Спосіб отримання низькомолекулярного пептиду специфічного щодо хвороботворних мікобактерій

Реферат: Спосіб отримання низькомолекулярного пептиду специфічного щодо хвороботворних мікобактерій із лейкоцитів свиней на 7-8 добу після сенсибілізації антигеном. Він включає попередню сенсибілізацію тварин-донорів атиповими мікобактеріями, а низькомолекулярний білок отримують із спленоцитів на 30 добу. UA 71224 U (12) UA 71224 U UA 71224 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, зокрема ветеринарної медицини. Для профілактики туберкульозу в гуманній медицині основним методом залишається імунізація БЦЖ, проте в ветеринарній медицині використання цього препарату офіційно не дозволяється. Вище зазначене аргументує необхідність пошуку специфічних некласичних вакцинних засобів профілактики туберкульозу та специфічних імуностимуляторів. Прототипом корисної моделі може слугувати спосіб (Пат. № 36156, МПК А61К 39/00, опубл. 10.10.2008, бюл. № 19. Спосіб отримання трансфер-фактора "Гексаканіс-ТФ", специфічного щодо збудників лептоспірозу, аденовірозу, інфекційного гепатиту, парвовірусної інфекції та чуми м'ясоїдних. Ташута О.С, Скибіцький В.Г., Ташута С.Г., Пищик П.П.), згідно з яким препарат отримують на 7-8 добу із лімфоїдних органів свиней, попередньо імунізованих полівалентною вакциною. Складність використання такого способу для отримання низькомолекулярного пептиду специфічного щодо хвороботворних мікобактерій обумовлено відсутністю рекомендованих вакцинних препаратів проти туберкульозу сільськогосподарських тварин, що зумовлює стійке неблагополуччя серед сільськогосподарських тварин. В основу пропонованої корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб отримання низькомолекулярного пептиду специфічного щодо хвороботворних мікобактерій. Поставлена задача вирішується тим, що для сенсибілізації використовують овець-донорів, а як антиген - М. avium. Завись мікобактерій вводять підшкірно в дозі 5 мг бактеріальної маси кожній тварині. На 30 добу після першого введення антигену проводять оцінку стану специфічного імунітету за допомогою внутрішньошкірного тесту з використанням ППДтуберкуліну для ссавців чи птиць. За умов встановлення алергічної реакції на туберкулін тварин-донорів забивають. Від піддослідних овець відбирають селезінку в стерильний посуд, охолоджують до температури від +4 °С до +6 °С. Тканину селезінки дезагрегують у гомогенізаторі. Отриману суспензію фільтрують через стерильну капронову сітку, розводять 10 об'ємами стерильної дистильованої води, з попереднім додаванням антибіотиків: в дозі 100 3 3 ОД/см пеніциліну та 100 мкг/см стрептоміцину, ретельно перемішують та витримують 10-15 с. Ізотонію відновлюють додаванням 10 % натрію хлориду із розрахунку 0,9 мл розчину на 100 мл дистильованої води. Завись клітин осаджують центрифугуванням 1500 об/хв. протягом 10 хв. Спленоцитарну масу декантують, двічі промивають розчином Хенкса у співвідношенні 1:2-1:5 при центрифугуванні 1000 об/хв. Підраховують концентрацію клітин в суспензії спленоцитів у 3 камері Горяєва з розрахунку на 1 см . Спленоцитарну суспензію переносять у стерильні поліетиленові пробірки. Для руйнування клітин, суспензію дезінтегрують за допомогою ультразвуку при частоті 3 мА протягом 15 с. Отриманий екстракт спленоцитів обережно перемішують у діалізний мішок із проникністю пор 10 кД. Діаліз проводять протягом 24 год. при +4 °С при постійному перемішуванні на магнітній мішалці. Стерильність діалізату досягають фільтрацією суспензії в асептичних умовах через бактерійні фільтри з діаметром пор 0,22 мкм. Препарат розфасовують у стерильні флакони. Запропонований спосіб дає можливість отримати високоспецифічний імуноген щодо хвороботворних мікобактерій і, може знайти широке застосування для профілактики туберкульозу сільськогосподарських тварин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 Спосіб отримання низькомолекулярного пептиду специфічного щодо хвороботворних мікобактерій із лейкоцитів свиней на 7-8 добу після сенсибілізації антигеном, який відрізняється тим, що включає попередню сенсибілізацію тварин-донорів атиповими мікобактеріями, а низькомолекулярний білок отримують із спленоцитів на 30 добу. 50 Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1