Спосіб селективної ізоляції мікроорганізмів роду campylobacter із харчових продуктів

Cпосіб селективного виділення мікроорганізмів роду Campylobacter із харчових продуктів, який включає висів проб досліджуваного матеріалу на 3 coli contamination source // Rev. Lat. Amer. Microbiology. - 1989. - Vol. 31. - P. 271-273). На даний час за кордоном випускаються комерційні селективні домішки, що містять різні за складом та вмістом антибактеріальні речовини: "Oxoid" за складом бацитрацин - 5000 ОД, циклогексимід - 25 мг/л, колістин 5000 ОД, цефазолін 7,5 мг/л, новобіоцин 2,5 мг/л; Blaser Wang FD 006: поліміксин В - 1250 ОД, ванкоміцин - 5,0 мг/л, триметоприм - 5,0 мг/л, амфотерицин В - 1,0 мг/л, цефалотин - 7,5 мг/л; Preston: поліміксин В - 5000 ОД, рифампіцин - 10 мг/л, триметоприм - 10 мг/л, циклогексимід - 100 мг/л; Karmali: піруват натрію 100 мг/г, цефоперазон - 32 мг/л, ванкоміцин 20 мг/л, циклогексамид - 100 мг/л. Найбільш популярна комбінація по Skirrow: 10 мг/л ванкоміцину, 2500 МЕ/л поліміксину В, 5 мг/л триметоприму (Фотіна Т.І.,. Березовський А.В., Касяненко О.І., Дворська Ю.Є. Кампілобактеріоз птиці / Монографія - Суми. -2010.-140 а). Відомі методи селективної ізоляції недостатньо ефективні при виділенні кампілобактерій з харчових продуктів за рахунок того, що більшість компонентів селективних домішок не випускаються вітчизняною фармакологічною промисловість, а закордонного виробництва, що обумовлює значні матеріальні затрати на витратні матеріали. Найбільш близьким до запропонованого є спосіб селективної ізоляції мікроорганізмів роду Campylobacter (Іванов В.П. з співавт. в 1991 році), що включає спосіб включення до складу поживних середовищ селективної домішки наступного складу (мг/л): цефалексин - 30, рифампіцин - 10, три 65594 4 метоприм - 5, амфотерицин В - 2, інкубації посівів впродовж 24 годин при температурі +42 °С. Автори виявили більш інтенсивний ріст колоній, а частоту ізоляції кампілобактерій вдалося збільшити на 1116 %. (Инструкция по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза, 1989). Однак, відомий спосіб недостатньо ефективний за рахунок того, що не враховані дані резистентності циркулюючих збудників до антибактеріальних препаратів. В основу корисної моделі поставлена задача створити спосіб селективної ізоляції мікроорганізмів роду Campylobacter з харчових продуктів шляхом удосконалення відомого способу, забезпечити достовірність та ефективність досліджень, добитися збільшення частоти ізоляції кампілобактерій з харчових продуктів. Поставлену задачу вирішують створенням способу селективної ізоляції мікроорганізмів роду Campylobacter з харчових продуктів, що включає додавання до складу середовища поживного щільного для культивування кампілобактерій (ТУ У 24.4.-14332579-056:2010) домішки антибактеріальних препаратів, інкубації посівів в мікроаерофільних умовах впродовж 18-24 годин при температурі +37-42 °С, який, згідно з корисною моделлю, відрізняється тим, що замість комерційних селективних домішок закордонного виробництва додають суміш антибактеріальних препаратів вітчизняного виробництва, виготовлені за технологією і на обладнанні науково-виробничої фірми «Бровафарма» з урахуванням резистентності циркулюючих збудників даних препаратів (табл.). Таблиця Результати визначення бактеріостатичних концентрацій антибактеріальних препаратів до циркулюючих штамів мікроорганізмів Дослід (культура мікрорганізмів) Контроль (культура мікрорганізмів) № L. Концентрація L. moP. проS. P. monoS. препарату, nociC.jejuni+ E. coli multoбірки C. jejuni enteriti- Е. соlі multo- МПА citoge- enteritidis мкг/мл togeМПА + МПА cida ряду dis cida nes + МПА nes + МПА +МПА 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 основний розчин гентаміцину з концентрацією 1000 мкг/1 мл 7 7,81 + – – – + – + + + + + 8 3,91 + – + – + – + + + + + 9 1,95 + – + + + – + + + + + основний розчин колістину сульфату з концентрацією 3333 мкг/мл 4 208,312 – – – – – – + + + + + 5 104,156 – + + – – + + + + + 6 52,078 + – + + + – + + + + + 7 26,039 + – + + + – + + + + + 8 13,019 + + + + _ + + + + + основний розчин триметоприму з концентрацією 3333 мкг/мл 1 1666,50 – + – – + – + + + + + 2 833,25 + – – + – + + + + + 3 416,625 + + – – + – + + + + + 4 208,312 + + + + + – + + + + + 5 65594 6 Продовження таблиці 1 2 3 4 5 6 7 8 2500 1250 625 312,5 156,25 78,125 1 2 3 500 250 125 3 4 5 6 7 8 9 10 основний розчин цефалексин з концентрацією 20000 мкг/1 мл[ – – – – – – + + + – – + + + + – – – + + + + – – + + + + + – – + – + + + + + + + – + + основний розчин рифампіцину з концентрацією 1000 мкг/1мл + + + – – – + + + + + + – – + + + + + + + – + + 11 12 13 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Примітка: 1. «-» - ріст колоній бактерій відсутній; 2. «+» - ріст колоній бактерій на поверхні поживного середовища. Отримані дані дозволять підібрати ефективну селективну домішку для поживних середовищ з метою селективної ізоляції Campylobacter spp. з харчових продуктів, води та об'єктів зовнішнього середовища. Для селективної ізоляції Campylobacter spp. до складу поживних середовищ рекомендовано включати комбінацію антибактеріальних препаратів за складом: гентаміцин 2 мг/1 л для пригнічення росту L. monocitogenes; цефалексин 156 мг/1 л для пригнічення росту S. enteritidis та Е. соlі та рифампіцин 250 мг/1л для пригнічення росту P. multocidae. Запропонований спосіб здійснюється таким чином: Висів проб харчових продуктів на середовища поживного щільного для культивування кампілобактерій (ТУ У 24.4.-14332579-056:2010) з селективною домішкою антибактеріальних пре Комп’ютерна верстка М. Мацело паратів (гентаміцин 2 мг/1 л; цефалексин 156 мг/1л; рифампіцин 250 мг/1л) проводять за допомогою бактеріологічної петлі. Посіви інкубують в мікроаерофільних умовах впродовж 24-48 годин при температурі +37 °С. Спосіб селективної ізоляції мікроорганізмів роду Campylobacter із харчових продуктів з використанням домішки антибактеріальних препаратів запропонованого складу і концентрації забезпечує бактеріостатичну дію відносно до L. monocitogenes, S. enteritidis, E. coli P. multocidae та кокової мікрофлори та забезпечує тим додаткові умови для росту мікроорганізмів роду Campylobacter на поживних середовищах, що сприяє ізоляції та ідентифікації даних мікроорганізмів за характерними морфологічними ознаками колоній та сприяє підвищенню ефективності досліджень. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601