Спосіб прогнозування розвитку часто рецидивуючої інфекції вірусів простого герпесу першого та другого типу

Спосіб прогнозування розвитку часто рецидивуючої інфекції ВПГ 1/2, що включає проведення генетично-молекулярних досліджень у хворих на ВПГ 1/2 інфекцію, який відрізняється тим, що здійснюють генотипування LMP2, аналізують варіанти поліморфізму гена, що кодує LMP2, і на основі отриманих даних прогнозують ризик розвитку частоти рецидивів герпетичної інфекції І та II типу. (19) (21) u201107110 (22) 06.06.2011 (24) 26.12.2011 (46) 26.12.2011, Бюл.№ 24, 2011 р. (72) ЧОП'ЯК ВАЛЕНТИНА ВОЛОДИМИРІВНА, ДОСЕНКО ВІКТОР ЄВГЕНОВИЧ, ПОТЬОМКІНА ГАЛИНА ОЛЕКСАНДРІВНА, ПУКАЛЯК РОМАН МИХАЙЛОВИЧ, ПАВЛЮСТ ЛЮДМИЛА ПАВЛІВНА (73) ЛЬВІВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ ДАНИЛА ГАЛИЦЬКОГО 3 Поставлена задача вирішується тим, що у способі прогнозування розвитку часто рецидивуючої інфекції ВПГ 1/2, що включає проведення генетично-молекулярних досліджень у хворих на ВПГ 1/2 інфекцію, згідно з корисною моделлю, здійснюють генотипування LMP2, аналізують варіанти поліморфізму гена, що кодує LMP2, і на основі отриманих даних прогнозують ризик розвитку частоти рецидивів герпетичної інфекції І та II типу. Імунопатогенез рецидивуючої інфекції ВПГ 1/2 з проявами імунодефіцитних порушень характеризується наявністю у хворих гомозиготного поліморфного варіанту His/His гену LMP2, який контролює активність імунопротеосоми, що впливає на процесинг вірусних пептидів у фагоцитах, в подальшому може зумовлювати стійке формування інфекційно-автоімунної клінічної форми імунодефіцитних порушень. Запропонована корисна модель ілюструється рисунком, на якому відображена частота алельних варіантів гена LMP2 у практично здорових осіб, хворих на ВПГ 1/2 та хворих на ВПГ 1/2 із проявами імунодефіцитних порушень (ІДП). Спосіб прогнозування розвитку часто рецидивуючої інфекції ВПГ ½ здійснюють таким чином. Проводять молекулярно-генетичні дослідження хворих на інфекцію ВПГ 1/2. Матеріалом досліджень слугує венозна кров. Генотипування LMP2 здійснюють за допомогою методу полімеразноланцюгової реакції з наступним аналізом довжини рестрикційних фрагментів та оцінкою поліморфізму гена LMP2 за J.Vinasco [3]. У хворих на ВПГ 1/2 інфекцію аналізують різні варіанти можливої асоціації між генетичними нуклеотидами генів [аргінін-аргінін (Arg-Arg), аргінінгістидин (Arg-His), гістидин-гістидин (His-His)], які кодують LMP2, та ймовірністю розвитку герпесвірусної інфекції І та II типів, тяжкості її перебігу. Наявність у хворих на рецидивуючу інфекцію ВПГ 1/2 з проявами імунодефіцитних порушень гомозиготного варіанту His/His гену LMP2, який контролює активність імунопротеосоми, що впливає на процесинг вірусних пептидів у фагоцитах, в подальшому може зумовлювати стійке формування інфекційно-автоімунної клінічної форми імунодефіцитних порушень, а також може вказувати на існування у цих хворих генетично детермінованих імунодефіцитів. Для підтвердження ефективності способу прогнозування розвитку часто рецидивуючої інфекції ВПГ 1/2 були проведені молекулярно-генетичні дослідження здорових осіб, хворих на ВПН 1/2 та хворих на ВПГ 1/2 із проявами імунодефіцитних порушень. Для генотипування імунопротеосом LMP2 венозну кров набирали в стерильних умовах у моновети об'ємом 2,7 мл з калієвою сіллю етилендіамінтетраоцтової кислоти (11,7 мМ) як антикоагулянтом ("Sarstedt", Німеччина). З цільної 66177 4 крові, стабілізованої як вказано вище, виділяли ДНК з використанням наборів "Изоген" (Росія). Методом полімеразної ланцюгової реакції з наступним аналізом довжини рестрикційних фрагментів визначали Arg60His поліморфізм гена LMP2 за Vinasco J. з модифікаціями. Для цього ампліфікували ділянку зазначеного гена за допомогою пари специфічних праймерів: прямого (sense) - 5'CTTGAACCAGGGAGGCGAAGj ITG-3' і зворотного (antisense) 5'CAGCTGAACCAGAGAGTGCATAGT-3'. Ампліфікати гена LMP2 та його фрагменти, отримані в результаті рестрикції, розділяли в 2,5 % агарозному гелі, що містив бромистий етидій. Візуалізація ДНК після горизонтального електрофорезу (160 В протягом 40 хв.) проводилася за допомогою трансілюмінатора і програмного забезпечення ViTran ("Биоком", Росія). При проведенні аналізу поліморфізму гену, що кодує LMP2, встановлено, що переважаюча частота нуклеотидів алельних варіантів гену LMP2 у хворих на рецидивуючу інфекцію ВПГ 1/2 типів була Arg/His, а у хворих з проявами імунодефіцитних порушень був встановлений гомозиготний генотип - His/His, який не виявлявся у здорових та хворих на рецидивуючу інфекцію ВПГ 1/2 типів без проявів імунодефіцитних порушень. Як видно з діаграми, частота генотипів Arg/Arg, Arg/His та His/His становила в контрольній групі (практично здорових людей) відповідно - 83,4 %, 16,6 % та 0 відсотків; у хворих на рецидивуючу інфекцію ВПГ 1/2 домінував генотип Arg/His-60,8 %. Гомозиготний генотип His/His виявився у 30,8 % хворих на рецидивуючу ВПГ 1/2 інфекцію з проявами імунодефіцитних порушень, який не виявлявся в хворих на рецидивуючу інфекцію ВПГ 1/2 та здорових осіб. Спосіб прогнозування розвитку часто рецидивуючої інфекції ВПГ 1/2 дозволяє визначити клінічні та імунологічні особливості у хворих на рецидивуючу герпетичну інфекцію І та II типів та ранні діагностичні критерії формування одного з видів імунодефіцитних порушень, визначити тактику противірусної терапії в цих хворих. Джерела інформації: 1. Чоп'як В.В., Пукаляк P.M., Гончаров СВ., Косенко В.Е. Асоціація алельного поліморфізму гена імунопротеосоми LMP2 із важкістю перебігу герпетичної інфекції // Acta Medica Leopoliensia. - 2008. Vol.14, №1. - С.175-178. 2. KuzushitaN., Sugimoto Y., Sasaki Y., Hayashi N. Involvement of TAP2 and LMP7 gene polymorphism in HCV infection //Nippon Rinsho. 2001. - Vol.59. - P.1248-1253. 3. Vinasco J., Fraile A., Nieto A. et al. Analysis of LMP and TAP polymorphism in rheumatoid arthritis // Ann. Rheum. Dis.-1998. - Vol.57. - P.33-37. 5 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 66177 6 Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601