Спосіб культивування мікроорганізмів роду lactobacillus

Реферат: Спосіб культивування мікроорганізмів роду Lactobacillus включає приготування поживного середовища з використанням пептону, цистину, агар-агару і дистильованої води. Готують поживне середовище на основі ячмінного солоду з додаванням лактози і натрію хлориду. UA 100849 U (54) СПОСІБ КУЛЬТИВУВАННЯ МІКРООРГАНІЗМІВ РОДУ LACTOBACILLUS UA 100849 U UA 100849 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до медицини, зокрема мікробіології, і може застосовуватися у науково-дослідній і лабораторно-діагностичній діяльності мікробіолога для культивування мікроорганізмів роду Lactobacillus із клінічного матеріалу та пробіотичних препаратів. Відомий спосіб культивування лактобацил на поживних середовищах, виготовлених на основі бичачого серця із сироваткою, лактобакагару і кров'яного агару є багатокомпонентним і кропітким [Антагоністична активність лактобактерій по відношенню до умовно-патогенних мікроорганізмів /Скляр Т.В., Крисенко О.В., Вінніков А.І. //Біологічні науки /6. Мікробіологія. www.rusnauka.com/5_NMIV…/33717.doc.htm]. Окрім цього, при додаванні компонентів бичачого серця із сироваткою та кров'яного агару створюються сприятливі умови для росту інших бактерій з клінічного матеріалу. Відомий як найближчий аналог спосіб культивування з використанням середовища МРС [Раскошная Т.А, Семенихина В.Ф. Питательные среды для культивирования ацидофильной молочнокислой палочки //Молочная промышленность.- 2010.- № 11. - С. 3-41]. Для культивування лактобацил і одержання їхньої біомаси використовується досить складне поживне середовище. У середовище МРС входять пептон, м'ясний екстракт, дріжджовий екстракт, твін-80, глюкоза, цистин, ацетат натрію, цитрат амонію, сульфат магнію, сульфат марганцю, натрію гідро фосфат, агар-агар, дистильована вода. Джерелом органічного азоту є пептон, м'ясний екстракт, в якості джерела вітамінів групи В - дріжджовий екстракт, джерела вуглецю - глюкоза. Активний ріст лактобацил забезпечують цистин, вітаміни групи В, твін-80 та солі амонію, магнію, марганцю. Однак на цьому середовищі важко нарощувати біомасу лактобацил. Також недоліком середовища є висока вартість та іноземне виробництво, що обмежує можливість його придбання практичними лабораторіями. В основу корисної моделі поставлено задачу створити більш доступний спосіб культивування мікроорганізмів роду Lactobacillus, який дозволить підвищити селективні властивості середовища. Поставлена задача вирішується тим, що у способі культивування мікроорганізмів роду Lactobacillus, що включає приготування поживного середовища з використанням пептону, цистину, агар-агару і дистильованої води, згідно з корисною моделлю, готують поживне середовище на основі ячмінного солоду з додаванням лактози і натрію хлориду, у такому співвідношенні компонентів, г/л: солод 100,0 пептон 2,0 цистин 0,1 лактоза 10,0 натрію хлорид 2,5 агар-агар 0,72 дистильована вода до1 л. Запропонованим способом оптимізується культивування мікроорганізмів роду Lactobacillus, оскільки середовище, отримане на основі ячмінного солоду, містить необхідний комплекс поживних субстратів та ростових факторів для лактобацил. Солод - продукт штучного пророщування злакових культур, що містить речовини, необхідні для життєдіяльності молочнокислих бактерій, серед яких вільні амінокислоти, вуглеводи (дисахариди і полісахариди), вітаміни групи В, мікроелементи (магній, калій, фосфор, залізо), ферменти, жирні кислоти. Незамінними факторами росту мікроорганізмів роду Lactobacillus є вітаміни групи В, амінокислоти, мікроелементи [О.В. Дишкантюк. Біотехнологія отримання молочної кислоти і її солей на основі вторинних продуктів переробки зерна: автореф. дис… канд. техн. наук: 03.00.20 /О.В. Дишкантюк. - Одеса, 2000. - 17 с.] Спосіб культивування мікроорганізмів роду Lactobacillus здійснюють таким чином. Основу поживного середовища складає солод. У колбі змішують 100,0 г солоду і 300,0 г дистильованої води і кип'ятять протягом 10-15хвилин, охолоджують, фільтрують. Натрію хлорид 2,5 г, лактозу 10,0 г, пептон 2,0 г, цистин 0,1 г, агар-агар 0,72 г розмішують у 100,0 г води, кип'ятять 2-3 хвилини до повного розчинення, додають до солоду та ще раз фільтрують. У бутлі всі компоненти доводять до 1 л середовища, підлужнюють 10 % розчином NaOH до рН 7,2-7,4, розливають по флаконах. Готове середовище стерилізують в автоклаві при температурі 121 °C 20 хвилин. На запропонованому нами поживному середовищі випробовували ріст штаму L. plantarum 8P-A3. Приготували розведення взятої культури згідно з оптичним стандартом мутності Макфарланду 5, висівали по 0,1 мл у 9,9 мл середовища Μ PC (середовище № 1) та у запропонованепоживне середовище (середовище № 2) і культивували 48 годин при температурі 37 °C. Оцінку активності росту на середовищі № 2 через 24 години проводили 1 UA 100849 U 5 10 15 шляхом висівання на щільне середовище. Чисельність мікроорганізмів роду Lactobacillus визначали, підраховуючи кількість КУО (колонієутворюючих одиниць) посіяної культури на стандартне агаризоване поживне середовище МРС-4. 0,1 мл біомаси з середовищ № 1 і № 2, -12 розводили фізіологічним розчином до 10 , з останніх шести розведень відбирали по 0,1 мл вмісту, проводили посів на середовище МРС-4 і культивували в термостаті при температурі 37 °C 48 годин в анаеробних умовах. Після інкубації проводили підрахунок пророслих колоній в 1 мл біомаси. 12 На середовищі № 2 максимальна чисельність штаму L. plantarum 8P-A3 сягала 2,5×10 9 КУО/мл, на середовищі № 1-9,3×10 КУО/мл. При дослідженні штаму L. plantarum 8P-A3, культивованому на пропонованому середовищі, виявлено стабільність морфологічних та культуральних властивостей лактобацил [Мікробна екологія людини з кольоровим атласом. Широбоков В.П., Янковський Д.С., Демент Г.С. - Київ. 2009. - С. 62]. Запропонований спосіб дає змогу використовувати при виготовленні середовища природну сировину, що містить достатню кількість поживних субстратів та ростових факторів, які забезпечують інтенсивний ріст мікроорганізмів роду, та знижує його вартість. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 Спосіб культивування мікроорганізмів роду Lactobacillus, що включає приготування поживного середовища з використанням пептону, цистину, агар-агару і дистильованої води, який відрізняється тим, що готують поживне середовище на основі ячмінного солоду з додаванням лактози і натрію хлориду, у такому співвідношенні компонентів, г/л: солод 100,0 пептон 2,0 цистин 0,1 лактоза 10,0 натрію хлорид 2,5 агар-агар 0,72 дистильована вода до 1 л. 25 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2