Адитивна сіль мельдонію ацетилсаліцилової кислоти та її застосування як лікарського засобу

Реферат: Нові бетаїнові солі ацетилсаліцилової кислоти, а саме ацетилсаліцилат 4триметиламонійбутаноату (ацетилсаліцилат мелдонію), ацетилсаліцилат Z-карнітину та ацетилсаліцилат 3-(триметиламонійаміно)пропаноату (мелдоній). Застосування ацетилсаліцилату мелдонію як антитромбоцитарного засобу для лікування різних патологій, індукованих агрегацією тромбоцитів, протизапального та антигіперліпідемічного засобу. UA 106379 C2 (12) UA 106379 C2 UA 106379 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Галузь техніки, до якої відноситься винахід Даний винахід в загальних рисах відноситься до солей ацетилсаліцилової кислоти, та особливо до нових та корисних водорозчинних солей ацетилсаліцилової кислоти та до способу їх одержання. Рівень техніки Ацетилсаліцилова кислота являє собою широко вживаний лікарський препарат, головним чином, відомий своїми аналгетичними властивостями. Область застосування ацетилсаліцилової кислоти суттєво обмежується її малою розчинністю у воді (приблизно 0,3 %). Крім Li, Na, Mg та кальцієвих солей, розкритий ряд солей з основними амінокислотами (US 4,265,888). Кожній із зазначених солей властиві певні переваги та недоліки, тому було б вигідно мати у розпорядженні нові солі ацетилсаліцилової кислоти, з потенційно більш вигідними характеристиками. Оскільки самі сполуки типу бетаїну, що входять у клас нових солей ацетилсаліцилової кислоти, мають різну фармакологічну активність, зазначені нові солі ацетилсаліцилової кислоти можуть мати корисні властивості, на додаток до властивостей ацетилсаліцилової кислоти або бетаїнів, у тому числі нову фармакологічну активність. Мета винаходу Метою даного винаходу є розробка нового типу солей ацетилсаліцилової кислоти з певними сполуками типу бетаїну. Неочікувано й непередбачувано було виявлено, що самі солі ацетилсаліцилової кислоти з певними бетаїнами є гігроскопічними речовинами, які утворюють стабільні, водорозчинні кристалічні солі. Отже, метою даного винаходу є розробка солей ацетилсаліцилової кислоти, які мають високу розчинність у воді та у той же час мають виняткову стабільність та більший термін зберігання. Додатковою метою даного винаходу є розробка способу одержання зазначеної солі. Іншою метою даного винаходу є розробка адитивної мелдонієвої солі 3(триметиламонійаміно)пропаноату) ацетилсаліцилової кислоти для застосування як лікарського засобу. Ціль даного винаходу полягає в розробці лікарського продукту, а саме, адитивної мелдонієвої солі 3-(триметиламонійаміно)пропаноату ацетилсаліцилової кислоти (ацетилсаліцилат мелдонію), що має протизапальні, аналгетичні, жарознижуючі, протиревматичні, антигіперліпідемічні, антиатеросклеротичні, антиагрегаційні та антитромботичні властивості. Іншою метою даного винаходу є спосіб лікування суб'єкта, який потребує протизапальної, аналгетичної, жарознижуючої, протиревматичної, антигіперліпідемічної, антиатеросклеротичної, антиагрегаційної та антитромботичної терапії. Додатковою метою винаходу є одержання фармацевтичної композиції, що містить ацетилсаліцилат мелдонію (MASА) для зазначеної вище мети. Додаткові цілі винаходу стануть очевидними надалі, та інші цілі будуть очевидними для фахівця в цій галузі техніки. Опис кращих варіантів здійснення винаходу Далі слідують приклади різних солей та способів даного винаходу, та їх характеристики. Приклад 1. Адитивна сіль 4-триметиламонійбутаноату ацетилсаліцилової кислоти Дигідрат гама-бутиробетаїну (1,81 г, 10 ммоль) та ацетилсаліцилову кислоту (1,80 г, 10 ммоль) розчиняють в етанолі (20 мл). Розчин концентрують у вакуумі приблизно при 40 °C, до стану сиропу, який кристалізується при охолодженні. Кристалічну масу розтирають з ацетоном (50 мл), фільтрують, промивають ацетоном та сушать у вакуумі при кімнатній температурі. Вихід безбарвних кристалів з температурою плавлення 120-122 °C становить 3,04 г (93,5 %). Отримана речовина розчинна у воді та стабільна в умовах навколишнього середовища. 1 Спектр Н ЯМР (D2O, стандарт - ТМС) : 1,93-2,12 (2Н, м, СН2СН2СН2); 2,33 (3Н, с, СОСН3); 2,40 (2Н, т, J-7,0 Гц, СН2СОО-); 3,09 (9Н, с, CH3N); 3,14-3,37 (2Н, м, CH2N); 7,16 (1H, дд, J=1,1 та 8,1Гц, Н-3); 7,38 (1H, ддд, J=1,1, 7,6 та 7,6 Гц, Н-5); 7,56 (1Н, ддд, J=1,8, 7,6 та 8,1 Гц, Н-4); 7,79 м.д. (1H, дд, J=1,8 та 7,6 Гц, Н-6). C16H23NO6: Вирахувано, %: С 59,07; Н 7,13; N 4,30, Знайдено, %: С 59,17; Н 7,10; N 4,13. Нова сіль охарактеризована методом порошкової рентгенограми (випромінювання Сu К), у якій є піки при кутах 2: 5,10, 13,58, 13,83, 15,02, 15,17, 17,89, 19,33, 19,87, 21,85, 22,05, 23,32, 23,56, 23,92, 24,75, 25,55, 25,80, 27,05, 27,91, 30,25±0,2°. Структура зазначеної нової солі підтверджена методом рентгеноструктурного аналізу монокристалу (див. нижче). Кристали є моноклінними, при температурі експерименту Т = - 85 °C параметри комірки приймають значення: а = 13,1154(6) A, b=7,5092(3) А, с = 17,6451 (9) А, =104,728(2), 3 Об'єм комірки V=1693,5(1) А , просторова група Р21/а. Нижче вказаний фрагмент кристалічної структури адитивної солі 4-триметиламонійбутаноату ацетилсаліцилової кислоти: 1 UA 106379 C2 5 10 15 20 Приклад 2. Адитивна сіль L-карнітину ацетилсаліцилової кислоти L-Карнітин (1,61 г, 10 ммоль) та ацетилсаліцилову кислоту (1,80 г, 10 ммоль) розчиняють в етанолі (20 мл). Розчин концентрують у вакуумі приблизно при 40 °C, до стану сиропу, який кристалізується при охолодженні. Кристалічну масу розтирають з ацетоном (50 мл), фільтрують, промивають ацетоном та сушать у вакуумі при кімнатній температурі. Вихід безбарвних кристалів з температурою плавлення 90-94 °C становить 3,17 г (93 %). Речовина розчинна у 1 воді та стабільна в умовах навколишнього середовища. Спектр Н ЯМР (D2O, ТМС) : 2,32 (3Н, с, СОСН3); 2,53 (2Н, d, J = 6,6Гц, СН2СОО ; 3,18 (9Н, с, CH3N); 3,38-3,45 (2Н, м, CH2N); 4,59 (1H, квінт., J=6,1Гц, СНОН); 7,15 (1H, дд, J=1,1 та 8,1 Гц, Н-3); 7,37 (1H, ддд, J=1,1, 7,6 та 7,6 Гц, Н5); 7,56 (1H, ддд, J=1,8, 7,8 та 7,8 Гц, Н-4); 7,79 м.д. (1Н, дд, J=1,8 та 7,8 Гц, Н-6). C16H23NO7. Вирахувано, %: С 56,30; Н 6,79; N4,10, Знайдено: %: С 55,67; Н 6,85; N4,12. Нова соль охарактеризована методом порошкової рентгенограми (випромінювання Сu К), у якій є піки при кутах 2: 5,09, 12,62, 13,48, 13,84, 15,04, 17,82, 19,15, 19,77, 21,84, 22,56, 23,33, 23,92, 24,40, 25,17, 25,43, 26,14, 27,14, 29,50, 30,36±0,2°. Структура зазначеної нової солі підтверджена методом рентгеноструктурного аналізу монокристалу (див. нижче). Кристали є моноклінними, при температурі експерименту Т = - 85 °C параметри комірки приймають значення: а = 13,1342(6) A, b=7,6396(3) А, с = 17,737(1) А,  = 104,535(2), об'єм комірки 3 V=1722,8(2) А , просторова група Р21/а. Нижче вказаний фрагмент кристалічної структури адитивної солі L-карнітину ацетилсаліцилової кислоти: 25 30 Приклад 3. Адитивна сіль 3-(триметиламонійаміно)пропаноату ацетилсаліцилової кислоти (ацетилсаліцилат мелдонію) Розчиняють дигідрат 3-(триметиламонійаміно)пропаноату (INN - Мелдоній) (3,64 г, 20 ммоль) та ацетилсаліцилову кислоту (3,60 г, 20 ммоль) в гарячому пропанолі-2 (30 мл) та нагрівають при 50-55 °C впродовж 20 хвилин. Зупиняють нагрівання, та розчин перемішують 2 UA 106379 C2 5 10 15 при кімнатній температурі впродовж 3 годин. Суспензію перемішують додатково при 0 °C ще 3 годин, відфільтровують осад та промивають його холодним пропанолом-2 (2 рази по 15 мл). Зазначену сіль піддають перекристалізації з пропанолу-2. Отримують безбарвні кристали з температурою плавлення 104-106 °C. Вихід 4,12 г (63 %). 1 Спектр Н ЯМР (D2O, ТМС) : 2,34 (3Н, с, СОСН3); 2,51 (2Н, т, J=6,4 Гц, СН2СОО ; 3,16 (2Н, т, J=6,4 Гц, CH2N); 3,33 (9Н, с, CH3N); 7,17 (1H, дд, J=1,1 та 7,8 Гц, Н-3); 7,39 (1Н, ддд, J=1,1, 7,6 та 7,6 Гц, Н-5); 7,58 (1H, ддд, J=1,7, 7,6 та 7,8 Гц, Н-4); 7,81 м.д. (1Н, дд, J=1,7 та 7,6 Гц, Н-6). C15H22N2O6. Вирахувано, %: С 55,11; Н 6,79; N 8,58. Знайдено, %: С 55,15; Н 6,79; N 8,53. Нова соль охарактеризована методом порошкової рентгенограми (випромінювання Сu К), в якій є піки при кутах 2: 5,19, 13,12, 13,82, 14,10, 14,95, 15,36, 15,93, 18,11, 18,97, 19,74, 21,02, 22,15, 23,15, 23,65, 24,31, 25,18, 26,18, 26,58, 27,73, 28,36±0,2°. Структура зазначеної нової солі підтверджена методом рентгеноструктурного аналізу монокристалу (див. нижче). Кристали є моноклінними, при температурі експерименту Т = -85 °C параметри комірки приймають значення: а = 19,3399(8) A, b=7,1400(3) А, с = 35,137(2) А,  = 3 90,758(2), об'єм комірки V=4933,5(4) А , просторова група Р21/n. Фрагмент адитивної солі 3(триметиламонійаміно)пропаноату ацетилсаліцилової кислоти має наступну кристалічну структуру: 20 25 30 35 40 45 Дані рентгеноструктурного аналізу чітко показують, що карбоксильні групи 3,3,3триметиламоніймасляної кислоти, L-карнітину та 3-(триметиламонійаміно)-пропіонової кислоти в кристалічних структурах є протонованими, що, таким чином, показують перенос протону від ацетилсаліцилової кислоти і утворення солі. Значення довжини зв'язку С=О та С-O у карбоксильних групах становлять 1,215 та 1,305, відповідно, для кристалічної структури адитивної солі 3,3,3-триметиламоніймасляної кислоти та ацетилсаліцилової кислоти, 1,194 та 1,308 для кристалічної структури адитивної солі L-карнітину та ацетилсаліцилової кислоти та 1.219 та 1.321 для кристалічної структури адитивної солі 3-(триметиламонійаміно)-пропіонової кислоти та ацетилсаліцилової кислоти, відповідно. В свою чергу для всіх трьох кристалічних структур карбоксильної групи зв'язки С=О та С-О фрагменту ацетилсаліцилової кислоти є урівноваженими та мають значення приблизно 1,26. Фармакологічні властивості адитивної солі 3-(триметиламонійаміно)пропаноату ацетилсаліцилової кислоти (ацетилсаліцилат мелдонію). Передбачається, що нова речовина, розкрита в зазначеній заявці, може приймати різні поліморфні кристалічні форми та сольвати, переважно гідрати, які мають подібні біологічні властивості та тому включені в цю заявку як варіанти описаної речовини. Спочатку автори встановили, що ацетилсаліцилат мелдонію уповільнює та суттєво знижує розширення шкірних кровоносних судин, викликане нікотиновою кислотою. Подальші експерименти продемонстрували несподіване поліпшення фармакологічної активності ацетилсаліцилату мелдонію. Використані скорочення Для стислості в описі будуть використовуватися наступні скорочення: AdA - стимулятор артриту ASA - ацетилсаліцилова кислота С - холестерин CHD - ішемічна хвороба серця 3 UA 106379 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 СІС - циркулюючі імунні комплекси CL - клопідогрел CRP - С-реактивний білок DI - дипіридамол HDL - ліпопротеїн-холестерин високої густини LA - ларопіпрант LDL - ліпопротеїн-холестерин низької густини MASA мелдоній ацетилсаліцилат (хімічна назва: адитивна сіль 3(триметиламонійаміно)пропаноат ацетилсаліцилової кислоти. MD - мелдоній (INN) NA - нікотинова кислота, ніацин RA - ревматоїдний артрит TG - тригліцерид TR - Тритон WR1339 WBC - лейкоцити Речовини. NA (фірма Acros Chemicals), MD (Grindex), ASA (Acros Chemicals), LA (MK 0524, Cayman Chemicals), гідросульфат клопідогрелу для випробувань in vitro (Molean Corporation), CL для випробувань in vivo у вигляді Plavix™ (Sanofi-Aventis), DI (Sigma-Aldrich). Історія питання. Ацетилсаліцилова кислота являє собою найбільш широко вживаний лікарський препарат, добре відомий своїми протизапальними, аналгетичними, жарознижуючими та протиревматичними властивостями. У невеликих добових дозах ASA також застосовується як антитромбоцитарний засіб для пацієнтів з ризиком серцево-судинного захворювання (Eidelman R.S. і ін., Arch. Intern. Med. 2003; 163:2006-2010). Тромбоцити відіграють найголовнішу роль у розвитку атеросклерозу та неминучого утворення тромбу в ході ішемічної хвороби серця. Антитромбоцитарні засоби стають першорядними для попередження та терапії різних захворювань, у тому числі серцево-судинних, цереброваскулярних та периферичних артеріальних систем (Meadows T.A. і ін., Circ. Res. 2007; 100(9): 1261-75). Незважаючи на багаторічну популярність як антитромбоцитарного агенту, тепер ASA здобуває більше визнання в кардіології, завдяки своїм протизапальним властивостям (Ridker P.M. і ін., N. Engl. J. Med. 1997; 336:973-979). Отже, клінічні вимірювання таких запальних маркерів, як С-Реактивний білок (CRP), частково можуть відбивати показники атеросклерозу (Buckley D.I. і ін., Ann. Intern. Med. 2009; 151:483-495). Сучасні дані показують, що зменшення вмісту CRP попереджає явища CHD (Ridker P.M. і ін., Lancet 2009; 373:1175-82). Ross припустив, що атеросклероз є запальним захворюванням (Ross R., N. Engl. J. Med. 1999; 340:115-126). Ацетилсаліцилова кислота може не тільки впливати на запальний аспект атеросклерозу, але також може давати безпосередній внесок, стимулюючи зниження вмісту ліпідів (Kourounakis A.P. і ін., Experimental and Molecular Pathology, 2002, 73:135-138). Ніацин (NA) являє собою ефективний агент, що змінює вміст ліпідів, який попереджає атеросклероз та послабляє серцево-судинні явища. NA виявляє різноманітні ефекти на ліпопротеїн та протидіє тромбозу артерії, поліпшуючи ендотеліальну функцію, послабляє запалення, підвищує стабільність тромбоцитів та знижує ймовірність тромбозу (Rosenson R.C., Atherosclerosis 2003; 171:87-96). NA майже повністю попереджає внутрішньосудинне згортання крові, викликане тромбопластином та пітуітрином, що демонструє тромболітичний ефект ніацину (Baluda V.P., Кардиология 1974; 14(11): 105-7 (рос). Протитромболітичні властивості NA описано декількома авторами (Shestakov V.A., Пробл. Гематол. Перелив. Крови, 1977; 22(8):29-35. Chekalina S.I., Sov. Med. 1982(5): 105-8). Нікотинова кислота знижує ризик згортання крові (Chesney CM. і ін., Am. Heart J., 2000; 140:631-36). Ніацин інгібує агрегацію тромбоцитів (Lakin K.M., Фармакол. Токсикология, 1980; 43(5):5815). Поза організмом NA впливає на активність тромбоцитів, помірковано інгібуючи агрегування, та стимулюючи значне виділення простагландину, з головним чином, інтактною експресією головного рецептору тромбоцитів. Вплив NA є унікальним, відрізняючись від відомого ефекту антитромбоцитарних засобів, і дозволяє припустити можливість терапевтичних комбінацій (Serebruany V.L. і ін., Thrombosis and Haemostasis, 2010 (у друці). NA є ефективним агентом, що змінюють вміст ліпідів, що попереджає появу атеросклерозу та послабляє серцево-судинні явища (Drexel H., European Heart Journal Supplements 2006; Vol. 8, Suppl. F: F23-F29. Savel'ev A.A., Shershevskii M.G., Клін. Мед. (рос.) 1996; 74:48-52). Доступні три рецептури NA (з безпосереднім виділенням, із продовженим виділенням і тривалою дією). NA, що безпосередньо виділяється, асоційований з несприятливим припливом крові та підвищенням вмісту глюкози в крові. NA тривалої дії асоційований зі зниженим 4 UA 106379 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 припливом крові, але також з ризиком гепатотоксичних ефектів. Продовжене виділення спряжене з меншим припливом крові та низьким гепатотоксичним ризиком (McKenney J., Arch. Intern. Med. 2004; 164(7):697-705). Клінічне застосування NA обмежується шкірним припливом крові. Продовжене виділення нікотинової кислоти може сприяти регулюванню явищ припливу крові (Guyton J.R. і ін., J. Clin. Lipidol., 2009;3: 101-108). Для регулювання припливу крові були запропоновані ASA та інші нестероїдні протизапальні препарати (NSAID) з іншими фармацевтичними композиціями, щоб забезпечити поліпшення використання NSAID до дозування NA (WO9632942, WO9906052, WO2009142731). Нещодавно був запропонований специфічний антагоніст для простагландину D2 (Parhofer K.G., Vascular Health and Risk Management 2009; 5: 901-908) рецепторний підтип 1, ларопіпрант, у якості засобу для зниження припливу крові, викликаного NA (Lai E. та ін., Clin. Pharm. Ther. 2007; 81:849-857. Davidson M.H., Am. J.Cardiol. 2008; 101 [suppl]:14B-19B). Хоча додавання ларопіпранту буде знижувати частоту припливу крові, LA не може повністю виключити зазначений побічний ефект. Ларопіпрант не змінює дію нікотинової кислоти на ліпіди або інші побічні ефекти нікотинової кислоти. Отже, комбінація нікотинової кислоти з ларопіпрантом може забезпечити використання більш високих доз нікотинової кислоти і тому розкривається повний потенціал лікарського препарату (Parhofer K.G., Vascular Health and Risk Management 2009; 5:901-908, Olsson A.G., Expert Opinion on Pharmacotherapy 2010; 11(10): 17151726). Мелдоній являє собою лікарський препарат з певним корисним впливом на серце та судини. Деяка бажана активність MD була виявлена на тваринних моделях атеросклерозу (Veveris M, Smilsaraja В., Baltic J. Lab. Anim. Sci. 2000; 10,194-199. Veveris M. і ін., Baltic J. Lab. Anim. Sci. 2002; 12:116-122. Okunevich I.V., Ryzhenkov V.E., Патол. Физиол. Зксп. Тер. 2002; (2):24-7), і спостерігалася в клініках (Karpov R.S. і ін., Тер. Арх. 1991; 63(4):90-3). Крім того, було відзначено, що MD інгібує агрегацію тромбоцитів (Tsirkin V.I., Рос. Кардиол. ж-. 2002; 1:45-52). При двотижневому терапевтичному застосуванні перорального введення MD кроликам та собакам, після експериментального артеріального тромбозу, виявлений тромболітичний ефект (Logunova L. і ін., Экспер. клин, фармакотер. 1991; 19:91-98 (рос). Дані про профілактичний ефект MD для обмеження або попередження тромбозу не відомі. Приклад 4. Визначення гострої токсичності MASA Гостру токсичність MASA визначають на щурах Wistar та мишах ICR при пероральному введенні. Методики. Використовують самців мишей IRC з масою тіла 20-22 г і щурів Wistar, що мають масу 200-230 г. Для визначення гострої токсичності кожну дозу дають 6 тваринам, при цьому кожну наступну дозу збільшують на 500 мг/кг. Значення LD 50 обчислюють за Karber з використанням методу Akhila J.S. і ін. (Current Sci. 2007; 93:917-920), з модифікацією для визначення довірчого інтервалу дози (Turner R. У книзі "Методи тестування у фармакології" Screening Methods in Pharmacology, Acad. Press, New York, 1965, 61-63). Значення LD50 розраховують у такий спосіб: LD50= Найменша летальна доза для всіх тварин групи - (а x b)/N N - кількість тварин у кожній групі а - різниця доз b - середня смертність (летальність у двох сусідніх групах/2) MASA розчиняють негайно в 0,2 % агар-агарі та вводять перорально у шлунок через катетер. Об'єм введеної у такий спосіб рідини не перевищував 0,5 мл для мишей та 2 мл для щурів. Тварин спостерігають протягом 10 діб після введення дози. Результати. Результати щодо гострої токсичності MASA для мишей представлено в таблиці 1 і таблиці 2. 50 Таблиця 1 Гостра токсичність MASA для мишей (перорально п/о) Група 1 2 3 4 5 Доза, мг/кг (п/о) 1000 1500 2000 2500 3000 Кількість тварин у групі (N) 6 6 6 6 6 Летальність (n) 0 1 2 4 6 5 Середня смертність (b) Пробіт (a • b) 0,5 1,5 3 5 250 750 1500 2500 UA 106379 C2 LD50=3000 - (5000/6) = 2167 Коефіцієнт f при Р=0,05 для вказаного експерименту дорівнює 1,32, отже, довірчий інтервал для LD 50 становить 1642-2860 (мг/кг). 5 Після введення MASA токсична дія проявляється протягом перших годин, причому частина тварин помирають протягом перших 2 діб. Симптоми токсичності у тварин, що вижили, поступово слабшають і через 5-8 діб ці тварини не відрізняються від контрольних особин такого ж віку. Таким чином, знайдено, що значення LD50 для MASA (на мишах п/о) становить 2167 (1642-:-2860) мг/кг. Результати гострої токсичності MASA для щурів п/о представлені в таблиці 2 і таблиці 3. Таблиця 2 Гостра токсичність MASA для щурів (п/о) Група 1 2 3 4 Доза, мг/кг (п/о) 1500 2000 2500 3000 Кількість тварин у групі (N) 6 6 6 6 Летальність (n) 0 2 4 6 Середня смертність (b) Пробіт (a • b) 1 3 5 500 1500 2500 LD50=3000 - (4500/6) = 2250 LD50=3000 - (4500/6) = 2250 Коефіцієнт f при Р=0,05 для вказаного коефіцієнту дорівнює 1,308, отже, довірчий інтервал для LD50 становить 1720-:- 2944 (мг/кг). 10 15 20 Введення п/о дози 1500 мг/кг MASA щурам викликає короткочасне порушення особливостей харчування та руху, але тварини виживають. Токсичні симптоми починають зникати на третю добу післявведення. Таким чином, знайдено, що значення LD50 для MASA (на щурах п/о) становить 2250 (1720-:-2944) мг/кг. Зведення. Дослідження гострої токсичності продемонструвало, що MASA являє собою речовину з низькою токсичністю (LD50 > 2000 мг/кг для мишей і щурів, п/о). Гостра токсичність для ASA за даними фірм Boehringer Ingelheim Pharmaceuticalc, Inc., Acros Chemicals та SigmaAldrich становить 250 мг/кг для мишей та 200 мг/кг для щурів п/о, хоча фірма Bayer AG приводить значення LD50 для щурів п/о більше 1100 мг/кг та таким чином, MASA є менш токсичним, ніж ASA. Таблиця 3 Гостра токсичність MASA для мишей і щурів, N=6 Тварини Миші Щури 25 30 LD50 мг/кг, п/о (довірчий інтервал) 2167 (1642-:-2860) 2250 (1720-:-2944) Приклад 5. Дослідження аналгетичної, жарознижуючої та протизапальної активності MASA у порівняльних експериментах з ASA та MD При дослідженні аналгетичної, протизапальної та жарознижуючої дії MASA використовувалися загальноприйняті методи для оцінки NSAID. В експериментах використовували білих лабораторних мишей Mongrel та щурів Wistar. Тварин утримували в групах по 7-8 особин у відповідних клітках, у камерах штучного клімату, при 22±1 °C, відносній вологості 60±5 % та 12/12 годинних циклах чергування світла та темноти, при вільному доступі до їжі та воді. Були сформовані наступні групи для порівняння ефектів MASA з ASA та MD при пероральному прийомі: 6 UA 106379 C2 5 10 15 20 Водні розчини випробуваних речовин були приготовлені негайно. У кожній експериментальній серії була контрольна група тварин, які одержували п/о ідентичний об'єм води. Статистика. Дані обробляли з використанням програми Microsoft Excel 2007, і результати виражали як "середнє значення ± стандартна помилка вимірювання" (СПВ). Середні результати для різних груп зіставляли з використанням однофакторного дисперсійного аналізу (ANOVA) з повторним зіставленням (тест Tukey's). Імовірність Р