушень. Перивентрикулярний набряк. Спинальна родова травма у верхньошийному відділі хребта. Розтягання в сегменті С1-С2 атланто-окципітальному сегменті. Пневмопатія. Персистуючі фетальні комунікації. Носійство хламідійної, мікоплазмової інфекції. Недоношеність П ступеня. Методом ПЦР із крові виділений антиген збудника токсоплазмозу, у змиві з трахеї - хламідіозу. Методом ІФА в крові не визначені титри специфічних антитіл у відношенні конкретних збудників. Імунологічний статус: IgA-1.8r/n; IgG-10,1г/л; Ig M-0.7г/л; Т - лімфоцити -47%; Т - хелпери- 38%; Т- супресори -18%; Імунорегуляторний індекс -2,1; Т-активні клітки-16%; В-лімфоцити - 22%; ЦІК з 3,5% ПЕГ 0,019од.опт.щільн.; 7% ПЕГ-0,030од.опт.щільн.; Комплемент - 0,6од.опт.щільн.; Лімфоцитотоксичність-17%; Гетерофільні гемолізини - 0,32од.опт.щільн. Висновок лікаря: відзначене зниження відносних показників клітинної ланки імунітету, природного комплементу, підвищення лімфоцитотоксичності, що характерно для інтоксикації. Визначений легкий ступінь імунодефіциту. Результат - видужання. Важка форма імунодефіциту в ди тини з внутрішньоутробними мікстами-інфекціями групи TORCH прогностичне несприятлива і вимагає визначених тактичних заходів від лікаря. На основі отриманих дискримінантних функцій при визначенні лише тільки трьох показників імунного статусу можливе здійснення прогнозу. Функції прості в практичному використанні.