Спосіб зберігання мікроорганізмів роду lactobacillus

Реферат: Спосіб зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus включає посів у напіврідке поживне середовище та покриття шаром вазелінового масла. Готують середовище на основі ячмінного солоду та вводять пептон, цистин, лактозу, натрію хлорид, агар-агар та дистильовану воду. UA 100850 U (54) СПОСІБ ЗБЕРІГАННЯ МІКРООРГАНІЗМІВ РОДУ LACTOBACILLUS UA 100850 U UA 100850 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до медицини, зокрема мікробіології, і може застосовуватися у науково-дослідній і лабораторно-діагностичній діяльності мікробіолога для довготривалого зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus, отриманих з клінічного матеріалу та пробіотичних препаратів. Відомий спосіб зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus за допомогою ліофілізації [Сидякина Т.М. Консервация микроорганизмов в коллекциях культур. Методы. Проблемы. Перспективы. - Пущино, 1991 г.]. Недоліком цього способу є потреба у спеціальному сублімаційному устаткуванні, що не завжди є на забезпеченні у лабораторії. Ще один відомий спосіб зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus за допомогою кріоконсервування вимагає спеціальних умов та технічного оснащення і є дорогим [Головач Т.М. Лактобацили: заморожування при низьких та ультранизьких температурах /Т.М. Головач, Л.І. Грома //Методи одержання чистих культур мікроорганізмів та їх довгострокового зберігання в колекціях. - К.: Знання України, 2004. – С. 39-44.]. При способі зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus у напіврідкому поживному середовищі МРС під шаром вазелінового масла [Сидякина Т.М. Консервация микроорганизмов в коллекциях культур. Методы. Проблемы. Перспективы. Пущино, 1991 г.]. Однак після 12 місяців зберігання чисельність життєздатних клітин у цьому середовищі значно знижується. В основу корисної моделі поставлена задача створити спосіб зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus, який дозволить продовжити термін активності та зберігання властивостей цих мікроорганізмів менш дорогим способом. Поставлена задача вирішується тим, що у способі зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus, що включає посів у напіврідке поживне середовище та покриття шаром вазелінового масла, згідно з корисною моделлю, готують середовище на основі ячмінного солоду та вводять пептон, цистин, лактозу, натрію хлорид, агар-агар і дистильовану воду у такому співвідношенні компонентів, г/л: ячмінний солод 100,0 пептон 2,0 цистин 0,1 лактоза 10,0 натрію хлорид 2,5 агар - агар 0,72 дистильована вода до 1 л. Запропонованим способом зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus із приготуванням середовища на основі ячмінного солоду досягається подовження терміну активності та зберігання властивостей мікроорганізмів роду Lactobacillus, оскільки у солоді міститься необхідне для цього поєднання вуглеводів, амінокислот, вітамінів, жирних кислот і мінеральних елементів. Солод - продукт штучного пророщування злакових культур, що містить речовини, необхідні для життєдіяльності молочнокислих бактерій, серед яких вільні амінокислоти, вуглеводи (дисахариди і полісахариди), вітаміни групи В, мікроелементи (магній, калій, фосфор, залізо), ферменти, жирні кислоти [О.В. Дишкантюк. Біотехнологія отримання молочної кислоти і її солей на основі вторинних продуктів переробки зерна: автореф. дис… канд. техн. наук: 03.00.20 /О.В. Дишкантюк. - Одеса, 2000. – 17 с.]. Спосіб зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus здійснюють таким чином. Готують поживне середовище, основу якого складає ячмінний солод. У колбі змішують 100,0 г солоду і 300,0 г дистильованої води і кип'ятять протягом 10-15 хвилин, охолоджують, фільтрують. Натрію хлорид 2,5 г, лактозу 10,0 г, пептон 2,0 г, цистин 0,1г, агар-агар 0,72 г розмішують у 100,0 г води, кип'ятять 2-3 хвилини до повного розчинення, додають до солоду та ще раз фільтрують. У бутлі всі компоненти доводять до 1 л середовища, підлужнюють 10 % розчином NaOH до рН 7,2-7,4, розливають по пробірках та нашаровують вазелінове масло. Готове середовище стерилізують в автоклаві при температурі 121 °C 20 хвилин. Здійснення способу проілюстровано прикладом зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus у запропонованому нами поживному середовищі. Чисту культуру штаму L. plantarum 8P-A3 висівали у пробірки з середовищем і культивували при температурі 37 °C 48 годин. Тривалість зберігання культури під шаром вазеліну складала 36 місяців при температурі 5 °C. Після терміну зберігання кількість життєздатність клітин штаму L. plantarum 8P-A3 визначали шляхом посіву на стандартне агаризоване поживне середовище МРС-4 і підрахунку пророслих колоній. Для цього 0,1 мл культури висівали на вказане середовище і культивували втермостаті при температурі 37 °C 48 годин в анаеробних умовах. Кількість мікроорганізмів роду Lactobacillus 3 4 становила 10 -10 КУО/мл, що є достатнім для умов зберігання культури. Штам L. plantarum 8P 1 UA 100850 U A3 зберіг стабільні морфологічні та культуральні властивості [Мікробна екологія людини з кольоровим атласом. Широбоков В.П., Янковський Д.С., Демент Г.С. – Київ, 2009. - С. 62]. Запропонований спосіб дозволяє подовжити терміни зберігання та активність мікроорганізмів роду Lactobacillus. 5 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 Спосіб зберігання мікроорганізмів роду Lactobacillus, що включає посів у напіврідке поживне середовище та покриття шаром вазелінового масла, який відрізняється тим, що готують середовище на основі ячмінного солоду та вводять пептон, цистин, лактозу, натрію хлорид, агар-агар та дистильовану воду у такому співвідношенні компонентів, г/л: ячмінний солод 100,0 пептон 2,0 цистин 0,1 лактоза 10,0 натрію хлорид 2,5 агар-агар 0,72 дистильована вода до 1 л. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2