Спосіб одержання днк-вмісного сорбенту

Спосіб одержання ДНК-вмісного сорбенту, який включає обробку сорбенту розчином ДНК, наступну сушку та промивку готового продукту, який відрізняється тим, що після сушки сорбент інкубують в середовищі абсолютного спирту з фіксуючим агентом не менше 12 годин при температурі вище 20°С. (19) (21) a200501788 (22) 28.02.2005 (24) 15.06.2006 (46) 15.06.2006, Бюл. № 6, 2006 р. (72) Снєжкова Єлизавета Олександрівна, Ніколаєв Володимир Григорович (73) Снєжкова Єлизавета Олександрівна, Ніколаєв Володимир Григорович (56) UA 60899, 28.03.2003 SU 1101737 A, 07.07.1984 3 76069 4 спосіб найбільш близький по технічній суті до споПриклад 2 собу, що заявляється, і заключається у нанесенні 750мг активованого сорбента СКН-2К (Vs по розчину ДНК на вуглецевий гемосорбент, сушці та бензолу 1,0см3/г, розмір гранул (0,5-1мм) змішують ультрафіолетовому опромінюванні висушеного з 10мл розчину ДНК (13мг ДНК), висушують у сорбенту в абсолютному спирті із послідуючим струмі холодного повітря та інкубують в бюксі з відмиванням готового продукту. Слабкою ланкою притертою кришкою з 20мл абсолютного спирту цього способу є стадія ультрафіолетового який містить 2% глютарового альдегіду або 2% опромінювання в середовищі абсолютного спирту. формальдегіду протягом 12 годин при 20°С. Для його здійснення необхідне конструювання Так само обробляли активований сорбент спеціального реактора, який повинен забезпечити ГСГД (Vs по бензолу 2,0 см3/г, розмір гранул (0,5надійність та безпечність опромінювання вуглеце1мм) та кісточкове вугілля КАУ (Vsno бензолу 0,5 вого гемосорбента. см3/г, розмір (0,5-1мм). Потім спирт вилучають за Задачею винаходу є вдосконалення технології допомогою воронки Бюхнера, інкубують, промиодержання ДНК-вмісного сорбента при збереженні вають та розраховують кількість десорбованої високого вмісту ДНК і сорбційних якостей матриці, ДНК, як описано у прикладі 1. Десорбція ДНК, що шляхом використання фіксуючого агенту для дорівнює або менше 50% обрано як критерій іммобілізації ліганда на активований сорбент. доцільності виконання методу. Бо слід вважати, Задачу винаходу вирішують завдяки тому, що що втрата більше ніж 50% ліганду економічно і іммобілізацію ліганда на активований сорбент випрактично необгрунтована. конують шляхом інкубації протягом не менше 12 % десорбції ДНК від її вихідної, нанесеної на годин при температурі не нижче 20°С в сорбент кількості наведено у таблиці 2: середовищі абсолютного спирту, що містить фіксуючий агент. Таблиця 2 Суть винаходу полягає в наступному: активований сорбент обробляють розчином ДНК, сушать, % десорбції ДНК потім інкубують в розчині фіксуючого агенту в абсорбент 2% розчин глютарово2% розчин солютному спирті не менше 12 годин при го альдегіду формальдегіду температурі не нижче 20°С і готовий продукт проСКН-2К 45 50 мивають. ГСГД 45 40 Суть винаходу розкривають наступні приклаКАУ 50 48 ди: Приклад 1 Таким чином при введенні в систему 750 мг активованого вугілля СКН- 2К (Vs по фіксуючого агенту вдається іммобілізувати на сор3 бензолу 1,0 см /г, розмір гранул (0,5-1мм) бент не менше 50 % від нанесеної ДНК при змішують з 10мл розчину ДНК (13мг ДНК) та інкубації 12 годин при 20°С. поміщають на чашку Петрі, висушують у струмі Приклад 3 холодного повітря та інкубують в бюксі з притер750мг активованого сорбента СКН-2К (Vs no тою кришкою з 20мл абсолютного спирту без бензолу 1,0 см3/г, розмір гранул (0,5-1мм) фіксуючого агента, протягом 12 годин при 20°С. змішують з 10мл розчину ДНК (13мг ДНК), висуПотім спирт вилучають за допомогою воронки шують у струмі холодного повітря та інкубують в Бюхнера. Так само обробляли 750мг активованого бюксі з притертою кришкою з 20мл абсолютного 3 вугілля ГСГД (Vs по бензолу 2,0см /г, розмір граспирту який містить 2% глютарового альдегіду або нул (0,5-1мм), кісточковий сорбент КАУ (Vs пo бен2% формальдегіду протягом 12 годин при 19°С. 3 золу 0,5см /г, розмір гранул (0,5-1мм). Так само обробляли активований сорбент Для визначення міцності зв'язку ДНК з матриГСГД (Vs по бензолу 2,0см3/г, розмір гранул (0,5цею, одержаний сорбент інкубують і промивають 1мм) та кісточкове вугілля КАУ (Vs по бензолу 50мл 0,15М р-ну NaCl, 50мл 1,5 М р-ну NaCl, и 6 М 0,5см3/г, розмір гранул (0,5-1мм). Потім спирт вир-ном сечовини. лучають за допомогою воронки Бюхнера, В етанолі та перелічених елюатах визначають інкубують, промивають та розраховують кількість концентрацію ДНК за методом Спіріна. Кількість десорбованої ДНК, як описано у прикладі 1. десорбованої ДНК визначають у прикладах як % десорбції ДНК від її вихідної, нанесеної на різницю між вихідною її кількістю, нанесеною на сорбент кількості наведено у таблиці 3: сорбент, та кількістю препарату, знайденого в етанолі та елюатах. Таблиця 3 % десорбції ДНК від її вихідної кількості, нанесеної на сорбент, наведено у таблиці 1: % десорбції ДНК сорбент 2 % розчин глютарово2 % розчин Таблиця 1 го альдегіду формальдегіду СКН-2К 55 57 сорбент % десорбції ДНК ГСГД 56 55 СКН-2К 95 КАУ 55 58 ГСГД 90 КАУ 95 Як видно із таблиці 1 іммобілізувати ДНК на матрицю практично не вдається. Таким чином при температурі нижче 20oС при інкубації 12 годин вдається іммобілізувати на сорбент менше 50% від нанесеної ДНК. 5 76069 6 Приклад 4 Так само обробляли активований сорбент 750мг активованого сорбента СКН-2К (Vs no ГСГД (Vs по бензолу 2,0см3/г розмір гранул (0,53 бензолу 1,0см /г, розмір гранул (0,5-1мм) змішують 1мм) та кісточкове вугілля КАУ (Vs пo бензолу з 10мл розчину ДНК (13мг ДНК), висушують у 0,5см3/г, розмір гранул (0,5-1мм). Потім спирт виструмі холодного повітря та інкубують в бюксі з лучають за допомогою воронки Бюхнера, притертою кришкою з 20мл абсолютного спирту інкубують, промивають та розраховують кількість який містить 2% глютарового альдегіду або 2% десорбованої ДНК, як описано у прикладі 1. формальдегіду протягом 11 годин при 20°С. % десорбції ДНК від її вихідної, нанесеної на Так само обробляли активований сорбент сорбент кількості наведено в таблиці 5: ГСГД (Vs по бензолу 2,0см3/г, розмір гранул (0,5-1 мм) та кісточкове вугілля КАУ (Vs по бензолу Таблиця 5 0,5см3/г, розмір гранул (0,5-1мм). Потім спирт вилучають за допомогою воронки Бюхнера, % десорбції ДНК інкубують, промивають та розраховують кількість сорбент 1 % розчин глютарово1 % розчин десорбованої ДНК, як описано у прикладі 1. го альдегіду формальдегіду % десорбції ДНК від її вихідної, нанесеної на СКН-2К 5 7 сорбент кількості наведено в таблиці 4: ГСГД 4 5 КАУ 10 11 Таблиця 4 Таким чином запропонованим способом отримують ДНК-вмісні сорбенти з високим змістом ДНК, приблизно 16мг на 1г матриці Приклад 6 Для оцінки збереження властивостей вихідних вуглецевих матриць синтезованих імуносорбентів проводять вивчення кінетики поглинання маркеравітаміну В12. Результати поглинання вітаміну Віз відображені в таблиці 6. Як видно з приведених даних , запропонований спосіб дозволяє отримати ДНК-вмісні вуглецеві гемосорбенти з високим вмістом ДНК при збереженні поглинальних властивостей активованих сорбентів та замінити стадію ультрафіолетового опромінювання в абсолютному спирті, яка потребує конструювання спеціального вибухонебезпечного реактору, на інкубацію в звичайному термостаті. Таблиця 6 % десорбції ДНК сорбент 2 % розчин глютарово2 % розчин го альдегіду формальдегіду СКН-2К 57 57 ГСГД 56 55 КАУ 58 58 Таким чином при інкубації менше 12 годин при температурі 20° С вдається іммобілізувати на сорбент менше 50 % від нанесеної ДНК. Приклад 5 750мг активованого сорбента СКН-2К (Vs пo бензолу 1,0см3/г, розмір гранул (0,5-1мм) змішують з 10мл розчину ДНК (13мг ДНК), висушують у струмі холодного повітря та інкубують в бюксі з притертою кришкою з 20мл абсолютного спирту який містить 1% глютарового альдегіду або 1% формальдегіду протягом 10 діб при 60°С. Кількість ДНК Тип вуглецевого сорбенна 1г сорбента, та у мг СКН-2К СКН-2К+ДНК, синтезований по способу, що заявляється СКН-2К+ДНК, синтезований по способу-прототипу Комп’ютерна верстка М. Клюкін 0 16 16 Кількість вітамину В12 (мкг), яка поглинута сорбентом у стандартних умовах із розчину, який містить 1000 мкг В12, протягом інкубації (хвил.) 5 15 30 60 250 500 750 815 225 460 700 720 230 470 Підписне 710 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 720