Спосіб виявлення одноклітинних паразитів у пробах жовчі

Спосіб виявлення одноклітинних паразитів у пробах жовчі, отриманих від пацієнта для лабора 3 85799 відно до винаходу на предметне скло наносять одну краплину (20-50мкл) відповідної проби жовчі, індукують у ній процес кристалізації, після завершення якого мікропрепарат досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу за методом поляризаційної флуоресценції, а тіла паразитів виявляють та оцінюють за характером світіння на фоні мікрокристалічних структур компонентів жовчі. Перелік фігур. 1. Картина поляризаційної флуоресценції мікропрепарату нативної жовчі в пробі А; 2. Світіння лямблій у краплині нативної жовчі в пробі В. 3. Світіння лямблій на фоні кристалізованої жовчі з проби В. 4. Характер світіння лямблій на фоні кристалів жовчі з проби С. Спосіб здійснюють наступним чином. Отримані під час діагностичного зондування проби жовчі, а саме порцію А з дванадцятипалої кишки, а також проби з жовчного міхура і печінки, що відповідають порціям В і С - відповідно, наносять окремо на предметне скло по одній краплині (20-50мкл) і ініціюють процес їх кристалізації. Після цього мікропрепарат кожною з проб досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу за методом поляризаційної флуоресценції, звертаючи увагу на характер світіння тіл паразитів на фоні мікрокристалічних структур компонентів жовчі. Приклад 1. У ході діагностичного зондування в зв'язку з підозрою на лямбліозну інвазію пацієнта P., 45p., отримано три проби жовчі: проба А з просвіту дванадцятипалої кишки, проба В - жовчного міхура і проба С, що містить печінкову жовч. По краплині кожної із проб (0,05мл) нанесли на предметне скло і відразу провели попереднє візуальне дослідження в люмінесцентному мікроскопі у поляризованому світлі за методом поляризаційної флуоресценції, а повторне дослідження проб здійснили відразу після кристалізації жовчі на предметному склі. Як результат дослідження, слід відмітити, що при мікроскопії нативної жовчі інформативність аналізу щодо виявлення одноклітинних паразитів була недостатньо високою. Так, наприклад, при поляризаційній флуоресценції нативної жовчі в пробі А виявленню лямблій заважало світіння домішок хімусу в мікропрепараті (Фіг.1). 4 А світіння лямблій у краплині нативної жовчі в пробі В хоч і було значно контрастнішим, ніж у пробі А, проте ідентифікації паразитів заважало вільне переміщення їх у товщі краплини жовчі на предметному склі (Фіг.2). На противагу наведеним на Фіг.1 і 2 прикладам, світіння лямблій на фоні кристалізованої жовчі, зокрема у пробах В і С (Фіг.3, 4), проявлялася особливо чітко і контрастно. Тіла одноклітинних паразитів, що флуоресціювали яскраво-жовтим світлом, були зміщені під час вирощування кристалів жовчі на поверхню кристалів або до їх краю, чим суттєво підвищувалась точність дослідження. Приклад 2. За запропонованим способом проведено лабораторно-діагностичне дослідження жовчі у 72 людей. У 67 із них були виявлені лямблії в усі х пробах отриманої при зондуванні жовчі, тоді як за традиційним способом, взятим за прототип, лямблії були виявлені лише у 54 випадках ((80,6±3,6)%), з яких позитивний результат аналізу мав місце у всіх пробах лише в 47 пацієнтів, що становило (70,1±4,6)% від кількості заражених людей. Отже, запропонований спосіб забезпечує інформативніший (ілюстративніший) і точніший результат паразитологічного аналізу на наявність у матеріалі від хворого, зокрема у діагностичних пробах жовчі, одноклітинних паразитів - збудників гіардіазу, ніж за способом-прототипом, і може знайти застосування в широкій лабораторній практиці паразитологічних досліджень. Джерела інформації, які слід взяти до уваги: 1. Russell Connally, Duncan Veal, James Piper / High resolution detection of fluorescently labeled microorganisms in environmental samples using timeresolved fluorescence microscopy. FEMS Microbiology Ecology, 2002, 41 (3), 239-245. 2. С.Г.Шаповальянц, А.Ю.Цкаев, Т.В.Иванова. Поляризационная микроскопия желчи в диагностике микрохоледохолитиаза / Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова, №5. - 1999. 3. А.С.Сонин. Введение в физику жидких кристаллов. М: Наука, 1983. 4. Антонов В.Ф., Смирнова Е.Ю., Шевченко Е.В. Липидные мембраны при фазовых превращениях. М.: Наука, 1992. 5. Р.И. Минц, Е.В.Кононенко. Жидкие кристаллы в биологических системах. М: Наука, 1992. 5 Комп’ютерна в ерстка В. Клюкін 85799 6 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601