Стабілізована композиція, яка містить антитіло до рецептора інтерлейкіну-4 (іl-4r), варіанти

Реферат: Винахід стосується стабільної рідкої фармацевтичної композиції, що містить людське антитіло, яке специфічно зв'язується з рецептором людського інтерлейкіну-4 (hIL-4R), де антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 1, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO:5, а також ацетат, гістидин, сахарозу, полісорбат, аргінін. UA 111731 C2 (12) UA 111731 C2 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Галузь техніки Даний винахід стосується галузі композицій терапевтичних антитіл. Зокрема, даний винахід стосується галузі фармацевтичних композицій, що містять людські антитіла, які специфічно зв'язуються з рецептором людського інтерлейкіну-4. Список послідовностей Відповідний текстовий файл списку послідовностей ST.25 поданий одночасно з даною заявкою. Зміст текстового файлу включений в даний опис за допомогою посилання. Паперова копія списку послідовностей, яка є ідентичною за змістом відповідному текстовому файлу ST.25, включена як частина даної заявки. Попередній рівень техніки Терапевтичну макромолекули (наприклад, антитіла) необхідно складати таким чином, щоб не тільки робити молекули прийнятними для введення пацієнту, але також зберігати їх стабільність при зберіганні і подальшому застосуванні. Наприклад, терапевтичні антитіла у водному розчині схильні до руйнування, агрегації або небажаних хімічних модифікацій, якщо розчин складений неправильно. Стабільність антитіл в рідкій композиції залежить не тільки від виду ексципієнтів, що використовуються в композиції, але також від кількості і пропорцій ексципієнтів один відносно одного. Більше того, при отриманні рідкої композиції необхідно брати до уваги інші характеристики антитіл, крім стабільності. Приклади таких додаткових характеристик включають в'язкість розчину і концентрацію антитіл, яку може містити задана композиція, і візуальна якість або вигляд композиції. Отже, при складанні терапевтичних антитіл необхідно звертати велику увагу на отримання композиції, яка залишається стабільною, містить адекватну концентрацію антитіл і має відповідну в'язкість, а також інші характеристики, які допускають зручне введення композиції пацієнтам. Антитіла до альфа рецептору людського інтерлейкіну-4 (hIL-4Rα) є одним прикладом терапевтично важливої макромолекули, яка вимагає відповідного складання в композицію. Анти-hIL-4Rα антитіла є клінічно застосовними для лікування або профілактики захворювань, таких як атопічний дерматит і алергічна астма, і інших станів. Приклади анти-hIL-4Rα антитіла описані, зокрема, в патентах США 7605237; 7608693; 7465450 і 7186809; і патентних заявках США No. 2010-0047254 і 2010-0021476. Хоча анти-hIL-4Rα антитіла відомі, в даній галузі залишається необхідність в нових фармацевтичних композиціях, що містять анти-hIL-4Rα антитіла, які є досить стабільними і прийнятними для введення пацієнтам. Суть винаходу Даний винахід задовольняє приведену вище необхідність шляхом забезпечення фармацевтичних композицій, що містять людські антитіла, які специфічно зв'язуються з альфа рецептором людського інтерлейкіну-4 (hIL-4Rα). У одному аспекті забезпечують рідку фармацевтичну композицію, що містить: (i) людські антитіла, які специфічно зв'язуються з альфа рецептором людського інтерлейкіну-4 (hIL-4Rα); (ii) буфер; (iii) органічний співрозчинник; (iv) термічний стабілізатор і (v) знижувач в'язкості. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла забезпечують в концентрації близько 150 мг/мл50 мг/мл. У іншому варіанті здійснення винаходу антитіла забезпечують в концентрації близько 150 мг/мл15 мг/мл. У специфічному варіанті здійснення винаходу антитіла забезпечують в концентрації близько 150 мг/мл. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають будь-яку одну або більше послідовностей амінокислот SEQ ID NO:1-8. В одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають (a) варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR), що включає ділянки, які визначають комплементарність важких ланцюгів 1, 2 і 3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3), кожна, що включає послідовність SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3 і SEQ ID NO:4, відповідно; і (b) варіабельна ділянка легкого ланцюга (LCVR), що включає ділянки, які визначають комплементарність легкого ланцюга 1, 2 і 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3), кожна, що включає послідовність SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 і SEQ ID NO:8, відповідно. У специфічному варіанті здійснення винаходу антитіла включають HCVR і LCVR, кожний з яких включає послідовність амінокислот SEQ ID NO:1 і SEQ ID NO:5, відповідно. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають будь-яку одну або більше послідовностей амінокислот SEQ ID NO:9-16. В одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають (a) варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR), що включає ділянки, які визначають комплементарність важких ланцюгів 1, 2 і 3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3), кожна, що включає послідовність SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 і SEQ ID NO:12, відповідно; і (b) варіабельна ділянка легкого ланцюга (LCVR), що включає ділянки, які визначають комплементарність легкого ланцюга 1, 2 і 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3), кожна, що включає 1 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 послідовність SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 і SEQ ID NO:16, відповідно. У специфічному варіанті здійснення винаходу антитіла включають HCVR і LCVR, кожний з яких включає послідовність амінокислот SEQ ID NO:9 і SEQ ID NO:13, відповідно. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають будь-яку одну або більше послідовностей амінокислот SEQ ID NO:17-24. В одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають (a) варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR), що включає ділянки, які визначають комплементарність важких ланцюгів 1, 2 і 3 (HCDR1-HCDR2-HCDR3), кожна, що включає послідовність SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19 і SEQ ID NO:20, відповідно; і (b) варіабельна ділянка легкого ланцюга (LCVR), що включає ділянки, які визначають комплементарність легкого ланцюга 1, 2 і 3 (LCDR1-LCDR2-LCDR3), кожна, що включає послідовність SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23 і SEQ ID NO:24, відповідно. У специфічному варіанті здійснення винаходу антитіла включають HCVR і LCVR, кожна з яких включає послідовність амінокислот SEQ ID NO:17 і SEQ ID NO:21, відповідно. У одному варіанті здійснення винаходу pH рідкої композиції складає близько pH 5,90,5. У специфічному варіанті здійснення винаходу pH рідкої композиції складає близько pH 5,90,1. У одному варіанті здійснення винаходу рідкий фармацевтичний буфер включає один або більше буферів, які можуть тримати від pH близько 5,6 до близько 6,2. У одному варіанті здійснення винаходу рідка фармацевтична композиція містить систему буферів, яка включає щонайменше два буфери. У одному варіанті здійснення винаходу система буферів включає перший буфер, що має ефективний діапазон pH в інтервалі 3,6-5,6, і другий буфер, що має ефективний діапазон pH в інтервалі 5,5-7,4. У одному варіанті здійснення винаходу перший буфер має pKa близько 4,80,3, і другий буфер має pKa близько 6,00,3. У специфічному варіанті здійснення винаходу першим буфером є ацетатний буфер, і другим буфером є гістидиновий буфер. У одному специфічному варіанті здійснення винаходу ацетат знаходиться в концентрації 12,5 мМ1,9 мМ і гістидин в концентрації 20 мМ3 мМ. У одному варіанті здійснення винаходу органічним співрозчинником є неіонний полімер, що містить поліоксіетиленовий компонент. У деяких варіантах здійснення винаходу органічним співрозчинником є будь-який один або більше з полісорбату 20, полоксамеру 181 і поліетиленгліколю 3350. У специфічному варіанті здійснення винаходу органічним співполімером є полісорбат 20. У одному варіанті здійснення винаходу органічний співрозчинник знаходиться в концентрації від близько 0,20,03 % до близько 10,15 % "маси по об'єму" або "мас./об.", де, наприклад, 0,1 г/мл становить 10 %, і 0,01 г/мл становить 1 %. У специфічному варіанті здійснення винаходу органічним співрозчинником є полісорбат 20, який знаходиться в концентрації близько 0,2 %0,03 % мас./об. У одному варіанті здійснення винаходу термічним стабілізатором є цукор. У одному варіанті здійснення винаходу цукор вибирають з групи, яка складається з сахарози, маніту і трегалози. У специфічному варіанті здійснення винаходу термічним стабілізатором є сахароза. У одному варіанті здійснення винаходу термічний стабілізатор знаходиться в концентрації від близько 0,9 %0,135 % мас./об. до близько 10 %1,5 % мас./об. У специфічному варіанті здійснення винаходу термічним стабілізатором є сахароза в концентрації близько 5 %0,75 % мас./об. У одному варіанті здійснення винаходу понижувачем в'язкості є сіль, вибрана з групи, яка складається з гідрохлориду аргініну, тіоціанату натрію, тіоціанату амонію, сульфату амонію, хлориду амонію, хлориду кальцію, хлориду цинку і ацетату натрію. У специфічному варіанті здійснення винаходу понижувачем в'язкості є гідрохлорид L-аргініну. У одному варіанті здійснення винаходу понижувач в'язкості знаходиться до концентрації, яка складає не більше ніж 100 мМ. У одному варіанті здійснення винаходу понижувач в'язкості знаходиться в концентрації 50 мМ7,5 мМ. У іншому варіанті здійснення винаходу понижувач в'язкості знаходиться в концентрації близько 25 мМ3,75 мМ. У специфічному варіанті здійснення винаходу понижувачем в'язкості є 25 мМ3,75 мМ гідрохлориду L-аргініну. У одному варіанті здійснення винаходу в'язкість рідкої фармацевтичної композиції складає менше ніж або дорівнює близько 353,5 сПуаз. У одному варіанті здійснення винаходу в'язкість складає близько 21,513,5 сПуаз, близько 111,1 сПуаз або близько 8,50,85 сПуаз. У специфічному варіанті здійснення винаходу в'язкість рідкої фармацевтичної композиції складає близько 8,50,85 сПуаз. У одному варіанті здійснення винаходу осмолярність рідкої фармацевтичної композиції складає менше ніж близько 450 мОсм/кг. У одному варіанті здійснення винаходу осмолярність рідкої фармацевтичної композиції складає близько 29020 мОсм/кг. 2 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У одному варіанті здійснення винаходу щонайменше 90 % або щонайменше 95 % нативної форми анти-hIL-4Rα антитіл відновлюється з рідкої фармацевтичної композиції через шість місяців зберігання рідкої фармацевтичної композиції при 5 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У специфічному варіанті здійснення винаходу щонайменше 98 % нативної форми антитіл відновлюється через шість місяців зберігання при 5 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу щонайменше 90 % нативної форми антитіл відновлюється з рідкої фармацевтичної композиції через вісім тижнів зберігання при 45 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу менше ніж 45 % антитіл, які відновлюються з рідкої фармацевтичної композиції через вісім тижнів зберігання при 45 °C, знаходяться в кислій формі, що визначають катіонообмінною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу менше ніж близько 4 % антитіл, які відновлюються з рідкої фармацевтичної композиції через шість місяців зберігання при 25 °C, є агрегованими, що визначають обмінною ексклюзійною хроматографією. У одному аспекті забезпечують рідку фармацевтичну композицію, що містить: (i) близько 150 мг/мл50 мг/мл людських антитіл, які специфічно зв'язуються з hIL-4Rα, де антитіло включає варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR) і варіабельну ділянку легкого ланцюга (LCVR), що включають послідовність амінокислот SEQ ID NO:1 і SEQ ID NO:5, відповідно; (ii) близько 12,5 мМ2 мМ ацетату; (iii) близько 20 мМ3 мМ гістидину; (iv) близько 5 %0,75 % (мас./об.) сахарози; (v) близько 0,2 %0,03 % (мас./об.) полісорбату 20; і (vi) близько 25 мМ3,75 мМ аргініну, при pH близько 5,90,5. У одному варіанті здійснення винаходу рідка фармацевтична композиція має в'язкість від близько 8,50,85 сПуаз до близько 111,1 сПуаз. У специфічному варіанті здійснення винаходу в'язкість рідкої фармацевтичної композиції складає близько 8,50,85 сПуаз. У одному варіанті здійснення винаходу рідка фармацевтична композиція є фізіологічно ізотонічною. У одному варіанті здійснення винаходу осмолярність рідкої фармацевтичної композиції складає близько 29020 мОсм/кг. У одному варіанті здійснення винаходу щонайменше близько 98 % нативної форми антиhIL4-Rα антитіл відновлюється з рідкої композиції через шість місяців зберігання при 5 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу щонайменше близько 90 % нативної форми антиhIL4-Rα антитіл відновлюється з рідкої фармацевтичної композиції через вісім тижнів зберігання при 45 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу менше ніж близько 45 % антитіл, які відновлюються з рідкої фармацевтичної композиції через вісім тижнів зберігання при 45 °C, знаходиться в кислій формі, що визначають катіонообмінною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу менше ніж 4 % антитіл, які відновлюються з рідкої фармацевтичної композиції через шість тижнів зберігання при 25 °C, є агрегованими, що визначають обмінною ексклюзійною хроматографією. У одному аспекті забезпечують стабільну ізотонічну рідку фармацевтичну композицію з низькою в'язкістю, яка містить щонайменше 100 мг/мл стабільного антитіла анти-hIL4-Ra. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла знаходяться в концентрації близько 150 мг/мл50 мг/мл. У специфічному варіанті здійснення винаходу концентрація антитіл складає близько 150 мг/мл15 мг/мл. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають будь-яку одну або більше послідовностей амінокислот SEQ ID NO:1-8. В одному варіанті здійснення винаходу антитіла включають варіабельну ділянку важкого ланцюга (HCVR) і варіабельну ділянку легкого ланцюга (LCVR), де комбінація HCVR/LCVR включає ділянки, які визначають комплементарність важкого і легкого ланцюга (HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3), які включають послідовності амінокислот SEQ ID NO:2-3-4/SEQ ID NO:6-7-8, відповідно. У специфічному варіанті здійснення винаходу антитіла включають HCVR і LCVR, кожний з яких включає послідовність амінокислот SEQ ID NO:1 і SEQ ID NO:5, відповідно. У деяких варіантах здійснення винаходу композиція має в'язкість менше ніж 353,5 сПуаз, менше ніж 202 сПуаз, менше ніж 151,5 сПуаз або менше ніж 101 сПуаз. У специфічному варіанті здійснення винаходу рідка композиція має в'язкість близько 8,52,5 сПуаз. У одному варіанті здійснення винаходу композиція має осмолярність, яка є фізіологічно сумісною. У специфічному варіанті здійснення винаходу композиція має осмолярність 29020 мОсм/кг. 3 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У одному варіанті здійснення винаходу антитіла є стабільними протягом щонайменше близько шести місяців при близько 5 °C. У специфічному варіанті здійснення винаходу щонайменше близько 98 % антитіл зберігають свою природну конформацію протягом близько шести місяців зберігання при 5 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла є стабільними протягом щонайменше близько восьми тижнів зберігання при близько 45 °C. У специфічному варіанті здійснення винаходу щонайменше близько 90 % антитіл зберігають свою нативну конформацію через приблизно вісім тижнів зберігання при 45 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У специфічному варіанті здійснення винаходу менше ніж близько 45 % антитіл мають кислу форму через приблизно вісім тижнів зберігання при 45 °C, що визначають катіонообмінною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу антитіла залишаються стабільними протягом щонайменше близько шести місяців зберігання при близько 25 °C. У специфічному варіанті здійснення винаходу менше ніж близько 4 % антитіл мають агреговану форму після близько шести місяців зберігання при 25 °C, що визначають ексклюзійною хроматографією. У одному варіанті здійснення винаходу композиція включає буфер і має pH близько pH 5,90,5. У одному варіанті здійснення винаходу буфер включає ацетатний буфер і гістидиновий буфер. У специфічному варіанті здійснення винаходу ацетат знаходиться в концентрації 12,5 мМ1,9 мМ, і гістидин знаходиться в концентрації 20 мМ3 мМ. У одному варіанті здійснення винаходу композиція включає органічний співрозчинник в концентрації від близько 0,2 %0,03 % до близько 1 %0,15 % мас./об. У одному варіанті здійснення винаходу органічним співрозчинником є неіонний полімер, що містить поліоксіетиленовий компонент. У деяких варіантах здійснення винаходу органічним співрозчинником є будь-який один або більше з полісорбату 20, полоксамеру 181 і поліетиленгліколю 3350. У специфічному варіанті здійснення винаходу органічним співрозчинником є полісорбат 20 в концентрації близько 0,20,03 % мас./об. У одному варіанті здійснення винаходу композиція містить термічний стабілізатор в концентрації від близько 0,9 %0,135 % мас./об. до близько 101,5 % мас./об. У одному варіанті здійснення винаходу термічним стабілізатором є цукор. У одному варіанті здійснення винаходу цукор вибирають з групи, яка складається з сахарози, маніту і трегалози. У специфічному варіанті здійснення винаходу термічним стабілізатором є сахароза в концентрації близько 5 %0,75 % мас./об. У одному варіанті здійснення винаходу композиція містить понижувач в'язкості в концентрації, яка складає не більше ніж близько 100 мМ. У одному варіанті здійснення винаходу понижувачем в'язкості є аргінін. У специфічному варіанті здійснення винаходу понижувачем в'язкості є гідрохлорид L-аргініну в концентрації 25 мМ3,75 мМ. У специфічному варіанті здійснення винаходу стабільна ізотонічна рідка фармацевтична композиція з низькою в'язкістю має в'язкість близько 8,52,5 сПуаз і осмолярність близько 29020 мОсм/кг і включає: (i) 150 мг/мл15 мг/мл анти-hIL4-Rα антитіл, де антитіла включають HCVR і LCVR, кожна з яких включає послідовність амінокислот SEQ ID NO:1 і SEQ ID NO:5, відповідно; (ii) 12,5 мМ1,9 мМ ацетату; (iii) 20 мМ3 мМ гістидину; (iv) 0,2 %0,03 % мас./об. полісорбату 20; (v) 5 %0,75 % мас./об. сахарози; і (vi) 25 мМ3,75 мМ гідрохлориду L-аргініну. Відповідно до вказаного варіанту здійснення винаходу, (i) щонайменше близько 98 % антитіл зберігає свою нативну конформацію, що визначають ексклюзійною хроматографією при зберіганні при 5 °C протягом щонайменше близько шести місяців, (ii) щонайменше близько 90 % антитіл зберігають свою нативну конформацію, що визначають ексклюзійною хроматографією при зберіганні при 45 °C протягом щонайменше близько восьми тижнів, (iii) менше ніж близько 45 % антитіл мають кислу форму, що визначають катіонообмінною хроматографією, при зберіганні при 45 °C протягом близько восьми тижнів, і (iv) менше ніж близько 4 % антитіл мають агреговану форму, що визначають ексклюзійною хроматографією при зберіганні при 25 °C протягом близько шести місяців. У одному аспекті рідку фармацевтичну композицію за будь-яким з попередніх аспектів забезпечують в контейнері. У одному варіанті здійснення винаходу контейнером є скляний флакон. У іншому варіанті здійснення винаходу контейнером є мікроінфузор. У іншому варіанті здійснення винаходу контейнером є шприц. У одному специфічному варіанті здійснення винаходу шприц включає поршень, покритий фторвуглецем. У одному специфічному варіанті здійснення винаходу шприцом є низьковольфрамовий шприц. Інші варіанти здійснення даного винаходу будуть очевидні з огляду подальшого докладного опису. Докладний опис винаходу 4 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 До того, як даний винахід буде описаний, потрібно розуміти, що даний винахід не обмежений певними описаними способами і експериментальними умовами, такі способи і умови можуть варіюватися. Також потрібно розуміти, що термінологія, що використовується в даному описі, призначена тільки для цілей опису певних варіантів здійснення винаходу і не призначена для обмеження, оскільки об'єм даного винаходу обмежений тільки прикладеною формулою винаходу. Якщо не вказано інше, всі технічні і наукові терміни, що використовуються в даному описі, мають значення, що загалом розуміються середнім фахівцем в даній галузі, до якої належить даний винахід. Як використовується в даному описі, термін "близько", коли використовується з посиланням на певне вказане числове значення або діапазон значень, означає, що значення може варіюватися від вказаного значення на не більше ніж 1 %. Наприклад, як використовується в даному описі, вираз "близько 100" включає 99 і 101 і всі значення між (наприклад, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 і інш.). Хоча всі способи і матеріали, схожі або еквівалентні описаним в даному описі, можуть бути використані при здійсненні або тестуванні даного винаходу, далі описані переважні способи і матеріали. Всі публікації, приведені в даному описі, включені в даний опис за допомогою посилання для опису у всій їх повноті. Фармацевтичні композиції Як використовується в даному описі, вираз "фармацевтична композиція" означає комбінацію щонайменше одного активного інгредієнта (наприклад, малої молекули, макромолекули, сполуки і інш., яка здатна розвивати біологічний ефект у людини або тварини, що не є людиною), і щонайменше одного неактивного інгредієнта, який при комбінуванні з активним інгредієнтом або одним або більше додатковими неактивними інгредієнтами, підходить для терапевтичного введення людині або тварині, що не є людиною. Термін "композиція", як використовується в даному описі, означає "фармацевтичну композицію", якщо особливим чином не вказано інше. Даний винахід забезпечує фармацевтичні композиції, що містять щонайменше один терапевтичний поліпептид. Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу, терапевтичним поліпептидом є антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, які зв'язуються специфічно з альфа рецептором людського інтерлейкіну-4 (hIL-4Rα). Більш конкретно, даний винахід включає фармацевтичні композиції, які містять: (i) людські антитіла, які специфічно зв'язуються з hIL-4Rα; (ii) систему ацетатного/гістидинового буфера; (iii) органічний співрозчинник, яким є неіонна поверхнево-активна речовина; (iv) термічний стабілізатор, яким є вуглеводень; і (v) понижувач в'язкості. Специфічні приклади компонентів і композицій, включених в даний опис, детально описані нижче. Антитіла, які специфічно зв'язуються з hIL-4R Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть включати людське антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, який специфічно зв'язується з hIL-4Rα. Як використовується в даному описі, термін "hIL-4Rα" означає рецептор людського цитокіну, який специфічно зв'язується з інтерлейкіном-4 (IL-4). У певних варіантах здійснення винаходу антитіла, що містяться в фармацевтичних композиціях за даним винаходом, специфічно зв'язуються з позаклітинним доменом hIL-4Rα. Приклад послідовності амінокислот альфа рецептора людського IL-4 (hIL-4Rα) описаний в SEQ ID NO:25. Антитіла до hIL-4Rα описані в патентах США 7605237 і 7608693. Позаклітинний домен hIL-4Rα представлений послідовністю амінокислот SEQ ID NO:26. Термін "антитіло", як використовується в даному описі, звичайно стосується молекул імуноглобуліну, що включають чотири поліпептидні ланцюги, два важкі (Н) ланцюги і два легкі (L) ланцюги, пов'язані дисульфідними зв'язками, а також їх мультимерам (наприклад, IgM); однак, молекули імуноглобуліну, що складаються тільки з важких ланцюгів (тобто, що не мають легких ланцюгів), також охоплюються визначенням терміну "антитіло". Кожний важкий ланцюг включає варіабельну ділянку важкого ланцюга (скорочено в даному описі як HCVR або V H) і постійну ділянку важкого ланцюга. Постійна ділянка важкого ланцюга включає три домени, CH1, CH2 і CH3. Кожний легкий ланцюг включає варіабельну ділянку легкого ланцюга (скорочено в даному описі як LCVR або VL) і постійну ділянку легкого ланцюга. Постійна ділянка легкого ланцюга включає один домен (CL1). Ділянки VH і VL можуть бути додатково поділені на ділянки гіперваріабельності, що називаються ділянками, які визначають комплементарність (CDR), що перемежаються ділянками, які є більш консервативними, що називаються каркасними ділянками (FR). Кожна VH і VL складається з трьох CDR і чотирьох FR, розташованих з амінокінця до карбоксикінця в наступному порядку: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Якщо особливим чином не вказано інше, термін "антитіло", як використовується в даному описі, необхідно розуміти як такий, що охоплює повні молекули антитіл, а також їх 5 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антигензв'язувальні фрагменти. Термін "антигензв'язувальна частина" або "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла (або просто "частина антитіла" або "фрагмент антитіла"), як використовується в даному описі, стосується одного або більше фрагментів антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з hIL-4Rα або його епітопом. "Ізольоване антитіло", як використовується в даному описі, призначене для позначення антитіла, яке по суті вільне від інших антитіл, що мають різні антигенні специфіки (наприклад, виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з hIL-4Rα, є по суті вільним від антитіл, які специфічно зв'язуються з антигенами, іншими, ніж hIL-4Rα). Термін "специфічно зв'язується" або подібні означає, що антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент утворює комплекс з антигеном, який є відносно стабільним в фізіологічних умовах. Специфічне зв'язування може бути охарактеризоване константою -6 дисоціації щонайменше близько 1×10 M або більше. Способи визначення, чи можуть дві молекули специфічно зв'язуватися, добре відомі в даній галузі і включають, наприклад, рівноважний діаліз, поверхневий плазмоновий резонанс і подібні. Виділене антитіло, яке специфічно зв'язується з hIL-4Rα, може, однак, перехресно взаємодіяти з іншими антигенами, такими як молекули IL-4R інших видів (ортологи). У контексті даного винаходу мультиспецифічні (наприклад, біспецифічні) антитіла, які зв'язуються з hIL-4Rα, а також з одним або більше додатковими антигенами, вважаються "специфічно зв'язувальними" hIL-4Rα. Більше того, виділене антитіло може бути по суті вільним від інших клітинних матеріалів або хімічних речовин. Приклади анти-hIL-4Rα антитіл, які можуть бути включені в фармацевтичні композиції за даним винаходом, представлені в US 7605237 і US 7608693, опис яких включений за допомогою посилання у всій їх повноті. Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу анти-hIL-4Rα антитіло являє собою людський IgG1, що включає варіабельну ділянку важкого ланцюга, якою є підтип IGHV39, і варіабельна ділянка легкого ланцюга, якою є підтип IGKV2-28 (див. Barbie and Lefranc, The Human Immunoglobulin Kappa Variable (IGKV) Genes and Joining (IGKJ) Segments, Exp. Clin. Immunogenet. 1998; 15:171-183; і Scaviner, D. et al., Protein Displays of the Human Immunoglobulin Heavy, Kappa and Lambda Variable and Joining Regions, Exp. Clin. Immunogenet., 1999; 16:234240). У деяких варіантах здійснення винаходу анти-hIL-4Rα включає щонайменше одну заміну амінокислоти, яка приводить до зміни заряду на виставленій поверхні антитіла відносно вихідної послідовності IGHV3-9 або вихідної послідовності IGKV2-28. Вихідні послідовності IGHV3-9 і IGKV2-28 і позначення положень номерів амінокислот, представлені в даному описі, відповідають міжнародній інформаційній системі Immunogenetics (IMGT), як описано в Lefranc, M.-P., et al., IMGT®, the international ImMunoGeneTics information®, Nucl. Acids Res, 37, D1006D1012 (2009). У деяких варіантах здійснення винаходу поверхня, що піддається впливу, включає ділянку, яка визначає комплементарність (CDR). У деяких варіантах здійснення винаходу заміну або заміни амінокислот вибирають з групи, яка складається з (a) основної амінокислоти, заміненої нейтральною амінокислотою в рамках CDR2 (наприклад, в положенні 58) IGHV3-9, (b) нейтральної амінокислоти, заміненої кислою амінокислотою в рамках CDR3 (наприклад, в положенні 107) IGHV3-9, (с) нейтральної амінокислоти, заміненої основною амінокислотою в рамках CDR1 (наприклад, в положенні 33) IGKV2-28. Унікальні перестановки в розподілі заряду антитіла, особливо на межі з навколишнім середовищем (таким як, наприклад, в CDR) очікувано створюють непередбачувані умови для стабільності антитіла в розчині. У деяких варіантах здійснення винаходу анти-hIL-4Rα антитіло включає щонайменше одну заміну амінокислот, яка створює зміну деформації скручування в каркасній ділянці антитіла відносно вихідної послідовності IGHV3-9 або вихідної послідовності IGKV2-28. У деяких варіантах здійснення винаходу заміну або заміни амінокислот вибирають з групи, яка складається з (a) проліну, заміненого непроліновою амінокислотою в каркасній ділянці 3 (FR3) (наприклад, в положенні 96) IGHV3-9, і (b) непролінової амінокислоти, заміненої проліном в каркасній ділянці 2 (FR2) (наприклад, в положенні 46) IGKV2-28. Зміни здатності пептидного ланцюга обертатися, особливо в галузі каркасної ділянки, що впливає на взаємодію CDR з розчинником, ймовірно, можуть створити непередбачувані умови для стабільності антитіла в розчині. Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу, анти-hIL-4Rα антитіла або їх антигензв'язувальний фрагмент включають ділянку, що визначає комплементарність важкого ланцюга (HCDR) 1 SEQ ID NO:2, HCDR2 SEQ ID NO:3 і HCDR3 SEQ ID NO:4. У певних варіантах здійснення винаходу анти-hIL-4Rα антитіла або їх антигензв'язувальний фрагмент включають HCVD SEQ ID NO:1. 6 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу анти-анти-hIL-4Rα або його антигензв'язувальний фрагмент включають ділянку, що визначає комплементарність легкого (каппа) ланцюга (LCDR) 1 SEQ ID NO:6, LCDR2 SEQ ID NO:7 і LCDR3 SEQ ID NO:8. У певних варіантах здійснення винаходу анти-hIL-4Rα антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти включають LCVD SEQ ID NO:5. Відповідно до певних інших варіантів здійснення даного винаходу анти-hIL-4Rα антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти включають HCDR1 SEQ ID NO:10, HCDR2 SEQ ID NO:11, HCDR3 SEQ ID NO:12, LCDR1 SEQ ID NO:14, LCDR2 SEQ ID NO:15 і LCDR3 SEQ ID NO:16. У певних варіантах здійснення винаходу анти-hIL-4Rα антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти включають HCVD SEQ ID NO:9 і LCVD SEQ ID NO:13. Відповідно до певних інших варіантів здійснення даного винаходу анти-hIL-4Rα антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти включає HCDR1 SEQ ID NO:18, HCDR2 SEQ ID NO:19, HCDR3 SEQ ID NO:20, LCDR1 SEQ ID NO:22, LCDR2 SEQ ID NO:23 і LCDR3 SEQ ID NO:24. У певних варіантах здійснення винаходу анти-hIL-4Rα антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти включають HCVD SEQ ID NO:17 і LCVD SEQ ID NO:21. Необмежуючі приклади антитіл, що використовуються в прикладах в даному описі, називають як "mAb1". Вказані антитіла також представлені в US 7608693 як H4H098P. mAb1 (H4H098P) включає пару послідовностей амінокислот HCVR/LCVR, SEQ ID NO:1/5, і HCDR1HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 домени, представлені SEQ ID NO:2-3-4/SEQ ID NO:6-7-8. Інші необмежувальні приклади антитіл, які можуть бути використані при здійсненні даного винаходу, називають як "mAb2". Вказані антитіла також представлені в US 7608693 як H4H083P. mAb2 (H4H083P) включає пару послідовностей амінокислот HCVR/LCVR, що має SEQ ID NO:9/13, і HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 домени, представлені SEQ ID NO:1011-12/SEQ ID NO:14-15-16. Ще одним необмежуючим прикладом антитіла, яке може бути використане при здійсненні даного винаходу, є "mAb3". Вказане антитіло також представлене в US 7608693 як H4H095P. mAb3 (H4H095P) включає пару послідовностей амінокислот HCVR/LCVR, що мають SEQ ID NO:17/21, і HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 домени, представлені SEQ ID NO:1819-20/SEQ ID NO:22-23-24. Кількість антитіл або їх антигензв'язувальних фрагментів, що міститься в фармацевтичних композиціях за даним винаходом, може варіюватися залежно від специфічних бажаних властивостей композицій, а також певних обставин і цілей, для яких призначене застосування композицій. У певних варіантах здійснення винаходу фармацевтичні композиції є рідкими композиціями, які можуть містити від близько 10010 мг/мл до близько 20020 мг/мл антитіла; від близько 11011 мг/мл до близько 19019 мг/мл антитіла; від близько 12012 мг/мл до близько 18018 мг/мл антитіла; від близько 13013 мг/мл до близько 17017 мг/мл антитіла; від близько 14014 мг/мл до близько 16016 мг/мл антитіла; близько 15015 мг/мл антитіла. Наприклад, композиції за даним винаходом можуть включати близько 90 мг/мл; близько 95 мг/мл; близько 100 мг/мл; близько 105 мг/мл; близько 110 мг/мл; близько 115 мг/мл; близько 120 мг/мл; близько 125 мг/мл; близько 130 мг/мл; близько 131 мг/мл; близько 132 мг/мл; близько 133 мг/мл; близько 134 мг/мл; близько 135 мг/мл; близько 140 мг/мл; близько 145 мг/мл; близько 150 мг/мл; близько 155 мг/мл; близько 160 мг/мл; близько 165 мг/мл; близько 170 мг/мл; близько 175 мг/мл; близько 180 мг/мл; близько 185 мг/мл; близько 190 мг/мл; близько 195 мг/мл або близько 200 мг/мл антитіла або його антигензв'язуючого, які специфічно зв'язуються з hIL-4Rα. Ексципієнти і pH Фармацевтичні композиції за даним винаходом включають один або більше ексципієнтів. Термін "ексципієт", як використовується в даному описі, означає будь-який нетерапевтичний засіб, що додається до композиції для забезпечення бажаної консистенції, в'язкості і стабілізуючого ефекту. У певних варіантах здійснення винаходу фармацевтична композиція за винаходом містить щонайменше один органічний співрозчинник типу і в кількості, яка стабілізує антитіла hIL-4Rα в умовах недбалого поводження, таких як, наприклад, струшування. У деяких варіантах здійснення винаходу під "стабілізує" розуміють запобігання утворенню більше ніж 2 % агрегованих антитіл від загальної кількості антитіл (на молярній основі) при недбалому поводженні. У деяких варіантах здійснення винаходу недбалим поводженням є струшування розчину, що містить антитіла і органічний співрозчинник, протягом близько 120 хвилин. У певних варіантах здійснення винаходу органічним співрозчинником є неіонна поверхневоактивна речовина, така як алкілполі(етиленоксид). Специфічні неіонні поверхнево-активні речовини, які можуть бути включені в композиції за даним винаходом, включають, наприклад, полісорбати, такі як полісорбат 20, полісорбат 28, полісорбат 40, полісорбат 60, полісорбат 65, 7 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 полісорбат 80, полісорбат 81 і полісорбат 85; полоксамери, такі як полоксамер 181, полоксамер 188, полоксамер 407 або поліетиленгліколь (PEG). Полісорбат 20 також відомий як TWEEN 20, монолаурат сорбіту і монолаурат поліоксіетиленсорбіту. Полоксамер 181 також відомий як PLURONIC F68. Кількість органічного співрозчинника, що міститься в фармацевтичних композиціях за даним винаходом, може варіюватися залежно від специфічних властивостей, бажаних для композицій, а також від певних обставин і цілей, для яких призначене застосування композицій. У певних варіантах здійснення винаходу композиції можуть містити від близько 0,10,01 % до близько 20,2 % поверхнево-активної речовини. Наприклад, композиції за даним винаходом можуть включати близько 0,09 %; близько 0,10 %; близько 0,11 %; близько 0,12 %; близько 0,13 %; близько 0,14 %; близько 0,15 %; близько 0,16 %; близько 0,17 %; близько 0,18 %; близько 0,19 %; близько 0,20 %; близько 0,21 %; близько 0,22 %; близько 0,23 %; близько 0,24 %; близько 0,25 %; близько 0,26 %; близько 0,27 %; близько 0,28 %; близько 0,29 % або близько 0,30 % полісорбату 20 або полоксамеру 181. Наприклад, композиції за даним винаходом можуть включати близько 0,5 %; близько 0,6 %; близько 0,7 %; близько 0,8 %; близько 0,9 %; близько 1 %; близько 1,1 %; близько 1,2 %; близько 1,3 %; близько 1,4 %; близько 1,5 %; близько 1,6 %; близько 1,7 %; близько 1,8 %; близько 1,9 % або близько 2,0 % PEG 3350. Приклади органічних співрозчинників, які стабілізують антитіла hIL-4Rα, включають 0,20,02 % полісорбату 20, 0,20,02 % полоксамеру 181 або 10,1 % PEG 3350. Фармацевтичні композиції за даним винаходом також можуть містити один або більше термічних стабілізаторів типу і в кількості, які стабілізують антитіла hIL-4Rα в умовах термічного стресу. У деяких варіантах здійснення винаходу термін "стабілізує" означає підтримування більше ніж близько 92 % антитіл в нативній конформації, коли розчин, що містить антитіла і термічний стабілізатор, зберігають при близько 45 °C протягом до близько 28 днів. У деяких варіантах здійснення винаходу "стабілізує" означає, що менше ніж близько 5 % антитіл агреговані, коли розчин, що містить антитіла і термічний стабілізатор, зберігають при близько 45 °C протягом до близько 28 днів. У певних варіантах здійснення винаходу термічним стабілізатором є цукор або цукровий спирт, вибраний з сахарози, трегалози і маніту, або будь-якої їх комбінації, кількість яких, що міститься в композиції, може варіюватися залежно від специфічних обставин і призначеного застосування, для якого використовується композиція. У певних варіантах здійснення винаходу композиції можуть містити від близько 2,5 % до близько 10 % цукру або цукрового спирту; від близько 3 % до близько 9,5 % цукру або цукрового спирту; від близько 3,5 % до близько 9 % цукру або цукрового спирту; від близько 4 % до близько 8,5 % цукру або цукрового спирту; від близько 4,5 % до близько 8 % цукру або цукрового спирту; від близько 5 % до близько 7,5 % цукру або цукрового спирту; від близько 5,5 % до близько 7 % цукру або цукрового спирту або від близько 6,0 % до близько 6,5 % цукру або цукрового спирту. Наприклад, фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть включати близько 2,50,375 %; близько 3 %0,45 %; близько 3,5 %0,525 %; близько 4,0 %0,6 %; близько 4,5 %0,675 %; близько 5,0 %0,75 %; близько 5,5 %0,825 %; близько 6,0 %0,9 %; близько 6,5 %0,975 %; близько 7,0 %1,05 %; близько 7,5 %1,125 %; близько 8,0 %1,2 %; 8,5 %1,275 %; близько 9,0 %1,35 % або близько 10,0 %1,5 % цукру або цукрового спирту (наприклад, сахарози, трегалози або маніту). Фармацевтичні композиції за даним винаходом також можуть включати буфер або систему буферів, які призначені для підтримування стабільного pH і для поліпшення стабільності hIL4Rα антитіл. У деяких варіантах здійснення винаходу під "стабілізує" розуміють, що менше ніж 3,0 %0,5 % антитіл агрегуються, коли розчин, що містить антитіла і буфер, зберігають при близько 45 °C протягом до близько 14 днів. У деяких варіантах здійснення винаходу під "стабілізує" розуміють, що менше ніж 3,7 %0,5 % антитіл агреговані, коли розчин, що містить антитіла і буфер, зберігають при близько 25 °C протягом близько 6 місяців. У деяких варіантах здійснення винаходу під "стабілізує" розуміють, що щонайменше 95 %0,5 % антитіл знаходиться в їх нативній конформації, що визначають ексклюзійною хроматографією, коли розчин, що містить антитіла і буфер, зберігають при близько 45 °C протягом до близько 14 днів. У деяких варіантах здійснення винаходу під "стабілізує" розуміють, що щонайменше 96 %0,5 % антитіл знаходиться в їх нативному стані, що визначають ексклюзійною хроматографією, коли розчин, що містить антитіла і буфер, зберігають при близько 25 °C протягом до близько 6 місяців. У деяких варіантах здійснення винаходу під "стабілізує" розуміють, що щонайменше 62 %0,5 % антитіл знаходиться в їх нейтральній конформації, що визначають катіонообмінною хроматографією, коли розчин, що містить антитіла і буфер, зберігають при близько 45 °C протягом до близько 14 днів. У деяких варіантах здійснення винаходу під "стабілізує" розуміють, 8 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 що щонайменше 54 %0,5 % антитіл знаходиться в їх нейтральній конформації, що визначають катіонообмінною хроматографією, коли розчин, що містить антитіла і буфер, зберігають при близько 25 °C протягом до близько 6 місяців. Під "нейтральною конформацією", розуміють фракцію антитіл, яка елюює з іонообмінною смоли в головному піку, який звичайно обмежений більш "лужними" піками з одного боку і більш "кислими" піками з іншого боку. Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть мати pH від близько 5,2 до близько 6,4. Наприклад, композиції за даним винаходом можуть мати pH близько 5,2; близько 5,3; близько 5,4; близько 5,5; близько 5,6; близько 5,7; близько 5,8; близько 5,9; близько 6,0; близько 6,1; близько 6,2; близько 6,3 або близько 6,4. У деяких варіантах здійснення винаходу pH складає близько 5,30,2; близько 5,90,2 або близько 6,00,2. У деяких варіантах здійснення винаходу буфер або система буферів включають щонайменше один буфер, який має буферний діапазон, який повністю або частково охоплює діапазон pH 5,2-6,4. У одному варіанті здійснення винаходу буфер або система буферів включає два буфери, перший з яких має ефективний діапазон pH в межах 3,6-5,6, і другий, який має ефективний діапазон pH в межах 5,5-7,4. У одному варіанті здійснення винаходу перший буфер має pKa близько 4,80,3, і другий буфер має pKa близько 6,00,3. У певних варіантах здійснення винаходу система буферів включає ацетатний буфер і гістидиновий буфер. У певних варіантах здійснення винаходу гістидин присутній в кількості 1,3-1,9 частин на 1 частину ацетатного буфера по моль. У певних варіантах здійснення винаходу гістидин присутній в кількості близько 1,60,25 частин на 1 частину ацетату по моль. У певних варіантах здійснення винаходу ацетат присутній в концентрації від близько 2,5 мМ до близько 22,5 мМ; від близько 3,0 мМ до близько 22 мМ; від близько 3,5 мМ до близько 21,5 мМ; від близько 4,0 мМ до близько 21,0 мМ; від близько 4,5 мМ до близько 20,5 мМ; від близько 5,0 мМ до близько 20 мМ; від близько 5,5 мМ до близько 19,5 мМ; від близько 6,0 мМ до близько 19,0 мМ; від близько 6,5 мМ до близько 18,5 мМ; від близько 7,0 мМ до близько 18,0 мМ; від близько 7,5 мМ до близько 17,5 мМ; від близько 8,0 мМ до близько 17 мМ; від близько 8,5 мМ до близько 16,5 мМ; від близько 9,0 мМ до близько 16,0 мМ; від близько 9,5 мМ до близько 15,5 мМ; від близько 10,0 мМ до близько 15,0 мМ; від близько 10,5 мМ до близько 14,5 мМ; від близько 12,5 мМ1,875 мМ; від близько 11,0 мМ до близько 14,0 мМ; від близько 11,5 мМ до близько 13,5 мМ або від близько 12,0 мМ до близько 13,0 мМ. У певних варіантах здійснення винаходу гістидин присутній в концентрації від близько 10 мМ до близько 30 мМ; від близько 11 мМ до близько 29 мМ; від близько 12 мМ до близько 28 мМ; від близько 13 мМ до близько 27 мМ; від близько 14 мМ до близько 26 мМ; від близько 15 мМ до близько 25 мМ; від близько 16 мМ до близько 24 мМ; від близько 17 мМ до близько 23 мМ; від близько 18 мМ до близько 22 мМ або від близько 19 мМ до близько 21 мМ. У певних варіантах здійснення винаходу система буферів включає ацетат в кількості близько 12,5 мМ і гістидин в кількості близько 20 мМ, при pH близько 5,9. Фармацевтичні композиції за даним винаходом також можуть включати одне або більше ексципієнтів, які призначені для підтримування зниженої в'язкості або для зниження в'язкості композицій, що містять високу концентрацію білка (наприклад, звичайно >100 мг/мл білка). У деяких варіантах здійснення винаходу композиція включає аргінін в кількості, достатній для підтримування в'язкості рідкої композиції менше ніж близько 35 сПуаз, менше ніж близько 30 сПуаз, менше ніж близько 25 сПуаз, менше ніж близько 20 сПуаз, менше ніж близько 15 сПуаз, менше ніж близько 14 сПуаз, менше ніж близько 13 сПуаз, менше ніж близько 12 сПуаз, менше ніж близько 10 сПуаз або менше ніж близько 9 сПуаз. У певних варіантах здійснення винаходу фармацевтична композиція за даним винаходом містить аргінін, переважно гідрохлорид L-аргініну, в концентрації близько 25 мМ3,75 мМ, близько 50 мМ7,5 мМ або близько 100 мМ15 мМ. У певних варіантах здійснення винаходу аргінін знаходиться в кількості від близько 20 мМ до близько 30 мМ, від близько 21 мМ до близько 29 мМ, від близько 21,25 мМ до близько 28,75 мМ, від близько 22 мМ до близько 28 мМ, від близько 23 мМ до близько 27 мМ або від близько 24 мМ до близько 26 мМ. Приклади композицій Відповідно до одного аспекту даного винаходу фармацевтична композиція являє собою, як правило, фізіологічно ізотонічну рідку композицію з низькою в'язкістю, яка містить: (i) людські антитіла, які специфічно зв'язуються з hIL-4Rα (наприклад, mAb1, mAb2 або mAb3 [вище]), в концентрації близько 100 мг/мл або більше; (ii) систему буферів, яка забезпечує достатню буферність на рівні близько 5,9(0,6; (iii) цукор, який призначений, між іншим, як термічний стабілізатор; (iv) органічний співрозчинник, який захищає структурну цілісність антитіл; і (v) амінокислоту, яка призначена для підтримування в'язкості, прийнятної для підшкірної ін'єкції. Відповідно до одного варіанту здійснення винаходу фармацевтична композиція містить: (i) людські антитіла IgG1, які специфічно зв'язуються з hIL-4Rα, і які включають заміщену 9 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіабельну ділянку важкого ланцюга типу IGHV3-9 і заміщену варіабельну ділянку легкого ланцюга типу IGLV2-28 (наприклад, mAb1) в концентрації від близько 100 мг/мл до близько 200 мг/мл; (ii) систему буферів, що включає ацетат і гістидин, яка ефективно підтримує pH близько 5,90,6; (iii) сахарозу як термічний стабілізатор; (iv) полісорбат як органічний співрозчинника; і (v) аргінін як понижувач в'язкості. Відповідно до одного варіанту здійснення винаходу фармацевтична композиція містить: (i) людські антитіла IgG1, які специфічно зв'язуються з hIL-4Rα, і які включають HCDR1 SEQ ID NO:2, HCDR2 SEQ ID NO:3, HCDR3 SEQ ID NO:4, LCDR1 SEQ ID NO:6, LCDR2 SEQ ID NO:7 і LCDR3 SEQ ID NO:8, в концентрації близько 150 мг/мл25 мг/мл; (ii) ацетат в концентрації близько 12,5 мМ1,9 мМ і гістидин в концентрації близько 20 мМ3 мМ, які ефективно забуферюють при pH близько 5,90,3; (iii) сахарозу в концентрації близько 5 % мас./об.0,75 % мас./об.; (iv) полісорбат 20 в концентрації близько 0,2 % мас./об.0,03 % мас./об.; і (v) аргінін у вигляді гідрохлориду L-аргініну в концентрації близько 25 мМ3,75 мМ. Додаткові необмежувальні приклади фармацевтичних композицій, що охоплюються даним винаходом, представлені далі в даному описі, включаючи робочі приклади, представлені нижчим. Стабільність і в'язкість фармацевтичних композицій Фармацевтичні композиції за даним винаходом звичайно виявляють високу стабільність. Термін "стабільний", як використовується в даному описі відносно фармацевтичних композицій, означає, що антитіла в фармацевтичних композиціях зберігають прийнятний ступінь хімічної структури або біологічної функції після зберігання в певних умовах. Композиція може бути стабільною, навіть якщо антитіла, що містяться в ній, не зберігають 100 % своєї хімічної структури або біологічної функції після зберігання протягом певної кількості часу. У певних обставинах збереження близько 90 %, близько 95 %, близько 96 %, близько 97 %, близько 98 % або близько 99 % структури або функції антитіл після зберігання протягом певної кількості часу може бути розцінено як "стабільний". Стабільність може бути виміряна, між іншим, шляхом визначення процента нативних антитіл, які залишаються в композиції після зберігання протягом певної кількості часу при певній температурі. Процент нативних антитіл може бути визначений, між іншим, ексклюзійною хроматографією (наприклад, ексклюзійною високоефективною рідинною хроматографією [ЕВЕРХ]). "Прийнятна міра стабільності", як використовується в даному описі, означає, що щонайменше 90 % нативної форми антитіл може бути визначено в композиції після зберігання протягом певної кількості часу при заданій температурі. У певних варіантах здійснення винаходу щонайменше близько 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % або 100 % антитіл нативної форми може бути визначено в композиції після зберігання протягом певного періоду часу при певній температурі. Визначеною кількістю часу, після якої вимірюють стабільність, може бути щонайменше 2 тижні, щонайменше 1 місяць, щонайменше 2 місяці, щонайменше 3 місяці, щонайменше 4 місяці, щонайменше 5 місяців, щонайменше 6 місяців, щонайменше 7 місяців, щонайменше 8 місяців, щонайменше 9 місяців, щонайменше 10 місяців, щонайменше 11 місяців, щонайменше 12 місяців, щонайменше 18 місяців, щонайменше 24 місяці або більше. Визначеною температурою, при якій можна зберігати фармацевтичну композицію при оцінці стабільності, може бути будь-яка температура від близько -80 °C до близько 45 °C, наприклад, зберігання при близько -30 °C, близько -20 °C, близько 0 °C, близько 4°-8 °C, близько 5 °C, близько 25 °C або близько 45 °C. Наприклад, фармацевтична композиція може бути розцінена стабільною, якщо після 3 місяців зберігання при 5 °C більше ніж близько 90 %, 95 %, 96 %, 97 % або 98 % нативних антитіл визначаються Е-ВЕРХ. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо через 6 місяців зберігання при 5 °C більше ніж близько 90 %, 95 %, 96 %, 97 % або 98 % нативних антитіл визначаються Е-ВЕРХ. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 9 місяців зберігання при 5 °C більше ніж близько 90 %, 95 %, 96 %, 97 % або 98 % нативних антитіл визначаються Е-ВЕРХ. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 3 місяців зберігання при 25 °C більше ніж близько 90 %, 95 %, 96 % або 97 % нативних антитіл визначаються Е-ВЕРХ. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 6 місяців зберігання при 25 °C більше ніж близько 90 %, 95 %, 96 % або 97 % нативних антитіл визначаються Е-ВЕРХ. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 9 місяців зберігання при 25 °C більше ніж близько 90 %, 95 %, 96 % або 97 % нативних антитіл визначаються Е-ВЕРХ. Стабільність може бути виміряна, між іншим, шляхом визначення процента антитіл, які утворюють агрегати в композиції після зберігання протягом певного періоду часу при певній температурі, де стабільність обернено пропорційна проценту агрегату, що утворюється. 10 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Процент агрегованих антитіл може бути визначений, між іншим, ексклюзійною хроматографією (наприклад, ексклюзійною високоефективною рідинною хроматографією [Е-ВЕРХ]). "Прийнятна міра стабільності", як цю фразу використовують в даному описі, означає, що не більше ніж 5 % антитіл знаходяться в агрегованій формі, що визначається в композиції після зберігання протягом певного періоду часу при заданій температурі. У певних варіантах здійснення винаходу прийнятна міра стабільності означає, що не більше ніж приблизно 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл може бути визначено в агрегаті в композиції після зберігання протягом певного періоду часу при заданій температурі. Певна кількість часу, після якої вимірюють стабільність, може становити щонайменше 2 тижні, щонайменше 1 місяць, щонайменше 2 місяці, щонайменше 3 місяці, щонайменше 4 місяці, щонайменше 5 місяців, щонайменше 6 місяців, щонайменше 7 місяців, щонайменше 8 місяців, щонайменше 9 місяців, щонайменше 10 місяців, щонайменше 11 місяців, щонайменше 12 місяців, щонайменше 18 місяців, щонайменше 24 місяці або більше. Температурою, при якій може зберігатися фармацевтична композиція при оцінці стабільності, може бути будь-яка температура від близько -80 °C до близько 45 °C, наприклад, зберігання при близько -30 °C, близько -20 °C, близько 0 °C, близько 4°-8 °C, близько 5 °C, близько 25 °C або близько 45 °C. Наприклад, фармацевтична композиція може бути розцінена стабільною, якщо після 3 місяців зберігання при 5 °C менше ніж близько 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл визначають в агрегованій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 6 місяців зберігання при 5 °C менше ніж близько 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл визначаються в агрегованій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 9 місяців зберігання при 5 °C менше ніж близько 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл визначаються в агрегованій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 3 місяців зберігання при 25 °C менше ніж близько 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл визначаються в агрегованій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 6 місяців зберігання при 25 °C менше ніж близько 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл визначаються в агрегованій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 9 місяців зберігання при 25 °C менше ніж близько 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл визначаються в агрегованій формі. Стабільність може бути виміряна, між іншим, шляхом визначення процента антитіл, які мігрують в більш кислу фракцію під час обміну іонів ("кисла форма"), ніж в головну фракцію антитіл ("нейтральна конформація"), де стабільність обернено пропорційна фракції антитіл в кислій формі. Не бажаючи бути пов'язаними з теорією, деамідування антитіл може спричиняти формування більш негативно зарядженого антитіла і, отже, більш кислого відносно недеамідованого антитіла (див., наприклад, Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, April 16, 2002, 99(8):5283-5288). Процент "підкисленого" або "деамідованого" антитіла може бути визначений, між іншим, іонообмінною хроматографією (наприклад, катіонообмінною високоефективною рідинною хроматографією [КО-ВЕРХ]). "Прийнятна міра стабільності", як ця фраза використовується в даному описі, означає, що не більше ніж 45 % антитіл знаходиться в композиції в більш кислій формі після зберігання протягом певного періоду часу при певній температурі. У певних варіантах здійснення винаходу прийнятна міра стабільності означає, що не більше ніж приблизно 45 %, 40 %, 35 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл можуть бути визначені в кислій формі в композиції після зберігання протягом певного періоду часу при заданій температурі. Певна кількість часу, після якої вимірюють стабільність, може становити щонайменше 2 тижні, щонайменше 1 місяць, щонайменше 2 місяці, щонайменше 3 місяці, щонайменше 4 місяці, щонайменше 5 місяців, щонайменше 6 місяців, щонайменше 7 місяців, щонайменше 8 місяців, щонайменше 9 місяців, щонайменше 10 місяців, щонайменше 11 місяців, щонайменше 12 місяців, щонайменше 18 місяців, щонайменше 24 місяці або більше. Температурою, при якій фармацевтична композиція може зберігатися при оцінці стабільності, може бути будь-яка температура від близько -80 °C до близько 45 °C, наприклад, зберігання при близько -30 °C, близько -20 °C, близько 0 °C, близько 4°-8 °C, близько 5 °C, близько 25 °C або близько 45 °C. Наприклад, фармацевтична композиція може бути розцінена стабільною, якщо після 3 місяців зберігання при 5 °C, менше ніж близько 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл знаходиться в більш кислій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 3 місяців зберігання при 25 °C менше ніж близько 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл знаходяться в більш кислій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 8 тижнів зберігання при 45 °C менше ніж близько 45 %, 40 %, 11 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 35 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл знаходяться в більш кислій формі. Фармацевтична композиція також може бути розцінена стабільною, якщо після 2 тижнів зберігання при 40 °C менше ніж близько 20 %, 19 %, 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 % або 0,1 % антитіл можуть бути визначені в більш кислій формі. Інші способи можуть бути використані для оцінки стабільності композицій за даним винаходом, такі як, наприклад, диференціальна скануюча калориметрія (DSC) для визначення термічної стабільності, контрольоване перемішування для визначення механічної стабільності і поглинання при близько 350 нм або близько 405 нм для визначення каламутності розчину. Наприклад, композиція за даним винаходом може бути розцінена стабільною, якщо після 6 або більше місяців зберігання при від 5 °C до близько 25 °C зміна ОП405 композиції складає менше ніж близько 0,05 (наприклад, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01 або менше) від ОП 405 композиції в нульовий момент часу. Стабільність також може бути оцінена шляхом вимірювання біологічної активності або афінності зв'язування антитіла з його мішенню. Наприклад, композиція за даним винаходом може бути розцінена як стабільна, якщо після зберігання, наприклад, при 5 °C, 25 °C, 45 °C і інш., протягом певної кількості часу (наприклад, від 1 до 12 місяців), анти-IL-4Rα антитіла, що містяться в композиції, зв'язуються з IL-4Rα з афінністю, яка становить щонайменше 90 %, 95 % або більше за афінності зв'язування антитіл перед вказаним зберіганням. Афінність зв'язування може бути визначена, наприклад, ELISA або плазмоновим резонансом. Біологічна активність може бути визначена аналізом активності IL-4Rα, такого як, наприклад, контакт клітини, яка експресує IL-4Rα, з композицією, що містить анти-IL-4Rα антитіла. Зв'язування антитіл з такою клітиною може бути виміряне безпосередньо, наприклад, за допомогою FACS аналізу. Альтернативно, активність системи IL-4Rα, що лежить нижче, може бути виміряна в присутності антитіла і агоніста IL-4Rα і порівняна з активністю системи IL-4Rα за відсутності антитіл. В деяких варіантах здійснення винаходу IL-4Rα може бути ендогенним для клітини. В інших варіантах здійснення винаходу IL-4Rα може ектопічно експресуватися в клітині. Додаткові способи оцінки стабільності антитіл в композиції продемонстровані в прикладах, представлених нижче. Рідкі фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть в певних варіантах здійснення винаходу виявляти в'язкість від низької до помірної. "В'язкість", як використовується в даному описі, може бути "кінематичною в'язкістю" або "абсолютною в'язкістю". "Кінематична в'язкість" являє собою міру резистивного потоку рідини під впливом гравітації. Коли дві рідини однакового об'єму вміщують в ідентичні капілярні віскозиметри і дозволяють текти під дією гравітації, причому для протікання через капіляр в'язкої рідини потрібно більше часу, ніж менш в'язкої. Наприклад, якщо для однієї рідини завершення струму займає 200 секунд і для іншої рідини займає 400 секунд, друга рідина є в два рази більш в'язкою, ніж перша по шкалі кінематичної в'язкості. "Абсолютна в'язкість", що іноді називається динамічною або простою в'язкістю, є продуктом кінематичної в'язкості і густини рідини (Абсолютна в'язкість=Кінематична 2 в'язкість(Густина). Вимірюванням кінематичної в'язкості є L /Т, де L являє собою довжину, і Т являє собою час. Звичайно кінематичну в'язкість виражають в сантистоксах (сСт). Одиниця СІ 2 кінематичної в'язкості являє собою мм /с, що становить 1 сСт. Абсолютну в'язкість виражають в одиницях сантипуаз (сП). Одиниця СІ абсолютної в'язкості є міліПаскаль-секунду (мПа-с), де 1 сП=1 мПа-с. Як використовується в даному описі, низький рівень в'язкості, відносно рідкої композиції за даним винаходом, означає абсолютну в'язкість меншу ніж близько 15 сПуаз (сП). Наприклад, рідка композиція за винаходом розцінюється як така, що має "низьку в'язкість", якщо при вимірюванні з використанням стандартних методик вимірювання в'язкості, композиція виявляє абсолютну в'язкість близько 15 сП, близько 14 сП, близько 13 сП, близько 12 сП, близько 11 сП, близько 10 сП, близько 9 сП, близько 8 сП або менш. Як використовується в даному описі, помірний рівень в'язкості, відносно рідкої композиції за даним винаходом, означає абсолютну в'язкість від близько 35 сП до близько 15 сП. Наприклад, рідка композиція за винаходом розцінюється як така, що має "помірну в'язкість", якщо при вимірюванні з використанням стандартних методик вимірювання в'язкості, композиція виявляє абсолютну в'язкість близько 34 сП, близько 33 сП, близько 32 сП, близько 31 сП, близько 30 сП, близько 29 сП, близько 28 сП, близько 27 сП, близько 26 сП, близько 25 сП, близько 24 сП, близько 23 сП, близько 22 сП, близько 21 сП, близько 20 сП, близько 19 сП, 18 сП, близько 17 сП, близько 16 сП або близько 15,1 сП. Як проілюстровано в прикладах нижче, автори даного винаходу несподівано виявили, що рідкі композиції з в'язкістю від низької до помірної, що включають високі концентрації анти-hIL 12 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 4Rα антитіл (наприклад, від близько 100 мг/мл до щонайменше 200 мг/мл), можуть бути отримані шляхом складання в композиції антитіл з аргініном від близько 25 мМ до близько 100 мМ. Крім того, додатково було виявлено, що в'язкість композиції може бути знижена навіть в більшій мірі шляхом регуляції вмісту сахарози до менше ніж близько 10 %. Контейнери для фармацевтичних композицій і способи введення Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть міститися в будь-якому контейнері, прийнятному для зберігання лікарських препаратів і інших терапевтичних композицій. Наприклад, фармацевтичні композиції можуть міститися в герметичному і стерилізованому пластиковому або скляному контейнері, що має певний об'єм, такий як флакон, ампула, шприц, картридж або бутель. Різні типи флаконів можуть бути використані для утримування композицій за даним винаходом, включаючи, наприклад, прозорі і непрозорі (наприклад, бурштинові) скляні або пластикові флакони. Також будь-який тип шприців може бути використаний для утримування або введення фармацевтичних композицій за даним винаходом. Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть міститися в "нормальновольфрамових" шприцах або "низьковольфрамових" шприцах. Як буде зрозуміло фахівцеві в даній галузі, спосіб отримання скляних шприців звичайно включає застосування гарячого вольфрамового стрижня, який діє, проколюючи флакон, створюючи при цьому отвір, з якого рідина може бути отримана і виштовхнута з шприца. Вказаний спосіб приводить до відкладання слідових кількостей вольфраму на внутрішній поверхні шприца. Подальше промивання і інші стадії обробки можуть бути використані для зменшення кількості вольфраму в шприці. Як використовується в даному описі, термін "нормальновольфрамовий" означає, що шприц містить більше ніж 500 частин на мільярд (ч/млд) вольфраму. Термін "низьковольфрамовий" означає, що шприц містить менше ніж 500 ч/млд вольфраму. Наприклад, низьковольфрамовий шприц, відповідно до даного винаходу, може містити менше ніж близько 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 або менше ч/млд вольфраму. Гумові поршні, що використовуються в шприцах, і гумові пробки, що використовуються для закривання отворів флаконів, можуть бути покриті оболонкою для запобігання контамінації медичного вмісту шприца або флакону, або для збереження їх стабільності. Отже, фармацевтичні композиції за даним винаходом, відповідно до певних варіантів здійснення винаходу, можуть міститися в шприці, який включає покритий оболонкою поршень, або у флаконі, який закритий покритою оболонкою гумовою пробкою. Наприклад, поршень або пробка можуть бути покриті фторвуглецевою плівкою. Приклади покритих оболонкою пробок або поршнів, прийнятних для застосування з флаконами і шприцами, що містять фармацевтичні композиції за даним винаходом, приведені, наприклад, а патентах США 4997423; 5908686; 6286699; 6645635 і 7226554, зміст яких включений за допомогою посилання в даний опис у всій їх повноті. Певні зразкові покриті оболонкою гумові пробки і поршні, які можуть бути використані в контексті даного винаходу, комерційно доступні під торговою назвою "FluroTec®", доступні від West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA). Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу фармацевтичні композиції можуть міститися в низьковольфрамовому шприці, який включає поршень, покритий фторвуглецем. Фармацевтичні композиції можна вводити пацієнту парентеральними шляхами, такими як ін'єкція (наприклад, підшкірна, внутрішньовенна, внутрішньом'язова, інтраперитонеальна і інш.) або черезшкірним, черезслизовим, назальним, легеневим або пероральним шляхом. Множина ручок багаторазового використання або автоін'єкційних пристроїв для введення можуть бути використані для підшкірної доставки фармацевтичних композицій за даним винаходом. Приклади включають, але не обмежуються ними, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), ручку DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), ручку HUMALOG MIX 75/25™, ручка HUMALOG™, ручку HUMALI N 70/30™ (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II і III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), ручка BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTI PEN™, OPTIPEN PRO™, OPTI PEN STARLET™ і OPTICLI K™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany). Приклади ручок багаторазового використання або автоін'єкційних пристроїв для введення, що мають застосування в підшкірній доставці фармацевтичної композиції за даним винаходом, включають, але не обмежуються ними, ручку SOLOSTAR™ (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) і KWIKPEN™ (Eli Lilly), SURECLICK™ Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.) і ручку HUMIRA™ (Abbott Labs, Abbott Park, IL). 13 UA 111731 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Застосування мікроінфузора для введення фармацевтичних композицій за даним винаходом також передбачається в даному описі. Як використовується в даному описі, термін "мікроінфузор" означає пристрій для підшкірного введення, створений для повільного введення великих об'ємів (наприклад, до близько 2,5 мл або більше) терапевтичної композиції протягом тривалого періоду часу (наприклад, близько 10, 15, 20, 25, 30 або більше хвилин). Див., наприклад, U.S. 6629949; US 6659982; і Meehan et al, J. Controlled Release 46:107-1 16 (1996). Мікроінфузори є особливо прийнятними для введення великих доз терапевтичних білків, що містяться у високій концентрації (наприклад, близько 100, 125, 150, 175, 200 або більше мг/мл) або в'язких розчинів. У одному варіанті здійснення винаходу рідку фармацевтичну композицію, що містить близько 150 мг/мл15 мг/мл анти-IL-4Rα антитіла, вводять підшкірно в об'ємі приблизно 1 мл(0,15 мл із заздалегідь заповненого шприца в автоінжекторі. У іншому варіанті здійснення винаходу композицію вводять в об'ємі від близько 1 мл до 2,5 мл з мікроінфузорного пристрою. Композиція може бути заздалегідь заповнена в мішок або картридж для застосування в мікроінфузорі. Терапевтичне застосування фармацевтичних композицій Фармацевтичні композиції за даним винаходом є застосовними, між іншим, для лікування, профілактики або полегшення будь-якого захворювання або розладу, асоційованого з активністю IL-4, включаючи захворювання або розлади, опосередковані активацією IL-4Rα. Приклади необмежувальних захворювань і розладів, які можна лікувати або запобігти шляхом введення фармацевтичних композицій за даним винаходом, включають різні атопічні захворювання, такі як, наприклад, атопічний дерматит, алергічний кон'юнктивіт, алергічний риніт, астма і інші захворювання, опосередковані IgE/Th2. Отже, даний винахід включає способи лікування, профілактики або полегшення будь-якого захворювання або розладу, асоційованого з активністю IL-4 або активацією IL-4Rα (включаючи будь-який з приведених вище прикладів захворювань, розладів і станів). Терапевтичні способи за даним винаходом включають введення пацієнту будь-якої композиції, що містить анти-hIL4Rα антитіла, як описано в даному описі. Пацієнтом, якому вводять фармацевтичну композицію, може бути, наприклад, будь-яка людина або тварина, яка не є людиною, що потребує такого лікування, профілактики або полегшення, або що може іншим чином отримати користь від інгібування або пригнічення активності, опосередкованої IL-4 або IL-4Rα. Наприклад, пацієнтом може бути індивідуум, у якого діагностований або який ймовірно має ризик розвитку будь-якого з приведених вище захворювань або розладів. Даний винахід додатково включає застосування будь-якої з фармацевтичних композицій, описаних в даному описі, у виробництві лікарського препарату для лікування, профілактики або полегшення будь-якого захворювання або розладу, асоційованого з активністю IL-4 або активацією IL-4Rα (включаючи будь-що з приведених вище прикладів захворювань, розладів і станів). Приклади Наступні приклади представлені для забезпечення звичайного фахівця в даній галузі повною інформацією і описом, як отримувати і застосовувати способи і композиції за винаходом, і не призначені для обмеження об'єму, яким автори оцінюють свій винахід. Вироблялися спроби забезпечити точність відносно використовуваних цифр (наприклад, кількості, температура і інш.), але деякі експериментальні помилки і відхилення необхідно брати до уваги. Якщо не вказано інше, частини являють собою мольні частини, молекулярна маса являє собою середню молекулярну масу, температура представлена в градусах по Цельсію, і тиск представлений в або близько атмосферному тиску. Дослідні роботи відносно вихідної композиції включали скринінг органічних співрозчинників, термічних стабілізаторів і буферів в рідких композиціях mAb1 (анти-IL-4Rα антитіла за винаходом), щоб визначити ексципієнти, які сумісні з білком і поліпшують його стабільність, при збереженні осмолярності і в'язкості для підшкірної ін'єкції. Буферні умови також досліджували для визначення оптимального pH для максимальної стабільності білка. Приклад 1. Органічні співрозчинники Спостерігали, що mAb1 є нестабільними при впливі стресу збовтування. Аналізи високоефективною рідинною хроматографією зі зворотною фазою (ЗФ-ВЕРХ) і ексклюзійною високоефективною рідинною хроматографією (Е-ВЕРХ) продемонстрували втрату білка і збільшення агрегатів білка, коли mAb1 струшували при кімнатній температурі (таблиця 1, див. дані "відсутність співрозчинника"). Додавання органічних співрозчинників до розчину mAb1 запобігало розкладанню білка, що вимірювали Е-ВЕРХ і ЗФ-ВЕРХ (таблиця 1). Однак спостерігали, що додавання деяких органічних співрозчинників знижує термічну стабільність mAb1 (таблиця 2). Втрату відновлення білка спостерігали в композиціях, що містять PEG 3350 14 UA 111731 C2 5 10 (3 %) і PEG 300 (10 % і 20 %), що визначали ЗФ-ВЕРХ після термічного стресу (таблиця 2). Крім того, мало місце більше утворення агрегатів в композиціях, що містять PLURONIC F68 (полоксамер 181) (0,2 %), PEG 300 (10 % і 20 %) і пропіленгліколь (20 %), ніж в композиціях без співрозчинника, що визначали Е-ВЕРХ. Полісорбат 20 (0,2 %) і полісорбат 80 (0,2 %) забезпечували порівнянну стабільність до струшування і термічного стресу. Згідно з таблицею 1, 0,3 мл 15 мг/мл mAb1 в 10 мМ фосфати, pH 6,0 і різні органічні співрозчинники в 2 мл скляному флаконі піддавали струшуванню протягом близько 120 хвилин. Каламутність оцінювали за допомогою оптичної густини (ОГ) при 405 нм і представляли як відносну зміну ОГ при 405 нм в порівнянні з вихідною речовиною. Процент загального відновленого mAb1 визначали ВЕРХ зі зворотною фазою (ЗФ-ВЕРХ). Процент нативних і агрегованих mAb1 визначали ексклюзійною ВЕРХ (Е-ВЕРХ). Результати Е-ВЕРХ, представлені в результатах "вихідна речовина" являють собою середнє значення кожної композиції за відсутності струшування. Таблиця 1 Органічний співрозчинник Загальний % % нативних % агрегату mAb1 (ЗФmAb1 (ВР- mAb1 (ВРВЕРХ) ВЕРХ) ВЕРХ) Зовнішній Каламутність вигляд рН Задов. 0,00 6,0 100 96,8 1,8 Незадов. 0,87 6,0 86 95,8 3,5 Задов. 0,01 5,9 98 97,0 1,7 Задов. 0,00 5,9 100 96,6 2,0 Задов. 0,00 5,9 99 96,9 1,7 Задов. Задов. Задов. Задов. Задов. 0,00 0,01 0,01 0,01 0,00 6,0 6,0 5,9 6,0 6,0 102 99 101 100 101 96,7 96,8 96,1 96,7 96,7 2,0 1,8 2,6 2,0 2,0 2 Вихідна речовина (відсутність струшування) Відсутність співрозчинника 0,2 % полісорбат 20 0,2 % полісорбат 80 0,2 % плюронік F68 3 % PEG 3350 1 % PEG 3350 20 % PEG 300 10 % PEG 300 20 % пропіленгліколь 15 20 Згідно з таблицею 2, 0,3 мл 15 мг/мл mAb1 в 10 мМ фосфату, pH 6,0 і різні органічні співрозчинники в 2 мл скляному флаконі зберігали при близько 45 °C протягом близько 28 днів. Каламутність оцінювали по оптичній густині (ОГ) при 405 нм і повідомляли як відносну зміну ОГ при 405 нм в порівнянні з вихідною речовиною. Процент всіх відновлених mAb1 визначали ВЕРХ зі зворотною фазою (ЗФ-ВЕРХ). Процент нативних і агрегованих mAb1 визначали ексклюзійною ВЕРХ (Е-ВЕРХ). Результати Е-ВЕРХ, представлені в результатах "вихідної речовини", являють собою середнє із значень кожної композиції за відсутності термічного стресу. Таблиця 2 Органічний співрозчинник Вихідна речовина (відсутність прискорення) Відсутність співрозчинника 0,2 % полісорбат 20 0,2 % полісорбат 80 0,2 % плюронік F68 3 % PEG 3350 Загальний % % нативних mAb1 (ЗФmAb1 (ВРВЕРХ) ВЕРХ) % агрегату mAb1 (ВРВЕРХ) Зовнішній Каламутність вигляд рН Задов. 0,00 6,0 100 96,8 1,8 Задов. 0,00 6,2 98 94,9 3,5 Задов. Задов. Задов. Задов. 0,00 0,00 0,00 0,00 6,3 6,2 6,2 6,2 98 97 96 73 94,6 94,3 93,0 96,5 3,6 3,8 5,1 1,4 25 15 UA 111731 C2 Продовження таблиці 2 Задов. Задов. Задов. Задов. 1 % PEG 3350 20 % PEG 300 10 % PEG 300 20 % пропіленгліколь 5 10 15 0,01 0,04 0,02 0,00 6,0 4,5 4,8 6,3 97 74 93 97 94,6 8,5 57,7 93,6 3,8 87,5 38,1 4,7 Приклад 2. Термічні стабілізатори Різні термічні стабілізатори, такі як цукор, амінокислоти і неорганічні солі, досліджували відносно їх здатності інгібувати деградацію mAb1 при зберіганні при близько 45 °C. Резюме досліджуваних термічних стабілізаторів представлене в таблиці 3. Композиції, що містять або сахарозу або трегалозу, надавали найбільший стабілізуючий ефект на mAb1 в розчині при інкубації при підвищеній температурі (що визначали по Е-ВЕРХ). Сахарозу вибирали як стабілізатор, оскільки вона має історію безпечного застосування в композиціях моноклональних антитіл. Згідно з таблицею 3, 0,3 мл 25 мг/мл mAb1 в 10 мМ ацетату, pH 5,3 і різні термічні стабілізатори в 2 мл скляному флаконі зберігали при близько 45 °C протягом близько 28 днів. Каламутність оцінювали по оптичній густині (ОГ) при 405 нм і повідомляли як відносну зміну ОГ при 405 нм в порівнянні з вихідною речовиною. Каламутність була незначною для всіх зразків. Процент всіх відновлених mAb1 визначали ВЕРХ зі зворотною фазою (ЗФ-ВЕРХ). Процент нативних і агрегованих mAb1 визначали ексклюзійною ВЕРХ (Е-ВЕРХ). Кислі і основні види визначали як суму піків mAb1, яку елююють з катіонообмінної колонки (КО-ВЕРХ) з більш раннім або більш пізнім часом утримування, ніж основний пік, відповідно. Результати Е-ВЕРХ, представлені в результатах "вихідної речовини", являють собою середнє із значень кожної композиції за відсутності термічного стресу. 20 Таблиця 3 Буфер і рН Вихідна речовина (відсутність інкубації при 45С) Відсутність термічного стабілізатора 8,5 % сахароза 4,5 % сорбіт 4,5 % маніт 9,4 % дигідрат трегалози 2,2 % гліцин 0,9 % NaCl 2,5 % гліцерин 5 % аргінін 25 30 рН % mAb2 (КО-ВЕРХ) Загальний % % нативних % агрегату mAb1 (ЗФmAb1 (ЕmAb1 (ЕГоловий Лужний Кислий пік ВЕРХ) ВЕРХ) ВЕРХ) пік пік 5,3 100 97,8 1,2 17,6 68,2 13,2 5,4 106 91,9 5,8 28,1 56,5 15,4 5,4 5,3 5,3 105 105 104 93,3 91,2 92,6 4,6 6,6 5,2 29,5 34,4 28,4 54,7 51,5 56,0 15,8 14,1 15,6 5,4 103 93,4 4,5 29,1 55,6 15,3 5,4 5,4 5,4 5,4 104 98 104 97 86,6 85,0 91,9 83,2 10,6 8,7 6,0 11,4 33,5 25,2 29,7 25,3 50,7 56,0 56,1 57,1 15,8 18,7 14,3 17,6 Приклад 3. Буфери і pH Також досліджували ефект pH і варіантів буферів на стабільність mAb1. 15 мг/мл mAb1 інкубували в різних буферах при різних значеннях pH, що варіюються від pH 4,5 до 7,0. Стабільність білка відстежували Е-ВЕРХ і катіонообмінною ВЕРХ (КО-ВЕРХ). Максимальну стабільність білка спостерігали, що визначали як по Е-ВЕРХ, так і КО-ВЕРХ, коли mAb1 складали при pH 6,0 в гістидиновому буфері або при pH 5,3 в ацетатному буфері (таблиця 4 і таблиця 5). Система ацетатного буфера забезпечувала ширший діапазон стабільності pH і нижчу швидкість змін варіантів композиції відносно композиції, що містить гістидиновий буфер (таблиця 5). Отже, ацетатний буфер при pH 5,3 вибирали частково для складання лікарської речовини mAb1. Згідно з таблицею 4, 0,3 мл 15 мг/мл mAb1, 0,2 % полісорбату 20, змішували з 10 мМ різних буферів в 2 мл скляному флаконі, зберігали при близько 45 °C протягом близько 14 днів. Каламутність оцінювали по оптичній густині (ОГ) при 405 нм і повідомляли як відносну зміну ОГ 16 UA 111731 C2 5 при 405 нм в порівнянні з вихідною речовиною. Каламутність була незначною для всіх зразків. Процент всіх відновлених mAb1 визначали ВЕРХ зі зворотною фазою (ЗФ-ВЕРХ). Процент нативних і агрегованих mAb1 визначали ексклюзійною ВЕРХ (Е-ВЕРХ). Кислі і основні види визначали як суму піків mAb1, яку елююють з катіонообмінної колонки (КО-ВЕРХ) з більш раннім або більш пізнім часом утримування, ніж основний пік, відповідно. Результати Е-ВЕРХ, представлені в результатах "вихідної речовини", являють собою середнє із значень кожної композиції за відсутності термічного стресу. Таблиця 4 2 % відновлених mAb1 % нативних % агрегату Загальний % (КО-ВЕРХ) відновлених відновлених відновлених mAb1 (ЕmAb1 (ЕКислий Головний mAb1 (ЗФ-ВЕРХ) Лужнй пік ВЕРХ) ВЕРХ) пік пік Буфер і рН 3 Вихідна речовина (відсутність інкубації при 45С) рН 7,0, фосфат рН 6,5, фосфат рН 6,0, фосфат рН 6,0, гістидин рН 6,0, сукцинат рН 6,0, цитрат рН 5,5, цитрат рН 5,0, цитрат рН 5,0, ацетат рН 4,5, ацетат 10 15 20 100 96,8 1,7 19,1 66,4 14,5 97 96 99 97 99 98 96 97 94 94 93,9 94,4 95,2 95,5 94,8 95,5 94,7 89,5 94,7 89,9 4,5 4,0 3,1 2,8 3,5 2,9 3,4 7,4 3,6 8,3 39,1 31,7 23,8 23,9 26,7 26,1 25,0 23,6 18,1 20,8 50,1 55,9 62,2 61,8 59,6 59,8 60,9 61,5 66,3 62,8 10,8 12,5 14,0 14,3 13,7 14,1 14,2 15,0 15,5 16,4 Згідно з таблицею 5, 0,3 мл 15 мг/мл mAb1, 0,2 % полісорбату 20, комбіновані з 10 мМ різних буферів в 2 мл скляному флаконі зберігали при близько 45 °C протягом близько 14 днів. Каламутність оцінювали по оптичній густині (ОГ) при 405 нм і повідомляли як відносну зміну ОГ при 405 нм в порівнянні з вихідною речовиною. Каламутність була незначною для всіх зразків. Процент всіх відновлених mAb1 визначали ВЕРХ зі зворотною фазою (ЗФ-ВЕРХ). Процент нативних і агрегованих mAb1 визначали ексклюзійною ВЕРХ (Е-ВЕРХ). Кислі і основні види визначали як суму піків mAb1, яку елююють з катіонообмінної колонки (КО-ВЕРХ) з більш раннім або більш пізнім часом утримування, ніж головний пік, відповідно. Результати Е-ВЕРХ, представлені в результатах "вихідної речовини", являють собою середнє із значень кожної композиції за відсутності термічного стресу. Дослідження з розробки композиції показали, що в лужних умовах (pH≥6,5), mAb1 в розчині можуть деамідуватися. Навпаки, нижче за рН 5,0 спостерігали збільшення швидкості утворення варіантів молекулярної маси mAb1. На основі отриманих даних pH композиції mAb1 підтримували від pH 5,6 до pH 6,2. mAb1 були стабільними у вказаному діапазоні pH. Таблиця 5 Загальний % % нативних % агрегату % нативних відновлених mAb1 (КО-ВЕРХ) відновлених відновлених відновлених mAb1 (ЗФmAb1 (ЕmAb1 (ЕКислий Головний Лужний пік ВЕРХ) ВЕРХ) ВЕРХ) пик пік Буфер і рН 3 Вихідна речовина (відсутність інкубації при 45С) рН 5,5, гістидин рН 6,0, гістидин рН 6,5, гістидин рН 4,7, ацетат рН 5,0, ацетат рН 5,3, ацетат рН 5,6, ацетат 100 96,5 2,1 18,7 66,7 14,6 94 100 97 90 100 99 100 87,5 96,6 89,8 90,1 93,7 95,2 93,6 9,1 2,4 7,7 6,4 4,3 3,0 5,3 22,7 22,7 32,1 18,4 18,0 18,1 22,1 58,7 63,0 43,8 66,1 67,0 67,5 61,7 18,6 14,2 24,0 15,5 15,0 14,5 14,3 17 UA 111731 C2 5 Ефект pH і варіантів буферів на стабільність mAb1 додатково оцінювали в композиціях, що містять або 20 мМ гістидину pH 6, 12,5 мМ ацетату pH 5,3, або комбінацію 20 мМ гістидину і 12,5 ацетату pH 5,9 (таблиця 6). У порівнянні з системою окремих буферів, mAb1 були найстабільнішими в композиції, що містить як гістидин, так і ацетат приблизно при pH 5.9. Найповільнішу швидкість агрегації визначали, коли mAb1 складали у вказаній комбінованій системі буферів (Е-ВЕРХ) (таблиця 6). Таблиця 6 2 Загальний % % нативних % агрегату % відновлених mAb1 (КОВЕРХ) відновлених відновлених відновлених mAb1 (ЗФmAb1 (ЕmAb1 (ЕКислий Головний Лужний ВЕРХ) ВЕРХ) ВЕРХ) пик пік пік Буфер і рН Вихідна речовина (відсутність інкубації при 45С) 20 мМ гістидин, рН 5,9 12,5 мМ ацетат, рН 5,3 Комбінація 20 мМ гістидину і 12,5 мМ ацетату, рН 5,9 10 15 20 25 100 97,0 2,6 27,4 62,1 10,5 100 103 95,2 94,8 4,3 4,8 34,8 30,9 53,9 56,0 11,4 13,1 104 95,9 3,7 33,7 54,1 12,1 Згідно з таблицею 6, 0,4 мл 150 мг/мл mAb1, 10 % сахарози, 0,2 % полісорбату 20, комбіновані з різними буферами в 2 мл скляному флаконі зберігали при близько 45 °C протягом близько 14 днів. Каламутність оцінювали по оптичній густині (ОГ) при 405 нм і повідомляли як відносну зміну ОГ при 405 нм в порівнянні з вихідною речовиною. Каламутність була незначною для всіх зразків. Процент всіх відновлених mAb1 визначали ВЕРХ зі зворотною фазою (ЗФВЕРХ). Процент нативних і агрегованих mAb1 визначали ексклюзійною ВЕРХ (Е-ВЕРХ). Кислі і основні види визначали як суму піків mAb1, яку елююють з катіонообмінної колонки (КО-ВЕРХ) з більш раннім або більш пізнім часом утримування, ніж основний пік, відповідно. Результати ЕВЕРХ, представлені в результатах "вихідної речовини", являють собою середнє із значень кожної композиції за відсутності термічного стресу. Приклад 4. Керування в'язкістю і тонічністю Комбінації різних ексципієнтів з високими концентраціями mAb1 (тобто 150 мг/мл, 175 мг/мл і 200 мг/мл) оцінювали відносно в'язкості і тонічності (вираженої в осмолярності). Рівень сахарози, хлориду натрію і гідрохлориду L-аргініну регулювали для отримання композиції, що містить високу концентрацію mAb1 при низькій в'язкості і при фізіологічної тонічності для можливості легкого, зручного і швидкого підшкірного введення великої кількості mAb1 (таблиця 7). Рідка композиція, яка містить 25 мМ аргініну, 20 мМ гістидину, 12,5 мМ ацетату, 5 % (мас./об.) сахарози, 0,2 % (мас./об.) полісорбату 20, і 150 мг/мл mAb1, при pH 5,9 (композиція А) являє собою оптимізовану композицію, що має низьку в'язкість (близько 8,5 сПуаз) і що є фізіологічно ізотонічною (близько 293 мОсм/кг), при збереженні стабільності mAb1. 30 Таблиця 7 mAb1 Гістидин (мг/мл) (мМ) A B C D E F G H I J K 150 150 175 175 175 200 200 200 200 200 200 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 Ацетат (мМ) Аргінін (мМ) NaCl (мМ) 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 12,5 25 0 100 50 0 100 0 100 50 25 0 0 0 0 0 0 0 100 0 0 0 0 18 Сахароза (% мас./об.) 5 10 1 5 10 1 5 5 5 5 10 рН 5,9 5,9 5,9 5,9 5,9 5,9 5,9 5,9 5,9 5,9 5,9 В'язкість Осмолярність (сПуаз) (мОсм/кг) 8,5 11 -8,0 -9,5 -20 -15 -19,2 -17 -18 -23 -35 293 448 -290 -370 -440 -290 -430 -430 -330 -290 -440 UA 111731 C2 5 10 15 Приклад 5. Характеризація композиції А Основними шляхами руйнування, ідентифікованими під час розробки рідкої композиції mAb1, були утворення агрегатів, продуктів розщеплення і варіантів заряду. Утворення таких продуктів руйнування мінімізували шляхом становлення mAb1 в композиції, що містить 20 мМ гістидину, 12,5 мМ ацетату, 0,2 % полісорбату 20, 5 % сахарози і 25 мМ гідрохлориду L-аргініну при pH 5,9. Спостерігали, що складені в композицію 150 мг/мл mAb1 залишалися прозорим до дещо опалесціюючого рідким розчином, по суті вільним від видимих частинок. Складені в композицію mAb1 були фізично і хімічно стабільні при впливі різного стресу (інкубація при 25 °C і 45 °C) і умов зберігання в реальному часі (5 °C) (таблиця 8). Зовнішній вигляд не змінювався, коли mAb1 інкубували при 25 °C (3 місяці) або зберігали при 5 °C протягом 6 місяців. Крім того, не спостерігали впливу на рН розчину, каламутність або на кількість відновлених mAb1. Після інкубації складених в композицію mAb1 протягом 3 місяців при 25 °C, антитіла істотно не руйнувалися, що визначали по Е-ВЕРХ і було не більше ніж 3,3 % зруйнованих, що визначали по КО-ВЕРХ. Спостерігали підвищене руйнування після інкубації при 45 °C протягом 8 тижнів, що визначали Е-ВЕРХ і КО-ВЕРХ, показуючи, що утворення агрегатів і варіантів заряду є основними шляхами руйнування молекули антитіла mAb1. Не спостерігали руйнування, коли складені в композицію mAb1 зберігали протягом 6 місяців при 5 °C. 20 Таблиця 8 Стрес тест Тривалість зберігання Зовнішній вигляд Каламутність (ОГ 405 нм) рН % mAb1 (ЗФ-ВЕРХ) % нативних mAb1 (ВРВЕРХ) % mAb1 Кислий (піки із Головний пік КОЛужний ВЕРХ) Відсутність зберігання Задов. 2 міс. Задов. 3 міс. Задов. 6 міс. Задов. 1 міс. Задов. 3 міс. Задов. 0,00 0,00 0,00 0,00 0,01 0,01 6,0 100 6,0 97 5,9 104 5,9 6,0 97 6,0 102 98,1 98,2 98,2 98,1 97,8 14,6 70,7 14,7 70,5 14,7 70,4 16,0 69,8 17,6 67,4 14,7 14,8 14,9 14,3 15,0 Стрес тест Тривалість зберігання Зовнішній вигляд Каламутність (ОГ 405 нм) рН % mAb1 (ЗФ-ВЕРХ) % нативних mAb1 (ВР-ВЕРХ) Кислий % mAb1 (піки з КО- Головний пік ВЕРХ) Лужний 25 30 5С Відсутність зберігання Задов. 0,00 6,0 100 98,1 14,6 70,7 14,7 25С 45С 2 тиж. Задов. 0,02 6,0 102 95,9 20,8 64,5 14,7 3 тиж. Задов. 0,03 6,0 98 94,2 29,9 56,7 13,4 6 тиж. Задов. 0,05 6,0 100 90,5 44,0 45,1 10,9 Згідно з таблицею 8, ОГ=оптична густина; ЗФ-ВЕРХ=високоефективна рідинна хроматографія зі зворотною фазою; Е-ВЕРХ=ексклюзійна високоефективна рідинна хроматографія; і КО-ВЕРХ=катіонообмінна високоефективна рідинна хроматографія. Кислі і лужні види визначали як суму піків mAb1, яку елююють з колонки КО-ВЕРХ з більш раннім або більш пізнім часом утримування, ніж головний пік, відповідно. Приклад 6. Контейнери Композиції, що містять mAb1, визначали як стабільні при фільтраційній стерилізації. Набір для фільтрації Millipore MILLIPAK використовували в отриманні клінічних партій, тоді як фільтрацію ідентичних композицій використовували в наукових дослідженнях (Millipore MILLEX DURAPORE). 19 UA 111731 C2 5 10 5-мл скляний флакон заповнювали мінімум на 2,5 мл 150 мг/мл mAb1, 5 % (мас./об.) сахарози, 25 мМ гідрохлориду L-аргініну, 0,2 % (мас./об.) полісорбату 20, 12,5 мМ ацетату, 20 мМ гістидину, pH 5,9. Надлишок 0,5 мл композиції вміщували в 5-мл флакон, для забезпечення того, щоб можна було забрати 2,0 мл композиції. Такий надлишок не був створений для компенсації втрат при виробництві mAb1 або композиції, що містить mAb1, руйнування під час виробництва, руйнування під час зберігання (термін придатності) або для подовження періоду терміну придатності. У порівнянні із зберіганням в скляних флаконах на стабільність складених в композицію mAb1 (композиція А) не впливало зберігання в або поліпропіленовій пробірці, або полістирольній пробірці, або полікарбонатній пробірці, або в скляному флаконі, що містить шматочки неіржавіючої сталі (таблиця 9). Таблиця 9 Температура Відсутність зберігання зберігання Контейнер для Скло зберігання Зовнішній вигляд Задов. Каламутність (ОГ при 0,00 405 нм) рН 5,9 % mAb1 (ЗФ-ВЕРХ) 100 % нативних mAb1 (ВР98,4 ВЕРХ) Кислий 14,8 % піка mAb1 (КО- Головний 70,7 ВЕРХ) Лужний 14,5 15 20 40С протягом 14 днів Задов. Задов. Задов. Задов. Неіржавіюча сталь Задов. 0,01 0,01 0,02 0,02 0,01 5,9 102 5,7 103 5,8 107 5,8 106 5,9 102 97,6 97,4 97,5 97,5 96,1 18,4 65,8 15,8 19,1 65,5 15,3 18,4 66,0 15,6 18,4 66,5 15,1 20,3 65,0 14,7 Скло Поліпропілен Полістирол Полікарбонат Згідно з таблицею 9, 150 мг/мл mAb1, 5 % сахарози, 25 мМ гідрохлориду аргініну, 0,2 % PS20, 20 мМ гістидину, 12,5 мМ ацетату, pH 5,9 інкубували з/в різних речовинах при 40 °C протягом 14 днів. ОГ=оптична густина; ЗФ-ВЕРХ=високоефективна рідинна хроматографія зі зворотною фазою; Е-ВЕРХ=ексклюзійна високоефективна рідинна хроматографія; і КОВЕРХ=катіонообмінна високоефективна рідинна хроматографія. Каламутність представляють як відносну зміну ОГ при 405 нм в порівнянні з вихідною речовиною. Кислі або основні види визначають як суму піків mAb1, яку елююють з колонки КО-ВЕРХ з більш раннім або більш пізнім часом утримування, ніж головний пік, відповідно. 20 UA 111731 C2 21 UA 111731 C2 22 UA 111731 C2 23 UA 111731 C2 24 UA 111731 C2 25 UA 111731 C2 26 UA 111731 C2 27 UA 111731 C2 28